Betaine supplementation improved L-threonine fermentation of Escherichia coli THRD by upregulating zwf (glucose-6-phosphate dehydrogenase) expression

BACKGROUND: The supplementation of betaine, an osmoprotective compatible solute, in the cultivation media has been widely used to protect bacterial cells. To explore the effects of betaine addition on industrial fermentation, Escherichia coli THRD, an L-threonine producer, was used to examine the production of L-threonine with betaine supplementation and the underlying mechanism through which betaine functions was investigated. RESULTS: Betaine supplementation in the medium of E. coli THRD significantly improved L-threonine fermentation parameters. The transcription of zwf and corresponding enzyme activity of glucose-6-phosphate dehydrogenase were significantly promoted by betaine addition, which contributed to an enhanced expression of zwf that provided more nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) for L-threonine synthesis. In addition, as a result of the betaine addition, the betaine-stimulated expression of enhanced green fluorescent protein (eGFP) under the zwf promoter within a plasmid-based cassette proved to be a transcription-level response of zwf. Finally, the promoter of the phosphoenolpyruvate carboxylase gene ppc in THRD was replaced with that of zwf, while L-threonine fermentation of the new strain was promoted by betaine addition. Conclusions: We reveal a novel mode of betaine that facilitates the microbial production of useful compounds. Betaine supplementation upregulates the expression of zwf and increases the NADPH synthesis, which may be beneficial for the cell growth and thereby promote the production of L-threonine. This finding might be useful for the production of NADPH-dependent amino acids and derivatives in E. coli THRD or other E. coli strains.

Estimação de valores genéticos para codornas europeias em função dos níveis da relação treonina: lisina da dieta: do nascimento aos 21 dias de idade / Estimation of breeding values for European quails in function of threonine: lysine ratios of diet: from birth to 21 days of age

O presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a sensibilidade dos valores genéticos dos pesos corporais e as características de carcaças de codornas europeias às mudanças do gradiente ambiental (níveis da relação treonina com a lisina das dietas), do nascimento aos 21 dias de idade, por meio de modelos de regressão aleatória com diferentes classes de variância residual. Os dados utilizados neste estudo são provenientes de 915 codornas de corte da linhagem LF1 e 839 da linhagem LF2, pertencentes ao Programa de Melhoramento Genético da Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri. Foram avaliados os pesos corporais e os rendimentos da carcaça das aves. As sensibilidades dos valores genéticos às mudanças nos níveis da relação treonina:lisina (interação genótipo x ambiente) foram obtidas por modelos de regressão aleatória (utilizando normas de reação) por meio do programa Wombat, que utiliza o princípio da máxima verossimilhança restrita (REML). O modelo de regressão aleatória que considerou duas classes de variância residual foi o mais indicado para a maioria das análises realizadas. Verificaram-se alterações na classificação dos valores genéticos para as duas linhagens de codornas de corte estudadas. Esse comportamento indica sensibilidade de valores genéticos aditivos às mudanças nutricionais, o que caracteriza a existência de interação genótipo x ambiente. A predição dos valores genéticos deve ser feita com o mesmo nível da relação treonina:lisina da dieta com a qual as codornas serão alimentadas no sistema de produção.(AU)

This research was carried out to evaluate the sensitivity of breeding values of body weight and carcass traits in two lines of European quails (LF1 and LF2) to changes in the environment gradient (levels of threonine: lysine ratio of diets) from hatch to 21 days of age in two lines LF1 and LF2 using Random Regression Models with different classes of residual variance. Records are from 915 quails of line LF1 and 839 of line LF2 belonging to the Breeding Improvement Program of Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri. Live body weight and weights and yields of carcass, breast, and thigh and drumstick were measured. The sensitivities of breeding values to changes in threonine: lysine ratios (genotype x environment interaction) of diets were obtained by random regression models (reaction model) using the WOMBAT program using the Restricted Maximum Likelihood principle. Model considering two classes of residual variance showed the best goodness of fit. The Reaction Norms analyses indicated changes in the ranking of breeding values for both lines suggesting quails selected in one level of threonine: lysine ratio will not express all their genetic potential if fed different threonine: lysine ratio diets. This behavior indicates sensitivity of breeding values to changes in the nutrition characterizing the genotype by environment interaction. The prediction of breeding values must be performed using the same level of threonine: lysine ratio in diet the quails will be fed in the production system.(AU)

Morfometria intestinal em codornas de corte alimentadas com treonina digestível / Intestinal morphometry in meat quails fed with digestible threonine

O objetivo deste estudo foi avaliar a morfometria intestinal por meio da inclusão de níveis de treonina digestível na dieta de codornas para corte em crescimento. O delineamento experimental adotado foi o inteiramente ao acaso, em esquema fatorial: quatro níveis nutricionais e três segmentos do intestino com dez repetições. Foram coletadas amostras dos três segmentos do intestino delgado. As variáveis estudadas foram área e altura das vilosidades intestinais, profundidade de cripta e relação vilo e cripta. No estudo da altura da vilosidade, foi obtida interação significativa para todas as idades estudadas. A profundidade da cripta em codornas de corte aos 21 dias de idade mostrou-se significativa para as variáveis inclusão de treonina na dieta e para a porção do intestino estudada. Na profundidade da cripta aos 42 dias, ficou evidenciada uma interação significativa entre níveis de inclusão de treonina na dieta e porção do intestino delgado. No estudo da relação altura de vilosidade e profundidade de cripta em codornas aos 21 dias de idade, foram encontrados resultados significativos para a interação tratamento e porção do intestino. Aos 21 e aos 42 dias de idade, a suplementação de 1,04 e 0,78%, respectivamente, de treonina digestível na dieta promove melhores resultados para morfometria intestinal.(AU)

The aim of the study was to evaluate intestinal morphology data by including different levels of threonine in the diet of meat quails in the growing phase. The experimental design was completely randomized in a factorial arrangement: four nutritional levels and three intestinal segments with ten repetitions. Samples were collected to obtain morphometry data (villi and crypt) of the three segments of the small intestine (duodenum, jejunum, and ileum). In the study of the intestinal villus height a highly significant interaction was obtained for all ages studied. A crypt depth was evidenced at 42 days with a significant interaction between levels of inclusion of threonine in the diet and small intestine. In the study of the relationship villus height and depth crypt quails at 21 days of age, the results were significant for the interaction treatment (T) and part of the intestine. At 21 and 42 days of age, supplementation of 1.04 and 0.78% respectively of threonine in the diet promotes better outcomes for intestinal morphology.(AU)

Desempenho e rendimento de carcaça em frangos de corte de um a 46 dias alimentados com dietas contendo diferentes níveis de valina e reduzido teor proteico / Performance and carcass yield of broilers from 1 to 46 days fed diets containing different levels of valine and reduced protein content

Este estudo teve como objetivo avaliar as relações de valina:lisina digestíveis em dietas com teor reduzido de proteína bruta (PB) e os efeitos dessa redução sobre desempenho e rendimento de carcaça em frangos de corte. Foram utilizados 1200 pintos machos seguindo modelo inteiramente ao acaso, com seis tratamentos de seis repetições (exceto controle, com 10 repetições), compostos por 30 aves cada. O tratamento controle (T1) foi formulado conforme os níveis de proteína bruta e aminoácidos (AAs) recomendados por Rostagno et al . (2011), e os demais tratamentos (T2 a T6) tiveram seus níveis de PB reduzidos (4% em relação ao controle) e variaram em função da relação valina:lisina digestíveis, com cinco níveis equidistantes em intervalos de 0,07:1, variando de 0,63:1 e 0,91:1 (dietas até 21 dias) e de 0,64:1 e 0,92:1 (dietas após 21 dias). As seguintes características de desempenho foram avaliadas: ganho de peso, consumo de ração, conversão alimentar, viabilidade criatória e índice de eficiência produtiva. Aos 46 dias de idade, seis animais por repetição foram abatidos para determinação de rendimento de carcaça e de cortes comerciais. As diferentes relações valina:lisina digestíveis não influenciaram o desempenho dos animais (P>0,05) para nenhuma característica avaliada. A redução proteica piorou a conversão alimentar dos animais (P≤0,05) até os 21 dias. Os resultados sugerem que os níveis de valina utilizados não afetam o desempenho dos animais, apenas o rendimento de peito e que, portanto, a redução proteica não é recomendada durante as três primeiras semanas de criação.

This study aimed to evaluate valine:lysine ratios in diets with reduced content of crude protein and the effects of this reduction on the performance of broiler chickens. 1200 male chicks were used following a complete randomized design with six replicates of six treatments (except control, with 10 replicates), each one with 30 chicks. The control treatment (T1) was formulated following levels of crude protein (CP) and the amino acids (AAs) recommended by Rostagno et al. (2011), and the other treatments (T2 to T6) had reduced levels of CP (4 % compared to control) and varied in proportion valine:lysine, with 5 levels at equidistant intervals 0.07:1 ranging from 0.63:1 to 0.91:1 (up to 21 days) and from 0.64:1 to 0.92:1 (after 21 days). The performance characteristics measured were: weight gain, feed intake, feed conversion, viability and productive efficiency index. At 46 days six animals per replicate were slaughtered for evaluation of carcass and commercial cuts. The different valine:lysine ratios did not affect animal performance (P>0.05). Reducing protein impaired feed conversion (P≤.05) up to 21 days. The results suggest that levels of valine used did not affect the broilers' performance, however, breast meat yield and reduced protein are not recommended during the first three weeks.

Exigência de treonina digestível para codornas de corte no período de 15 a 35 dias de idade / Digestible threonine requirements for quail meat from 15 to 35 days of age

Estimou-se a exigência de treonina digestível (ThrD) para codornas de corte (Coturnix coturnix sp.) em fase de crescimento no período de 15 a 35 dias de idade. Foram utilizadas 1020 codornas com 15 dias de idade, não sexadas, distribuídas em um delineamento experimental inteiramente ao acaso, com seis porcentagens de adição de treonina digestível - 0,93; 1,00; 1,07; 1,14; 1,21 e 1,28% na dieta - , cinco repetições e 34 codornas por unidade experimental. Não houve efeito sobre o desempenho, o rendimento e a composição química da carcaça e sobre o balanço de nitrogênio com o aumento da porcentagem de treonina digestível na dieta. Houve aumento linear no consumo de treonina e no custo da ração por quilograma de peso vivo ganho com o aumento da porcentagem de treonina digestível. Concluiu-se que o melhor nível de treonina digestível avaliado foi suficiente para atender as exigências de codornas de corte, no período de 15 a 35 dias de idade.

The digestible threonine (DThr) requirements for meat quails (Coturnix coturnix sp) during growing phase from 15 to 35 days of age were estimated, using 1,020 quails with 15 days of age, of both sexes, distributed in a completely randomized design, with six levels of digestible threonine - 0.93; 1.00; 1.07; 1.14; 1.21 and 1.28% in diet, five replications and 34 quails per experimental unit. There was no effect on performance variables, carcass yield and chemical composition and nitrogen balance with the studied increase in digestible threonine levels. There was a linear increase in threonine intake andfeed cost per kilogram of body weight gain with increasing levels of digestible threonine. It was concluded that the best level of threonine evaluated was sufficient to meet the requirements of meat quails, in the period from 15 to 35.

Identificação de resíduos de treonina e tirosina importantes na regulação da atividade do receptor P2X4 humano através de mutagênese sítio-dirigida / Identification of threonine and tyrosine residues important for human P2X4 receptor activity by site-directed mutagenesis

O receptor P2X4 (canal iônico controlado por adenosina-5'-trifosfato-ATP) está amplamente distribuído no sistema nervoso central e, após sua ativação, pode regular os níveis de cálcio intracelulares via permeação direta e por ativação de canais de cálcio voltagem-dependentes. Tem sido proposto que a atividade do receptor pode ser importante na plasticidade sináptica. Tendo em vista a importância do receptor P2X4, sobretudo na fisiologia do sistema nervoso central, é útil caracterizá-lo farmacologicamente e entender os mecanismos moleculares que regulam sua atividade. Examinamos o papel que resíduos específicos N- e C-terminais desempenham na atividade do receptor P2X4 humano, combinando técnicas de biologia molecular, bioquímica e patch-clamp em células de rim de embrião humano (células HEK-293T). Células HEK-293T expressando o receptor P2X4 wild-type apresentaram correntes iônicas, cujas amplitudes dependeram da concentração de ATP, fornecendo um valor de EC50 de 1,37 ± 0,21 µM. Os receptores mutantes E14A e D16A exibiram respostas ao ATP equiparáveis àquelas do receptor selvagem, ao passo que os mutantes Y15A e T17A não foram funcionais, apesar de serem expressos na membrana plasmática das células. A inibição de tirosina fosfatases por pervanadato diminuiu fortemente correntes induzidas por ATP. Subsequente análise de citometria de fluxo na presença de um anticorpo contra resíduos de fosfotirosina indicaram que, entre as células que expressam o receptor P2X4, a percentagem de células fosfo-tirosina-positivas é a mesma para os mutantes Y372A (86 ± 10%) e Y378A (79 ± 6.9%), mas substancialmente menor para os mutantes Y15A (35 ± 12%), Y367A (48 ± 6.4%) e Y372F (31 ± 1.7%), quando comparados com células que expressam o receptor wild-type (76 ± 5.6%). Resultados semelhantes foram obtidos quando quantificamos a expressão relativa de proteínas fosforiladas em resíduos de tirosina e expressamos através dos valores de intensidade de fluorescência média. Ensaios de western-blot revelaram que mesmo o mutante T17A é fosforilado em resíduos de treonina, sugerindo que o receptor P2X4 contém outros sítios de fosforilação. Entretanto, nenhum sinal de fosfotirosina foi detectado no receptor wild-type e nos mutantes, em que resíduos de tirosina foram substituídos por alanina ou fenilalanina. Não parece ser o resíduo Y15 o alvo de tal fosforilação, cabendo a ele um papel estrutural mais importante. Nossos dados também sugerem que a fosforilação em resíduos de tirosina de proteínas intermediárias regula a atividade do receptor P2X4

The human P2X4 receptor (ATP-gated ion channel) is widely distributed in the CNS and, after activation, participates in regulation of levels of intracellular calcium through direct permeation and activation of voltage-dependent calcium channels with well-defined functions including synaptic plasticity. Given the importance of the P2X4 receptor, especially in CNS physiology, we investigated the role that specific N- and C-termini residues play in human P2X4 receptor activity, by combining techniques of molecular biology, biochemistry and patch-clamping in human embryonic kidney cells (HEK-293T cells). HEK-293T cells expressing the wild-type P2X4 receptor showed ionic currents whose amplitudes depended on the ATP concentration, providing an EC50 value of 1.37 ± 0.21 mM. E14A and D16A receptor mutants exhibited responses to ATP comparable to those ones of wild-type receptor, whereas Y15A and T17A mutants were not functional, despite being expressed in the plasma membrane of cells. The inhibition of tyrosine phosphatases by pervanadate decreased strongly ATP-induced currents. Subsequent flow cytometry analysis in the presence of an antibody against phosphotyrosine residues indicated that, among the cells that express the P2X4 receptor, the percentage of phosphotyrosine-positive cells was the same for Y372A (86 ± 10%) and Y378A (79 ± 6.9%) mutants, however, substantially lower for Y15A (35 ± 12%), Y367A (48 ± 6.4%) and Y372F (31 ± 1.7%) mutants when compared with cells expressing the wild-type receptor (76 ± 5.6%). Similar results were obtained by quantifying the relative expression of phosphotyrosine proteins. Western blot assays revealed that even the T17A mutant was phosphorylated at threonine residues, suggesting that the human P2X4 receptor also contains further phosphorylation sites. However, no phosphotyrosine-antibody signal was detected in the wild-type receptor and mutants in which tyrosine residues were replaced by alanine or phenylalanine. The residue Y15 is supposedly not the target of such phosphorylation, despite its important structural role. However, the present work indicates that tyrosine phosphorylation of intermediate signaling proteins regulates P2X4 receptor activity

Relações treonina: lisina digestíveis para suínos na fase inicial, alimentados com rações de baixa proteína, calculadas de acordo com o conceito de energia líquida / Digestible threonine: lysine ratios for starting pigs fed low protein diets, considering net energy concept

Foram realizados dois experimentos com o objetivo de estudar, no primeiro, o efeito de diferentes relações treonina:lisina digestíveis (TL) sobre a utilização do nitrogênio (N) em suínos na fase inicial, dos 15 aos 30kg de peso, e, no segundo, o efeito dessas relações sobre o desempenho dos animais. No primeiro experimento, foi avaliado o balanço de nitrogênio, utilizando-se 20 suínos machos castrados, híbridos comerciais de média a alta deposição de tecido magro, com peso inicial de 23,0±4,1kg. Os suínos foram distribuídos em um delineamento experimental inteiramente ao acaso. As rações continham baixo nível de proteína (17,3 por cento), e as relações TL foram: 0,574; 0,624; 0,673; 0,722 e 0,772. A proteína bruta total excretada (PBTE), a proteína bruta retida (PBR) e a utilização líquida da proteína (ULP) apresentaram efeito quadrático, e os melhores valores nas relações foram 0,648; 0,648 e 0,649, respectivamente. A melhor relação TL foi 0,649 (média da PBR e ULP). No segundo experimento, foi avaliado o efeito dessa relação sobre o desempenho dos suínos na fase inicial. Foram utilizados 60 animais (30 machos castrados e 30 fêmeas) com peso inicial de 15,5±1,5kg, de características semelhantes ao primeiro experimento, distribuídos em um delineamento experimental inteiramente ao acaso, em esquema fatorial 5x2 (cinco relações TL e dois sexos, com dois animais por baia). Foram utilizadas seis baias por tratamento, com três de machos e três de fêmeas cada. Não houve efeito da relação TL sobre o consumo diário de ração e o ganho diário de peso, e houve efeito quadrático, com ponto de mínimo, sobre a conversão alimentar com a relação TL de 0,691. Os resultados indicam que a relação TL de 0,649 maximiza a retenção de nitrogênio e a relação TL de 0,691 permite melhor conversão alimentar para leitões dos 15 aos 30kg de peso.

Two experiments were carried out to evaluate the effect of digestible threonine:lysine ratio (TL) on nitrogen (N) use and on growth performance of starting pigs (15-30kg). Experiment I evaluated nitrogen balance using twenty high-lean commercial crossbred barrows, with initial weight of 23.0±4.1kg. Pigs were allotted in a randomized design. Diets were formulated with low crude protein levels (17.3 percent) and TL ratios were: 0.574; 0.624; 0.673; 0.722; and 0.772. Excreted crude protein (CPEX), crude protein retention (CPR), and net protein utilization (NPU) showed quadratic effect and the best TL ratio values were achieved at 0.648, 0.648, and 0.649, respectively. The best TL ratio was 0.649 (CPR and NPU means). Experiment II was carried out to examine the same TL ratio effects on the performance of pigs. Sixty pigs (30 barrows and 30 gilts), averaging 15.5±1.5kg, used in experiment II, were allotted in a randomized design, following a factorial scheme (5x2), being five TL ratios (same as in experiment I) and two genders. Six pens per treatment (three barrows and three gilts) were used. There was no effect of TL ratio on daily feed intake and on average weight gain. However, the feed:gain ratio showed a quadratic effect and the best TL ratio was achieved at 0.691. The results pointed out that the 0.649 TL ratio maximized nitrogen retention and the 0.694 TL ratio allowed a better feed conversion for starting pigs averaging 15 to 30kg of b.w.

Níveis de treonina digestível para suínos machos castrados, de alto potencial genético para deposição de carne, na fase de terminação / Digestible threonine levels for high genetic potential lean deposition finishing barrows

Avaliou-se o efeito de níveis de treonina digestível em rações sobre o desempenho e características de cacaça de suínos machos castrados, selecionados geneticamente, para deposição de carne na carcaça, na fase de terminação. Foram utilizados 70 animais, com peso inicial de 59,00+1,25kg, distribuídos em delineamento experimental de blocos ao acaso, com cinco tratamentos, sete repetições e dois animais por unidade experimental, sendo que na distribuição dos animais, foi adotado como critério o peso inicial. Os tratamentos foram níveis de treonina na ração (0,480; 0,504; 0,528; 0,554 e 0,572 por cento de treonina digestível). Não houve efeito (P>0,05) dos tratamentos sobre o ganho de peso, consumo de ração e conversão alimentar. Os níveis de treonina digestível não influenciaram (P>0,05) a porcentagem de carne e a espessura de toucinho na carcaça. Conclui-se que o nível de 0,480 por cento de treonina digestível, correspondente a relação de treonina digestível:lisina digestível de 60 por cento, atendeu as exigências de suínos machos castrados de alto potencial para deposição de carne na carcaça dos 60 aos 95kg.

An experiment was carried out to determine the effects of digestible threonine levels in ration on the performance and carcass traits of hogs genetically selected for lean deposition at finishing. Seventy barrows averaging an initial weight of 59.00+1.25kg were distributed in a randomized experimental block design with five treatments and seven replicates, being two animals per experimental unit. Initial weight was adopted as a criterion for animal distribution in the treatments, which were the levels of digestible treonine in the diet (0.480; 0.504; 0.528; 0.554; and 0.572 percent). No effect (P>0.05) was observed among the treatments on daily weight gain, daily feed intake, and feed conversion. Digestible threonine levels did not influence (P>0.05) lean and backfat thickness percentage. It can be concluded that the level of 0.480 percent of digestible treonine, corresponding to the rate digestible treonine:lysine 60 percent, supplied the requirments of high potential lean deposition barows from 60 to 95kg.

The importance of the Thr17 residue of phospholamban as a phosphorylation site under physiological and pathological conditions

The sarcoplasmic reticulum (SR) Ca2+-ATPase (SERCA2a) is under the control of an SR protein named phospholamban (PLN). Dephosphorylated PLN inhibits SERCA2a, whereas phosphorylation of PLN at either the Ser16 site by PKA or the Thr17 site by CaMKII reverses this inhibition, thus increasing SERCA2a activity and the rate of Ca2+ uptake by the SR. This leads to an increase in the velocity of relaxation, SR Ca2+ load and myocardial contractility. In the intact heart, ß-adrenoceptor stimulation results in phosphorylation of PLN at both Ser16 and Thr17 residues. Phosphorylation of the Thr17 residue requires both stimulation of the CaMKII signaling pathways and inhibition of PP1, the major phosphatase that dephosphorylates PLN. These two prerequisites appear to be fulfilled by ß-adrenoceptor stimulation, which as a result of PKA activation, triggers the activation of CaMKII by increasing intracellular Ca2+, and inhibits PP1. Several pathological situations such as ischemia-reperfusion injury or hypercapnic acidosis provide the required conditions for the phosphorylation of the Thr17 residue of PLN, independently of the increase in PKA activity, i.e., increased intracellular Ca2+ and acidosis-induced phosphatase inhibition. Our results indicated that PLN was phosphorylated at Thr17 at the onset of reflow and immediately after hypercapnia was established, and that this phosphorylation contributes to the mechanical recovery after both the ischemic and acidic insults. Studies on transgenic mice with Thr17 mutated to Ala (PLN-T17A) are consistent with these results. Thus, phosphorylation of the Thr17 residue of PLN probably participates in a protective mechanism that favors Ca2+ handling and limits intracellular Ca2+ overload in pathological situations.

Frequency of the allelic variant (Trp8Arg/Ile15Thr) of the luteinizing hormone gene in a Brazilian cohort of healthy subjects and in patients with hypogonadotropic hypogonadism

OBJETIVO: Avaliar a freqüência da variante alélica (Trp8Arg/Ile15Thr) do gene da subunidade b do hormônio luteinizante em um grupo de brasileiros saudáveis e em pacientes portadores de hipogonadismo hipogonadotrófico.CASUÍSTICA E MÉTODOS: Duzentos e dois adultos (115 mulheres) com função sexual preservada e 48 pacientes (24 mulheres) portadoras de hipogonadismo hipogonadotrófico foram submetidos a estudo molecular utilizando técnicas de reação em cadeia da polimerase seguida por digestão enzimática com as enzimas de restrição Nco I (para detecção da mutação pontual Trp8Arg) e Fok I (para detecção da mutação pontual Ile15Thr). Os níveis basais de hormônio luteinizante e FSH, testosterona ou estradiol foram dosados em 37 indivíduos normais (21 mulheres) e 27 pacientes portadores de hipogonadismo hipogonadotrófico (13 mulheres) pelo método imunofluorométrico (hLH-Spec and hFSH-Spec, AutoDELFIA, Wallac Oy, Turku, Finland).RESULTADOS: A variante alélica (Arg8/Thr15) do gene da subunidade b do LH apresentou freqüência similar nos indivíduos saudáveis (14.4%) e nos pacientes portadores de hipogonadismo hipogonadotrófico (16.6%). Não houve interferência da variante alélica do gene da subunidade b do LH nos níveis de LH dos indivíduos normais e dos pacientes portadores de hipogonadismo hipogonadotrófico.CONCLUSÃO: Este estudo indica que a variante alélicaArg8/Thr15 do gene da subunidade b do LH é um polimorfismo comum na população brasileira (14.4%). A freqüência similar dessa variante em indivíduos saudáveis e em portadores de hipogonadismo hipogonadotrófico exclui o papel da variante na etiologia do hipogonadismo hipogonadotrófico.

Are high-lysine cereal crops still a challenge?

The essential amino acids lysine and threonine are synthesized in higher plants via a pathway starting with aspartate that also leads to the formation of methionine and isoleucine. Lysine is one of most limiting amino acids in plants consumed by humans and livestock. Recent genetic, molecular, and biochemical evidence suggests that lysine synthesis and catabolism are regulated by complex mechanisms. Early kinetic studies utilizing mutants and transgenic plants that over-accumulate lysine have indicated that the major step for the regulation of lysine biosynthesis is at the enzyme dihydrodipicolinate synthase. Despite this tight regulation, recent strong evidence indicates that lysine catabolism is also subject to control, particularly in cereal seeds. The challenge of producing crops with a high-lysine concentration in the seeds appeared to be in sight a few years ago. However, apart from the quality protein maize lines currently commercially available, the release of high-lysine crops has not yet occurred. We are left with the question, is the production of high-lysine crops still a challenge?.

Limiting amino acids in wheat for growing-finishing pigs

Se realizaron cuatro experimentos con 136 cerdos cruzados (Landrace-Hampshire-Duroc) para determinar el orden de los tres primeros aminóacidos limitantes (AAL) en trigo para cerdos en crecimiento y finalización. Los tratamientos consistieron en adiciones de lisina, treonina y/o metionina a dietas base y una dieta testigo. En el Exp. 1. lisina incrementó la ganancia diaria de peso (GDP), consumo de alimento (CDA), lisina (CDL), treonina (CDT) y metionina (CDM), y mejoró la conversión alimenticia (C/G). La adición de treonina incrementó GDP y CDT, y mejoró C/G. Metionina incrementó el CDM, pero no afectó GDP o C/G. En el Exp. 2, treonina incrementó GDP y CDT, e incrementó C/G. La inclusión de metionina tendió a reducir GDP y a deprimir C/G. No hubo diferencias en GDP, CDA o C/G entre los cerdos bajo dieta base con lisina y treonina o dieta testigo; aunque los testigos tuvieron mayor CDT y CDM. En el Exp. 3, treonina sola no afectó GDP o C/G, pero combinada con metionina incrementó GDP y mejoró C/G. No hubo diferencias en GDP y C/G entre las dietas testigos y la adicionada con lisina y tronina. En el Exp. 4, treonina tendió a incrementar GDP y a mejorar C/G, mientras que metionina redujo GDP. La adición de treonina y metionina incrementó GDP, pero no afectó CDA ni C/G. Estos datos indican que, en trigo, lisina, y treonina son el primero y segundo AAL para cerdos en crecimiento y finalización. Metionina sola no limita el crecimiento de cerdos en dietas con base trigo, pero parece potenciar la respuesta de treonina en cerdos de finalización. Lisina y treonina pueden sustituir la pasta de soya en dietas con base trigo para cerdos en crecimiento y finalización.

Identificação de genes codificadores de serina/treonina fosfatases em Dictyostelium discoideum e caracterização funcional da proteína fosfatase do tipo 4 (PP4) / Identification of phosphatases serine/treonine genes coders in Dictyostelium discoideum and functional characterization of phosphatases protein type 4 (PP4)

As serina/treonina fosfatases (PPs) são enzimas responsáveis pela desfosforilação de resíduos de fosfoserina e/ou fosfotreonina e estão subdivididas em duas famílias gênicas designadas PPP e PPM. A família PPP está dividida em cinco subfamílias, que compreendem as PPs do tipo 1 (PP1), 2A (PP2A), 2B (PP2B), 5 (PP5) e 7 (PP7), de acordo com a similaridade entre as sequências de aminoácidos das subunidades ou domínios destas enzimas. Novas PPs estão sendo descobertas em diferentes organismos e classificadas nestas famílias ou subfamílias com base na análise comparada de suas sequências. Uma delas é a proteína fosfatase do tipo 4 (PP4), descoberta originalmente em coelhos e cujas funções biológicas vêm sendo progressivamente elucidadas...

Serine/threonine protein phosphatases and a protein phosphatase 1 inhibitor from Neurospora crassa

The major spontaneously active serine/threonine (Ser/Thr) protein phosphatase activities in N. crassa wild type (FGSC 424) were type 1 (PP1), type-2A (PP2A) and type-2C (PP2C). PP1 and PP2C predominantly dephosphorylated phosphorylase a and casein, respectively. PP2A acted on both substrates, but was two-fold more active against casein. PPI activity was inhibited by protamine, heparin, okadaic acid (IC50 50 nM) and mammalian inhibitor- 1 (lC50 2 nM). On the other hand, PP2A activity was inhibited by much lower concentrations of okadaic acid (IC50 0.2 nM) and also by protamine, but not by heparin or inhibitor-l. About 80 per cent of total PP1 activity was associated with the particulate fraction and could be partially extracted with 0.5 M NaCl. Seventy and ninety percent of PP2A and PP2C activities, respectively, were found in the soluble fraction. In addition we have partially purified an acid and thermostable PP1 inhibitor which effectively inhibits both N. crassa and mammalian PP1.

Alterações músculo-tegumentares e aminoácidos plasmáticos no hipertireoidismo (contribuição à interpretação fisiopatológica) / Changes muscle tissue and plasma amino acids in hyperthyroidism (contribution to the interpretation pathophysiological

Vários autores assinalam que o excesso de hormônio tireoidiano estimularia a proteólise muscular e, ao mesmo tempo, a captação esplênica de aminoácidos, determinando variações em suas concentrações plasmáticas...Alterações tegumentares na tireotoxicose, avaliadas pela presença de unhas de Plummer, correlacionaram-se signigicativamente com a redução de concentração plasmática de cistina (p,0,05)

Efecto de la suplementación de treonina en dietas prácticas para pollos con diferentes niveles de arginina / Effect of threonine supplementation on practical broiler diets with different levels of arginine

Se realizaron dos experimentos con pollos de engorda de 0 a 4 semanas de edad, para investigar el efecto de la suplementación de treonina en dietas sorgo + soya + gluten de maíz con diferentes niveles de proteínas y de arginina. En el experimento 1, se alimentó a los pollos con dietas a 22 porciento de proteína con tres niveles de arginina (1.40 y 1.32 porciento). Los resultados obtenidos (p< 0.05) en ganancia de peso y conversión alimenticia indicaron mejores resultados con .84 porciento de treonina; para niveles de arginina no hubo diferencias entre tratamientos. En el experimento 2, los pollitos se alimentaron con dietas a 21 porciento de proteínas con tres niveles de treonina (.76, .81 y .84 porciento) con 1.33 y 1.25 por ciento de arginina total. Los datos mostraron que el crecimiento y la conversión alimenticia eran más favorables (P<0.01) con .81 porciento de treonina. Para niveles de arginina se encontraron resultados similares. De los resultados obtenidos se infiere que el requerimiento de teonina para el pollo es dietas tipo práctico fluctúa entre .81 y .84 porciento, y que el requerimiento de arginina no es mayor a 1.25 porciento.

El enlace O-glicosídico en glicoproteínas de plasma seminal humano / The linkage O-glycosidic in glycoproteins of human seminal plasma

La composición y estructura de los extremos terminales no reductores portadores de los determinantes antigénicos en las cadenas de oligosacáridos de las glicoproteínas del plasma seminal humano, han permitido deducir que estos componentes son fragmentos producidos por la degradación proteolítica endógena de las mucinas. Dado que las cadenas de hidratos de carbono unidas O-glicosídicamente a la serina y la treonina de la cadena peptídica dan lugar a una reacción de beta-eliminación en condiciones alcalinas suaves, hicimos uso del tratamiento alcalino para demostrar la presencia de enlaces lábiles al álcali en las muestras de plasma seminal humano y algunas fracciones glicoproteicas aisladas a partir del mismo. El análisis de los hidratos de carbono que se liberan durante ell tratamiento han permitido obtener información sobre la composición y estructura de este tipo de unidades de oligosacarídos. Hemos identificado al monosacárido involucrado en el enlace O-glicosídico a serina y treonina y hemos podido caracterizar, a través de la reacción de beta-eliminación en condiciones reductoras y no reductoras, las unidades de monosacáridos del extremo terminal reductor

Aminoácidos livres em camarões - Variações decorridas durante a decomposição / Free amino acids in shrimp - Variations during decomposition

A cromatografia em papel de filtro foi usada para a pesquisa de aminoácidos livres em camarões. Nos camarões analisados, imediatamente post-mortem, foram identificados os seguintes aminoácidos: lisina, histidina, asparagina, arginina, ácido aspártico, serina, glicina, treonina, ácido glutâmico, alanina, prolina, valina, fenilalanina, leucina e isoleucina. Na parte comestível (retirados cabeça, casca e apêndices e conservado o tubo digestivo), efetuada a análise também imediatamente post-mortem, encontramos os aminoácidos acima citados menos ácido aspártico, treonina e fenilalanina. A quantidade de lisina, histidina, ácido glutâmico, alanina, valina e fenilalanina e leucina aumenta muito durante a deterioração, enquanto que a quantidade de prolina diminui consideravelmente. No decorrer da decomposição identificamos, a mais, tirosina, ácido α-aminobutírico; metionina e norleucina. São os seguintes os aminoácidos encontrados no presente estudo e não assinalados por outros autores: asparagina, ácido aspartico, ácido glutâmico, alanina, prolina, ácido α-aminobutírico, valina, isoleucina e norleucina (AU).