Estudo do papel dos lipídios derivados de schistosoma mansoni na ativação e polarização de macrófagos / Study of the role of lipids derived from Schistosoma mansoni in activation and polarization of macrophages

A esquistossomose mansônica, endemia parasitária típica das Américas, Ásia e África, é causada pela infecção de trematódeos da espécie Schistosoma mansoni. A infecção por este trematódeo induz no hospedeiro a formação de granulomas e uma potente polarização da resposta imune para o tipo Th2. Os helmintos podem ser apresentados em diferentes estágios do seu ciclo de vida dentro de um hospedeiro humano, e cada estágio do desenvolvimento pode apresentar diferentes combinações de glicoconjugados reconhecidos de diferentes formas pelo hospedeiro. Estudos recentes do nosso grupo demonstraram que lipídeos de S. mansoni, incluindo a lisofosfatidilcolina, possuem atividade imunomoduladora. No presente trabalho investigamos o papel imunomodulador dos lipídeos de Schistosoma mansoni, em especial a LPC, na ativação de macrófagos e os possíveis mecanismos envolvidos neste processoDemonstramos que a lisofosfatidilcolina (LPC) esquistossomal estimula a formação de corpúsculos lipídicos de forma dependente de TLR2 em macrófagos peritoneais após 24 h de estimulação in vitro, ao mesmo tempo em que induz aumento na expressão desse receptor. Entretanto, a LPC não induz aumento na produção de óxido nítrico (NO) em macrófagos, e em altas concentrações foi capaz de inibir a indução de NO gerada por LPS. Além disso, a LPC esquistossomal induziu em macrófagos um perfil de ativação do tipo M2, observado pelo aumento da expressão de arginase-1 e produção de IL-10 e PGE2. A participação do receptor nuclear PPARgama na resposta de macrófagos frente a LPC esquistossomal foi investigada. Através de diferentes técnicas demonstramos que a LPC induz aumento da expressão de PPARgama em macrófagos...

Schistosomiasis mansoni, an endemic parasitic disease typical of the Americas, Asia andAfrica, is caused by infection of trematode species of Schistosoma mansoni. The trematodeinfection in the host induces the formation of granulomas and potent polarization of Th2-typeimmune response. Helminths can be presented in different stages of their life cycle in ahuman host, and each stage of development can have different combinations of differentforms of glycoconjugates recognized by the host. Recent studies from our group demonstratedthat lipids of S. mansoni, including lysophosphatidylcholine, have immunomodulatoryactivity. In the present work, we investigated the immunomodulatory role of lipids ofSchistosoma mansoni in the activation of macrophages and the possible mechanisms involvedin this process. We demonstrated that lysophosphatidylcholine (LPC) from S. mansonistimulates the formation of lipid bodies in peritoneal macrophages in a TLR2 dependentmanner after 24 h of in vitro stimulation, while it induces increased expression of thisreceptor. However, LPC failed to induce increased production of nitric oxide (NO) inmacrophages and in high concentrations was able to inhibit the induction of NO generated byLPS. Moreover, the schistosomal-derived LPC induced in macrophages an profile of M2activation observed by increased expression of arginase-1, and production of IL-10 andPGE2. Participation of the nuclear receptor PPAR gamma in macrophage response againstLPC was investigated. Through various techniques we demonstrated that the LPC inducesincreased expression of PPAR gamma in macrophages...

Efecto de la lisofosfatidilcolina en la reacción del acrosoma de espermatozoides caninos / Effect of lysophosphatidylcholine on acrosome reaction in canine spermatozoa

Los lisofosfolípidos desestabilizan la membrana plasmática del espermatozoide y promueven su fusión con la membrana acrosómica externa, acelerando la reacción del acrosoma (RA). La lisofosfatidilcolina (LC) ha sido utilizada para inducir la RA en espermatozoides capacitados de diferentes mamíferos. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la LC en la inducción de la RA en espermatozoides caninos. Se utilizaron diferentes concentraciones de LC (0, 100, 200 y 300 µg/mL) por 15 minutos para inducir la RA en espermatozoides incubados por 0, 3 y 4 horas en un medio capacitante (mCCM). La vitalidad y el estado acrosomal se determinó por la técnica de doble fluorescencia Aglutinina de Pisum sativum con Isotiocianato de Fluoresceína (PSA-FITC) y Hoechst 33258. La prueba de análisis de varianza (ANOVA) fue utilizada para el análisis estadístico. Concentraciones de 200 y 300 µg/mL de LC reducen significativamente (P<0,05) la vitalidad espermática. Los porcentajes de espermatozoides vivos con RA entre los grupos tratados con 0 y 100 µg/mL de LC a las 0 horas (21,0 ± 4,2 por ciento vs 21,0 ± 6,6 por ciento), a las 3 horas (43,8 ± 4,7 por ciento vs 49,1 ± 5,2 por ciento) y a las 4 horas de incubación (51,3 ± 14,8 por ciento vs 57,6 ± 9,9 por ciento) no presentaron diferencias estadísticamente significativas (P>0,05). Sin embargo, se observó un incremento significativo (P<0,05) en los porcentajes espermatozoides vivos reaccionados a las 3 y 4 horas de incubación con respecto a los imcubados 0 horas. Se concluye que la LC (100 µg/mL) no ejerce un efecto significativo en la inducción de la RA en espermatozoides caninos incubados en medio mCCM sin glucosa

Lipids shed into the culture medium by trypomastigotes of Trypanosoma cruzi

Trypomastigote forms of Trypanosoma cruzi were metabolically labeled with [14C]-ethanolamine and [3H]-palmitic acid. Lipids shed to the culture medium were analyzed and compared with the parasite components. Phosphatidylcholine and lysophosphatidylcholine accounted for 53 per cent of the total incorporated precursor. Interestingly, phosphatidylethanolamine and its lyso derivative lysophosphatidylethanolamine, although present in significant amounts in the parasites, could not be detected in the shed material. Shed lipids were highly enriched in the desaturated fatty acids C16:1 and C18:1 when compared to the total fatty acid pool isolated from the parasites.

Cuantificación de lecitina en líquido amniótico mediante el efecto lítico de la lisolecitina / Quantification of lecithin in amniotic fluid by the litic effect of lysolecithin

Se describe un método para determinar lecitina en líquido amniótico, el cual se basa en la acción de la fosfolipasa A2 sobre la lecitina originando lisolecitina, que en presencia de una suspensión de eritrocitos, produce ruptura de la membrana de los mismos. La concentración de lecitina se obtiene espectrofotométricamente a 500 nm, determinando la disminución de absorbancia que se produce entre los 20 y 100 segundos. El método es relativamente sencillo, rápido, económico, preciso, exacto y requiere solamente 100 µL de muestra. El análisis comparativo con un método enzimático mostró un coeficiente de correlación r = 0,943 y una ecuación de regresión lineal y = 0,975x + 0,486. El método presenta coeficientes de variación día a día de 3,5 y 4,7 por ciento para concentraciones de lecitina de 14,0 y 5,3 mg/dL, respectivamente. El intervalo analítico es de 15,0 mg/dL. La sangre, meconio y hemoglobina producen interferencia negativa

Purification and properties of a cardioactive toxin, cardioleputin, from stonefish, Synanceja verrucosa

Cardioleputin, a new cardioactive toxin, was purified from a stonefish venom using column chromatographies. The purified toxin was found to be an unstable protein that was susceptible to heat and freeze-thawing. This protein showed to have a molecular size of 46,000 daltons, and its amino acid composition was rich in serine and glycine, but low in basic amino acids. The crude venom induced a sudden drop in blood pressure and heart rate of rats right after administration. Both the blood pressure and heart rate returned to their original values as time elapsed, and thereafter continued to show a gradual decrease. In addition, crude venom actively affected the contractile response and suppressed the heart rate of guinea pig atria. The purified toxin caused irreversible inotropical and chronotropical increases in guinea pig atria. The action of the toxin on the atria was completely different from that of lysolecithin. It might be suggested that the toxin acts on the Ca++ ion channel of the atrial membrane.

Degradação aumentada dos fosfolipídios da membrana na esquizofrenia: implicações para a hipótese da hipofrontalidade / The increased breakdown of membrane phospholipids in schizophrenia: implications for the hypothesis of hypofrontality

A fosfolipase A2 (PLA2) é a enzima chave no metabolismo dos fosfolipídios das membranas celulares. Nós, bem como outros autores (Noponen e cols.(19)), descrevemos que a atividade da PLA2 no soro e no plasma de pacientes esquizofrênicos está aumentada quando comparada com a de controles psiquiátricos e normais. Este aumento na atividade da PLA2 pode ser inibido através do tratamento com neurolépticos. A degradação dos fosfolipídios da membrana pela PLA2 dá origem a produtos citotóxicos tais como a lisofosfatidilcolina (LPC). Numa série de estudos independentes, constatamos que as plaquetas de pacientes esquizofrênicos apresentam atividade aumentada da PLA2, conteúdo de fosfolipídios de membrana diminuído e concentrações de LPC aumentadas, sugerindo a ocorrência de degradação acelerada dos fosfolipídios no transtorno esquizofrênico. Para esclarecer as ações da PLA2 no cérebro, nós investigamos os efeitos produzidos por aplicações intracerebrais de PLA2 na neurotransmissão dopaminérgica em ratos, utilizando o modelo do comportamento rotacional de Ungerstedt. Os movimentos circulares induzidos por agonistas DA após aplicações unilaterais de PLA2 na pars compacta da substantia nigra foram registrados. A administração de apomorfina uma, três e cinco semanas após a injeção intranigral de PLA2 induziu rotações contralaterais, indicando que a aplicação de PLA2 havia produzido uma inibição duradoura da via dopaminérgica nigroestriatal ipsilateral. Tomados em conjunto, nossos achados sugerem que (a) pelo menos um subgrupo de pacientes esquizofrênicos apresenta atividade aumentada de PLA2 e, em conseqüência, degradação acelerada dos fosfolipídios da membrana plaquetária, e (b) em experimentos animais, a aplicação intranigral de PLA2 inibiu a atividade dopaminérgica. Qual é a relação entre estes achados e a biologia da esquizofrenia? Uma hipótese segundo a qual os pacientes esquizofrênicos apresentariam atividade dopaminérgica diminuída no córtex frontal já foi aventada. Estudos espectrográficos recentes evidenciaram uma degradação acelerada de fosfolipídios de membrana no córtex frontal de esquizofrênicos. A atividade aumentada da PLA2 poderia acelerar a metabolização de fosfolipídios no córtex frontal e assim contribuir para a postulada hipoatividade dopaminérgica do sistema mesocórticoðpréðfrontal na esquizofrenia