Remodelación vascular como modelo in vitro para el estudio del síndrome antifosfolipídico obstétrico / Vascular remodeling as in vitro model for the study of the obstetrical antiphospholipid syndrome

Introducción y Objetivo: Los anticuerpos antifosfolípidos (aAFL) se pueden unir a las células trofoblásticas o a las endoteliales, alterando la remodelación vascular y consecuentemente la placentación normal. El objetivo fue evaluar el efecto del suero de pacientes con síndrome antifosfolipídico (SAF) obstétrico en la interacción endotelio-trofoblasto utilizando un modelo in vitro tridimensional de remodelación vascular. Métodos: Las pacientes con aAFL fueron clasificadas en dos grupos: morbilidad gestacional y trombosis (MG/TV, n=7) y morbilidad gestacional sola (MG, n=8). Como control, se incluyeron mujeres sin aAFL con MG (MG/ aAFL-, n=10), y mujeres sanas (SHN, n=7). Células endoteliales HUVEC fueron cultivadas en Matrigel™ hasta formar estructuras tubulares (angiogénesis) y luego se adicionaron células trofoblásticas HTR8; estas células invaden las estructuras tubulares de las células endoteliales mejorando su estabilidad. Se evaluó el efecto de 10% del suero de las mujeres del estudio sobre esta interacción.

Effect of Alox-15 Polymorphism on GCF Levels of Lipoxin-A4 in Chronic Periodontitis: A Preliminary Study

Lipoxins play an important role in periodontal resolution, hence, investigation of genetic polymorphism of lipoxin gene may provide important information on the role of lipoxins in periodontal disease pathogenesis. The aim of this study was to investigate a polymorphism of C-to-T substitution at position c.-292 in ALOX15 (reticulocyte-type 15 lipoxygenase 1) gene in patients with chronic periodontitis and to associate the polymorphism with gingival crevicular fluid (GCF) lipoxin A4 (LXA4) levels. Forty-five chronic periodontitis and 45 periodontally healthy patients were included in this case-control study. Plaque index, calculus index, sulcus bleeding index, full mouth probing depth (PD) and clinical attachment loss (CAL) were recorded. GCF and blood samples were collected. GCF was analyzed for LXA4 levels by enzyme linked immunosorbant assay. Genotyping of ALOX15 polymorphism was studied using PCR. Mean LXA4 was lower in periodontitis group compared to the periodontally healthy group. There was a negative correlation between CAL and LXA4. The CC genotype was higher in the study group than in the control group. In the study group, mean CAL was significantly lower among individuals with the CT genotype. Mean LXA4 was significantly lower in CC genotype (45.0±7.11 ng/mL) compared to CT genotype (50.81±5.81 ng/mL) among the patients with periodontitis. The results suggest that LXA4 and c.-292T allele are associated with periodontal health. Polymorphisms in the ALOX15 gene may influence periodontal disease pathogenesis. Hence, investigation of such polymorphisms could benefit the evaluation of lipoxins role in periodontal disease.

Resumo Lipoxinas desempenham um papel importante na recuperação periodonta, portanto, a investigação do polimorfismo genético do gene da lipoxina pode fornecer informações importantes sobre o papel das lipoxinas na patogênese da doença periodontal. O objetivo deste estudo foi investigar um polimorfismo de substituição C-to-T na posição c-292 no gene ALOX15 (reticulócito-tipo 15 lipoxigenase 1) em pacientes com periodontite crônica e associar o polimorfismo com a lipoxina A4 (LXA4) do fluido gengival crevicular (FGC). Quarenta e cinco pacientes com periodontite crônica e 45 pacientes periodonalmente saudáveis foram incluídos neste estudo caso-controle. Índice de placa, índice de cálculo, índice de sangramento do sulco, profundidade de sondagem (PS) da boca toda e perda de inserção clínica (PIC) foram registrados. Amostras do FGC e de sangue foram coletadas. O FGC foi analisado quanto aos níveis de LXA4 por ensaio imunoadsorvente ligado à enzima (ELISA). A genotipagem do polimorfismo ALOX15 foi estudada por PCR. A média de LXA4 foi menor no grupo de periodontite em comparação com o grupo periodontalmente saudável. Houve uma correlação negativa entre PIC e LXA4. O genótipo CC foi maior no grupo de estudo do que no grupo controle. No grupo de estudo, a média de PIC foi significativamente menor entre os indivíduos com o genótipo CT. A média de LXA4 foi significativamente menor no genótipo CC (45,0 ± 7,11 ng / mL) em comparação com o genótipo CT (50,81 ± 5,81 ng / mL) entre os pacientes com periodontite. Os resultados sugerem que o alelo LXA4 e o alelo c-292T estão associados à saúde periodontal. Polimorfismos no gene ALOX15 podem influenciar a patogênese da doença periodontal. Assim, a investigação de tais polimorfismos pode beneficiar a avaliação do papel das lipoxinas na doença periodontal.

Suplementos dietarios en periodoncia: revisión bibliográfica narrativa / Additives in periodontics: a narrative review of the literature

Se realizó la revisión de los trabajos de investigación relacionados con la utilización de resolvinas y probióticos como complementos dietarios en la terapia periodontal, tanto en animales de experimentación como en humanos, describiendo el origen, la composición y los posibles mecanismos de acción. A partir de los trabajos revisados, se concluyó que las aludidas sustencias son, en la actualidad, un tema de investigación no traspolable a la clínica y que en el mediano plano, podrían potenciar las terapias actuales para patologías periodontales específicas.

Papel da Lipoxina A4 na fisiologia do sistema nervoso central e no dano cognitivo associado à neuroinflamação / Lipoxin A4 paper of the central nervous system physiology and cognitive impairment associated with neuroinflammation

O papel da lipoxina A4 (LXA4) no sistema imunológico é bem estudado, mas o papeldessa molécula na fisiologia do sistema nervoso central (SNC) só foi abordado recentemente.Como um modulador alostérico positivo, a LXA4 produz efeitos canabimiméticos e pode, dessaforma, estar envolvida em vßrios aspectos de funções fisiológicas reguladas pelo sistemaendocanabinóide (eCB). Nós investigamos essa hipótese analisando o comportamento decamundongos knockout (5-LO-/-) para a enzima 5-lipoxigenase (5-LO), que participa da síntesede LXA4. Ansiedade, consumo de ßgua e alimento, locomoção, nocicepção e memórias aversivassão comportamentos reconhecidos como sob controle do sistema eCB e foram avaliados nesteestudo. Nenhuma alteração foi observada no comportamento de 5-LO-/-em relação ao consumode ßgua e alimento e locomoção no teste de campo aberto. No entanto, o tratamento com LXA4produziu efeito ansiolítico no labirinto em cruz elevada. Além disso, inibição farmacológica da 5-LO demonstrou um efeito ansiogênico em animais idosos, mas não em adultos jovens, indicandoque a LXA4 endógena exerce um efeito regulatório sobre ansiedade de forma idade-dependente.Os animais 5-LO-/-apresentaram um aumento na sensibilidade e redução na tolerância à dor noteste de sensibilidade ao choque. Ainda, uma disfunção em memória de curto prazo e extinção dememória no teste de esquiva inibitória foi observada nos animais 5-LO-/-, indicando que a LXA4pode agir na facilitação do aprendizado...

The role of lipoxin A4 (LXA4) in the immune system is well studied, however the part thismolecule plays in central nervous system (CNS) physiology has only recently been addressed.LXA4, as a CB1 allosteric enhancer, has a cannabimimetic effect and may therefore be involvedin various aspects of endocannabinoid system (eCB) physiological functions. We investigatedthis reasoning by analyzing the behavior of 5-lipoxygenase (5-LO) knockout mice (5-LO-/-).Anxiety-like behavior, appetitive behavior, locomotion, nociception and learning and memory areall known to be under control of the eCB system and were assessed in this study. No alterationwas observed in the behavior of 5-LO knockout mice regarding appetitive behavior, measured byfood and water intake, or locomotion in the open field test. However, treatment with LXA4produced an anxiolytic-like effect on the elevated plus maze. Further, pharmacological inhibitionof 5-LO showed an anxiogenic-like effect in aged, but not adult mice, indicating that endogenousLXA4 has an age-dependent effect on the modulation of anxiety-like behavior. 5-LO-/- micepresented an increase in pain sensitivity and a decrease in pain tolerance in the foot shocksensitivity test. Interestingly, the animals also presented impairment in short-term memory andextinction learning in the step-down inhibitory avoidance task, pointing out that LXA4 may act inthe facilitation of fear learning. These data are of great importance to the possible use of LXA4 astreatment to neuroinflammation induced cognitive impairment.The study of sepsis reveals that an inflammatory stimulus can induce the exacerbatedproduction of pro-inflammatory cytokines in the CNS, which causes neuroinflammation andcognitive impairment...

Efeito do veneno de Crotalus durissus terrificus no edema crônico induzido na pata de camundongos pela injeção de bacilo Calmette-Guérin (BCG) / Effect of the Crotalus durissus terrificus in edema chronic induced in mice paw by the injection of bacilo Calmette-Guérin (BCG)

Diferentemente do observado em outros envenenamentos por serpentes da família Viperidae, nos causados pela Cdt não se observam sinais inflamatórios significativos no local da picada. Estudos prévios mostram que o VCdt inibe a resposta inflamatória aguda e algumas atividades biológicas de macrófagos, principal célula do processo inflamatório crônico. Nesse trabalho verificou-se o efeito do VCdt sobre o edema de pata crônico induzido pela injeção intraplantar de BCG em camundongos. Na concentração utilizada, o BCG evoca um edema crônico que é significativamente inibido pelo pré-tratamento dos animais com o VCdt (s.c.). Essa inibição persistiu por todo o período estudado (15 dias). O grupo que recebeu o veneno 1 h após a injeção de BCG também apresentou perfil de edema inibido em relação ao grupo controle, de forma semelhante ao observado no grupo pré-tratado com o veneno. Os grupos tratados com o VCdt 6 ou 11 dias após a injeção do BCG apresentavam edema de magnitude semelhante até o dia da injeção do veneno, sendo observada uma inibição significativa desse edema no dias subseqüentes à injeção do veneno. Uma vez constatado esse efeito inibitório do VCdt sobre o edema inflamatório crônico induzido pelo BCG, estudou-se qual a fração do veneno seria responsável por esse efeito. Os resultados indicam que a crotoxina, e não outros componentes deste veneno seja a responsável por essa inibição. Estudando-se possíveis mecanismos envolvidos nessa inibição, a reversão da inibição induzida pelo VCdt observada em grupos pré-tratados com dexametazona e zileuton, sugerem fortemente a participação de mediadores originados na via das lipoxigenases, no efeito inibitório do VCdt sobre esse modelo de inflamação crônica. Em conclusão, os resultados indicam que a crotoxina do VCdt possua uma significativa ação inibitória sobre o edema crônico induzido pelo BCG, possivelmente pela geração de mediadores antiinflamatórios da via das lipoxigenases.

Papel da endotelina-1 na inflamação articular / Role of endothelin-1 in the joint inflammation

As endotelinas (ET) são peptídeos produzidos por uma grande variedade de células e exercem seus efeitos através da sua ligação aos seus receptores de superfície ETA e ETB. Foi demonstrado que os níveis de ET-1 estão aumentados no plasma e no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide (AR), uma doença autoimune crônica caracterizada por influxo celular, formação de edema e destruição articular. No entanto, apesar do aumento na produção de ET-1, o papel destes peptídeos durante a AR permanece pouco compreendido. O objetivo central deste estudo foi avaliar o papel das ET na migração celular e na formação de edema utilizando o modelo murino de artrite induzida por zymosan (AIZ). Nós observamos que a expressão de RNAm prepro-ET-1 encontra-se aumentada durante a AIZ e que o bloqueio dos receptores ETA e ETB reduziu significativamente a formação de edema, o recrutamento de neutrófilos para articulação e a produção de TNF-alfa, CXCL-1 e LTB4. Nós ainda demonstramos que o estímulo in vivo com ET-1 foi capaz de induzir a formação de edema, o recrutamento de neutrófilos e a produção de TNF-alfa, enquanto nossos dados in vitro demonstraram que a ET-1 é um potente estímulo quimiotático para neutrófilos. Em seguida, nós avaliamos os efeitos da lipoxina A4 (LXA4), um mediador lipídico pró-resolutivo e anti-inflamatório, durante a AIZ, focando nos efeitos da LXA4 sobre a expressão de ET-1 e sobre os efeitos próinflamatórios induzidos por ET-1 tanto in vivo quanto in vitro. O pré-tratamento com LXA4 reduziu a formação de edema, o influxo de neutrófilos, a expressão de RNAm para prepro-ET-1 e a produção articular de CXCL-1, LTB4 e TNF-alfa na articulação durante a AIZ. De acordo, o BML-111 (agonista do receptor LXA4) e o ácido acetil salicílico (AAS; responsável pela produção endógena de 15-epilipoxina) inibiram significativamente a formação de edema e o recrutamento de neutrófilos para a articulação estimulada com zymosan. Observamos também que o pré-tratamento in vivo com LXA4 durante a inflamação articular induzida por ET-1 inibiu o influxo celular, a formação de edema e a produção de TNF-alfa no lavado articular, enquanto o estímulo in vitro com LXA4 inibiu a ativação e a migração de neutrófilos induzida por ET-1. Resultados prévios obtidos durante a minha dissertação de mestrado demonstraram que uma fração enriquecida em tetranortriterpenóides obtida a partir da semente de Carapa guianensis Aublet apresentava um importante efeito anti-inflamatório na AIZ. No presente trabalho, nós demonstramos que a gedunina, uma das substâncias presentes na semente de C. guianensis, reduziu significativamente o influxo e a ativação celular induzidos por zymosan no líquido sinovial, que foi acompanhado pela diminuição da hipernocicepção e da produção de importantes mediadores inflamatórios envolvidos na AR, dentre eles a ET-1. Estudos in vitro demonstraram ainda que o tratamento com a gedunina foi capaz de impedir a ativação e a quimiotaxia de neutrófilos estimulados com ET-1. Tomados em conjunto, nossos dados demonstram que i) as ET exercem um papel pró-inflamatório central durante a AIZ, através da indução da produção de mediadores inflamatórios, formação de edema e migração de neutrófilos para as articulações inflamadas; ii) a LXA4 exerce importantes efeitos anti-inflamatórios durante a AIZ através da regulação da expressão e dos efeitos pró-inflamatórios in vitro e in vivo induzidos pela ET-1; iii) a gedunina exerce efeitos antiinflamatórios e anti-nociceptivos durante a AIZ e é capaz de inibir a expressão e a atividade de ET-1.

Mecanismos inatos de regulação da IL-12 durante a infecção por Mycobacterium tuberculosis / Innate mechanisms of regulation of IL-12 during Mycobacterium tuberculosis infection

A citocina IL-12 desempenha um papel importante na indução de uma rede de genes da resposta imune envolvidos na resistência a infecções por patógenos intracelulares. IL-12, citocina produzida principalmente por células dendríticas (DCs) e fagócitos, é uma das citocinas responsáveis pela ativação de uma resposta do tipo Thl, levando à produção de IFN-y e subsequente ativação de macrófagos, que se tornará um ambiente desfavorável para o sobrevivência de agentes invasores. Um exemplo desses microorganismos é o Mycobacterium tuberculosis, um importante patógeno humano causador da tuberculose. O M tuberculosis induz a produção de IL-12 em células apresentadoras de antígeno profissionais, entretanto, os mecanismos envolvidos na regulação dessa citocina durante o curso da infecção pelo bacilo não são complementamente entendidos. O objetivo geral desse projeto de tese é investigar os mecanismos imunes inatos que controlam a produção de IL-12 em resposta ao M tuberculosis. A hipótese testada foi que os receptores do tipo Tol! (TLR) e as lipoxinas são mediadores centrais da regulação de IL-12 influenciando a resistência/susceptibilidade ao bacilo. Um modelo experimental de infecção pulmonar e um modelo de infecção in vitro foram usados para esse propósito. amundongos deficientes em MyD88 se mostraram altamente susceptíveis à infecção via aerosol com M tuberculosis, implicando assim, a sinalização via TLR/IL-IR como um determinante da resposta do hospedeiro contra esse importante patógeno humano. Associado ao aumento de susceptibilidade, pulmões dos animais deficientes em MyD88 infectados com o bacilo apresentaram um significativa redução na indução de IL-12 e células T CD4+ secretoras de IFN-y. Observou-se também, que DCs de camundongos deficientes em MyD88 apresentaram uma falha na produção de IL-12 em resposta ao M tuberculosis in vitro. Apesar de trabalhos recentes indicarem que M tuberculosis contêm diversos ligantes como PIMs e DNA, os quais, podem...

New insights into the anti-inflammatory actions of aspirin- induction of nitric oxide through the generation of epi-lipoxins

Aspirin has always remained an enigmatic drug. Not only does it present with new benefits for treating an ever-expanding list of apparently unrelated diseases at an astounding rate but also because aspirin enhances our understanding of the nature of these diseases processe. Originally, the beneficial effects of aspirin were shown to stem from its inhibition of cyclooxygenase-derived prostaglandins, fatty acid metabolites that modulate host defense. However, in addition to inhibiting cyclooxygenase activity aspirin can also inhibit pro-inflammatory signaling pathways, gene expression and other factors distinct from eicosanoid biosynthesis that drive inflammation as well as enhance the synthesis of endogenous protective anti-inflammatory factors. Its true mechanism of action in anti-inflammation remains unclear. Here the data from a series of recent experiments proposing that one of aspirin's predominant roles in inflammation is the induction of nitric oxide, which potently inhibits leukocyte/endothelium interaction during acute inflammation, will be discussed. It will be argued that this nitric oxide-inducing effects are exclusive to aspirin due to its unique ability, among the family of traditional anti-inflammatory drugs, to acetylate the active site of inducible cyclooxygenase and generate a family of lipid mediators called the epi-lipoxins that are increasingly being shown to have profound roles in a range of host defense responses.

Lipoxin agonists: turn right! to path of resolving neutrophil

An impressive array of cellular and molecular adaptive responses achieves homeostasis. The inflammatory reaction is an adaptive response triggered by an insult to culminate into the overt cardinal signs of inflammation, eventually leading to resolution and returning the organism back to its original centered state. This article focuses on some aspects of the lipoxin A4 signaling pathway during the resolution phase, to better understand molecular mechanisms by which a neutrophil directs an inflammatory reaction to switch off and resume homeostasis. Defining the resolution state of a neutrophil at the molecular level will aid in treatments of diseases that are associated with an exaggerated and uncontrolled inflammation.