Reporte de caso: síndrome de absorción intravascular en histeroscopia, intoxicación por glicina / Case report: Intravascular absorption syndrome in hysteroscopy, glycine intoxication

El síndrome de absorción intravascular en histeroscopia se origina por la rápida absorción vascular de soluciones isotónicas e hipotónicas utilizadas en irrigación intrauterina, ocasionando hipervolemia y dilución de electrolitos, especialmente hiponatremia. Cuando este síndrome es debido a intoxicación por glicina al 1,5% causa acidosis severa y neurotoxicidad. La incidencia de este síndrome es baja pero puede aumentar por factores como: falta de control de altura de bolsas de irrigación, ausencia de equilibrio de fluidos de soluciones de irrigación, tejidos altamente vascularizados como miomas uterinos y uso de sistema de electrocirugía monopolar. Se reporta el caso de una paciente con miomas uterinos, programada para resección mediante histeroscopia que cursa con síndrome de absorción intravascular por glicina, el temprano diagnóstico y rápido tratamiento intraoperatorio y postoperatorio permitió una evolución favorable. El manejo se basó en el uso de diuréticos, restricción de fluidos y soluciones hipertónicas de sodio.

Intravascular absorption syndrome in hysteroscopy is caused by rapid vascular absorption of isotonic and hypotonic solutions used in intrauterine irrigation, causing hypervolemia and electrolyte dilution, especially hyponatremia. When this syndrome is due to 1.5% glycine toxicity, it causes severe acidosis and neurotoxicity. The incidence of this syndrome is low but may increase due to factors such as: lack of control of the height of irrigation bags, lack of fluid balance in irrigation solutions, highly vascularized tissues such as uterine myomas and use of a monopolar electrosurgery system. The case of a patient with uterine myomas, scheduled for resection by hysteroscopy, who presents with intravascular glycine absorption syndrome, is reported. Early diagnosis and rapid intraoperative and postoperative treatment allowed a favorable evolution. Management was based on the use of diuretics, fluid restriction, and hypertonic sodium solutions.

Amazonian soil fungi are efficient degraders of glyphosate herbicide; novel isolates of Penicillium, Aspergillus, and Trichoderma / Os fungos do solo amazônico são degradadores eficientes do herbicida glifosato; novos isolados de Penicillium, Aspergillus e Trichoderma

Abstract Pesticide residues that contaminate the environment circulate within the hydrological cycle can accumulate within the food chain and cause problems to both environmental and human health. Microbes, however, are well known for their metabolic versatility and the ability to degrade chemically stable substances, including recalcitrant xenobiotics. The current study focused on bio-prospecting within Amazonian rainforest soils to find novel strains fungi capable of efficiently degrading the agriculturally and environmentally ubiquitous herbicide, glyphosate. Of 50 fungal strains isolated (using culture media supplemented with glyphosate as the sole carbon-substrate), the majority were Penicillium strains (60%) and the others were Aspergillus and Trichoderma strains (26 and 8%, respectively). All 50 fungal isolates could use glyphosate as a phosphorous source. Eight of these isolates grew better on glyphosate-supplemented media than on regular Czapek Dox medium. LC-MS revealed that glyphosate degradation by Penicillium 4A21 resulted in sarcosine and aminomethylphosphonic acid.

Resumo Resíduos de agrotóxicos que contaminam o meio ambiente circulam no ciclo hidrológico, podendo se acumular na cadeia alimentar e causar problemas tanto à saúde ambiental quanto humana. Por sua vez, microrganismos são bem conhecidos por sua versatilidade metabólica e capacidade de degradar substâncias quimicamente estáveis, incluindo xenobióticos recalcitrantes. O estudo atual se concentrou na bioprospecção nos solos da floresta amazônica para encontrar novas linhagens de fungos capazes de degradar com eficiência o herbicida onipresente na agricultura e no meio ambiente, o glifosato. Entre os 50 fungos isolados (usando meio de cultura suplementado com glifosato como única fonte de carbono), a maioria eram isolados do gênero Penicillium (60%) e os outros eram isolados de Aspergillus e Trichoderma (26 e 8%, respectivamente). Todos os 50 isolados de fungos foram capazes de usar glifosato como fonte de fósforo. Oito desses isolados cresceram melhor em meio suplementado com glifosato do que em meio Czapek Dox regular. LC-MS revelou que a degradação do glifosato por Penicillium 4A21 resultou nos metabólitos sarcosina e ácido aminometilfosfônico.

Normalized difference vegetation index for desiccation evaluation with glyphosate + 2, 4-D in magnetized spray solution / Índice de vegetação por diferença normalizada para avaliação de dessecação com glyphosate + 2, 4-D em calda magnetizada

Abstract Water magnetization and geoprocessing are increasingly utilized tools in weed management. Our objective was to study the influence of water magnetization on herbicide efficiency and to verify whether there is a relationship between control scores and the normalized difference vegetation index (NDVI). In the laboratory experiment, water was subjected to magnetization and evaluated with respect to four characteristics. In the field experiment, plots of Brachiaria grass were subjected to treatments in a factorial scheme (6 × 2 + 1). Six herbicidal factors (doses of glyphosate and glyphosate + 2,4-D) and the magnetization or absence of magnetization of the spray solution were evaluated and compared against the control treatment (without spraying). Weed control assessments were carried out six times. Images were obtained using an embedded multispectral camera to determine the NDVI values. Data related to water characteristics were analyzed using the t test. Weed control and NDVI data were subjected to analysis of variance and are presented in regression graphs. Dispersion analysis of NDVI data was performed according to the control scores. The magnetization process decreased the pH of the water and increased the surface tension, but it did not influence the control scores or the NDVI. As the glyphosate dose was increased, the control scores were higher and the NDVI values were lower. Magnetized water did not affect the biological efficiency of the herbicides, and there was a strong correlation between the control scores and the NDVI values.

Resumo A magnetização da água e o geoprocessamento são ferramentas cada vez mais utilizadas no manejo de ervas daninhas. Nosso objetivo foi estudar a influência da magnetização da água na eficiência do herbicida e verificar se existe uma relação entre os escores de controle e o índice de vegetação por diferença normalizada (NDVI). No experimento de laboratório, a água foi submetida à magnetização e avaliada em relação a quatro características. No experimento de campo, parcelas de capim-braquiária foram submetidas a tratamentos em esquema fatorial (6 × 2 + 1). Seis fatores herbicidas (doses de glyphosate e glyphosate + 2,4-D) e a magnetização ou ausência de magnetização da calda foram avaliados e comparados com o tratamento controle (sem pulverização). Avaliações de controle de plantas daninhas foram realizadas seis vezes. As imagens foram obtidas usando uma câmera multiespectral incorporada para determinar os valores de NDVI. Os dados relacionados às características da água foram analisados ​​por meio do teste t. O controle de plantas daninhas e os dados de NDVI foram submetidos à análise de variância e são apresentados em gráficos de regressão. A análise de dispersão dos dados NDVI foi realizada de acordo com os escores de controle. O processo de magnetização diminuiu o pH da água e aumentou a tensão superficial, mas não influenciou nos escores de controle ou no NDVI. Conforme a dose de glyphosate foi aumentada, os escores de controle foram maiores e os valores de NDVI foram menores. A água magnetizada não afetou a eficiência biológica dos herbicidas, e houve uma forte correlação entre os escores de controle e os valores de NDVI.

Antioxidant status and their enhancements strategies for water stress tolerance in chickpea / Status antioxidante e suas estratégias de aprimoramento para tolerância ao estresse hídrico no grão-de-bico

Water stress executes severe influences on the plant growth and development through modifying physio-chemical properties. Therefore, a field experiment was designed to evaluate the antioxidant status and their enhancements strategies for water stress tolerance in chickpea on loam and clay loam soils under agro-ecological conditions of Arid Zone Research Institute, Bahawalpur (29.3871 °N, 71.653 °E) and Cholistan farm near Derawer (28.19°N, 71.80°E) of Southern Punjab, Pakistan during winter 2014-15. Experimental treatments comprised of two chickpea cultivars i.e. Bhakhar 2011 (drought tolerant) and DUSHT (drought sensitive), two water stress levels i.e. water stress at flowering stage and water stress at flowering + pod formation + grain filling stage including well watered (control) and two exogenous application of osmoprotectants i.e. glycine betaine (GB) 20 ppm and proline 10 uM including distilled water (control). Results indicated that water stress at various growth stages adversely affects the growth, yield and quality attributes of both chickpea cultivars. Exogenous application of GB and proline improved the growth, yield and quality parameters of both chickpea cultivars even under water stress conditions. However, superior results were obtained with exogenously applied GB on Bhakhar 2011 under well-watered conditions. Similarly, foliar spray of GB on chickpea cultivar Bhakhar 2011 under stress at flowering + pod formation + grain filling stage produced maximum superoxide dismutase, peroxidase and catalase contents. These results suggested that application of GB mitigates the adverse effects of water stress and enhanced tolerance in chickpea mainly due to higher antioxidant enzymes activity, demonstrating the protective measures of plant cells in stress condition. Hence, antioxidants status might be a suitable method for illustrating water stress tolerance in chickpea.

O estresse hídrico exerce fortes influências no crescimento e no desenvolvimento das plantas, modificando as propriedades físico-químicas. Portanto, a presente atividade de pesquisa foi projetada para avaliar o status antioxidante e suas estratégias de aprimoramento para tolerância ao estresse hídrico no grão-de-bico em condiçõesa groecológicas, no Instituto de Pesquisa da Zona Árida, Bahawalpur (29.3871 ° N, 71.653 ° E) e fazenda do Cholistan, perto de Derawer (28.19 ° N, 71,80 ° E), no sul de Punjab, Paquistão, durante Rabi 2014-15. Tratamentos experimentais compostos de dois genótipos de grão-de-bico, como Bhakhar 2011 (tolerante à seca) e DUSHT (sensível à seca), dois níveis de estresse hídrico, ou seja, estresse hídrico no estágio de floração, estresse hídrico na fase de floração e estresse hídrico na fase de floração + formação de vagem + estágio de enchimento de grãos, incluindo água bem controlada (controle) e duas aplicações exógenas de osmoprotetores, isto é, glicina betaína 20 ppm e prolina 10 uM, incluindo água destilada (controle). Os resultados indicaram que o estresse hídrico em vários estágios de crescimento afeta negativamente os atributos de crescimento, rendimento e qualidade de ambas as cultivares de grão-de-bico. A aplicação exógena de glicina betaína e prolina melhorou os parâmetros de crescimento, rendimento e qualidade de ambos os genótipos de grão- de-bico, mesmo sob condições de estresse hídrico. No entanto, resultados superiores foram obtidos com glicina betaína aplicada exogenamente em Bhakhar 2011, em condições bem regadas. Além disso, o spray foliar de glicina betaína na cultivar de grão-de-bico Bhakhar 2011, sob estresse na fase de floração + formação de vagem + enchimento de grãos, produziu o máximo de superóxido dismutase, peroxidase e catalase. Esses resultados sugeriram que a aplicação de glicina betaína atenua os efeitos adversos do estresse hídrico e aumenta a [...].

The influence of prophylaxis with amino acid glycine powder and sodium bicarbonate jet on the bond strength of dental enamel / A influência da profilaxia com aminoácido glicina em pó e jato de bicarbonato de sódio na resistência de união do esmalte dentário

Aim: To compare the influence of prophylaxis with sodium bicarbonate and amino acid glycine powder on the bond strength of bovine teeth enamel and on the properties of two adhesive systems. Methods:Thirty-six extracted bovine incisors were randomly divided into six groups (n = 6) according to the prophylactic treatment received: no prophylactic treatment (NT), sodium bicarbonate powder (SB), and glycine powder (GL). Each group was subdivided into 2 groups based on what adhesive systems were used: conventional system (A) and universal system (B). Composite resin was applied on the buccal surface of the teeth in a block measurement 8x8x6 mm. The specimens were cut to obtain beams measuring 1.0 x 1.0 mm and were subjected to microtensile bond strength tests. Results were compared using two-way ANOVA (p ≤ 0.05). Results: The GLA group obtained the highest bond strength value for the conventional adhesive (18.97 MPa), but the GLB group obtained a lower strength value than the SBB group (GLB: 21.05 MPa and SBB: 22.29 MPa) (p < 0.05). Conclusions: Cleaning of the enamel surface increases the adhesive properties of restorative materials, and the bond strength was more effective in the group that received glycine prophylaxis and the conventional adhesive system.

Objetivo:Comparar a influência da profilaxia com bicarbonato de sódio e ClinproProphy ™ na resistência de união do esmalte de dentes bovinos e nas propriedades de dois sistemas adesivos.Métodos: Trinta e seis incisivos bovinos extraídos foram divididos aleatoriamente em 6 grupos (n = 6), cada um de acordo com o tratamento profilático recebido: nenhum tratamento profilático (NT), bicarbonato de sódio em pó (SB), glicina em pó (GL). Cada grupo foi subdividido em 2 grupos com base nos sistemas adesivos utilizados: sistema convencional (A) e sistema universal (B). A resina composta foi aplicada na superfície bucal dos dentes em um bloco de 8x8x6 mm. As amostras foram cortadas para obter blocos medindo 1,0 x 1,0 mm e submetidas a testes de resistência de união por microtração. Os resultados foram comparados usando o teste two-way ANOVA (p ≤ 0,05). Resultados: O grupo GLA obteve o maior valor de resistência de união para o adesivo convencional (18,97 MPa), mas o grupo GLB obteve um valor de resistência menor que o grupo SBB (GLB: 21,05 MPa e SBB: 22,29 MPa) (p < 0,05). Conclusão: A limpeza da superfície do esmalte aumenta as propriedades adesivas dos materiais restauradores, e a resistência adesiva foi mais eficaz no grupo que recebeu profilaxia com glicina e sistema adesivo convencional.

Effects of glyphosate on soil fungal communities: A field study / Efecto del glifosato en las comunidades fúngicas del suelo: estudio a campo

ABSTRACT The driving forces behind many soil processes are microorganisms and they are able to respond immediately to environmental changes. The soil microbial community impacts on many soil properties. More than one-third of the terrestrial ecosystems are semiarid. However, a limited number of studies have been conducted to characterize soil fungal communities in semiarid grasslands, in particular those of agricultural fields. The aim of this study was to explore changes in the diversity and structure of soil fungal communities in semiarid grasslands, after different doses of glyphosate were applied under field conditions. Changes in soil fungal communities were examined using different approaches including culturing, calcofluor white stain and denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE). The different approaches complement each other, revealing different aspects of the effect of glyphosate on soil fungal communities. We demonstrated a negative effect of glyphosate on soil fungal biomass at high doses and an early and transitory stimulatory effect on soil fungal biomass. We also found a negative effect of glyphosate on the species richness of cultivable fungi and changes in the molecular structure of soil fungal communities after double doses or long-term glyphosate application. In summary, our findings demonstrate an overall negative effect of glyphosate on soil fungal communities.

RESUMEN Los microorganismos del suelo son los responsables de llevar a cabo la mayoría de los procesos biológicos que ocurren en el suelo, y son capaces de reaccionar ante el estrés ambiental. Más de un tercio de los ecosistemas terrestres son semiáridos. Sin embargo, son escasos los estudios realizados para caracterizar las comunidades fúngicas en suelos agrícolas en ecosistemas semiáridos. El objetivo del presente trabajo fue estudiar los cambios que se producen en la biomasa, la diversidad y la estructura de las comunidades fúngicas del suelo, luego de la aplicación de distintas dosis de glifosato en condiciones de campo. Se emplearon diferentes técnicas incluidas el cultivo, la tinción directa con blanco de calcoflúor y PCR acoplada a electroforesis en geles de gradiente desnaturalizante (DGGE). Las distintas metodologías empleadas se complementan entre sí al detectar cada una distintos aspectos del efecto del glifosato en las comunidades fúngicas del suelo. Se encontró que el glifosato produce un efecto negativo sobre la biomasa fúngica, también se encontró un efecto transitorio estimulante inmediatamente posterior a la aplicación del herbicida. Además, se vio un efecto negativo sobre la riqueza de hongos cultivables, así como también cambios en la estructura molecular de las comunidades luego de aplicaciones repetidas. En conclusión, se demostró un efecto negativo generalizado sobre las comunidades fúngicas del suelo.

Hiperglicinemia no cetósica neonatal, fenotipo atenuado / Neonatal nonketotic hyperglycinemia, attenuated phenotype / Hiperglicinemia não-cetótica neonatal, fenótipo atenuado

Introducción. La Hiperglicinemia no Cetósica (HNC) es un error innato del metabolismo de herencia autosómica recesiva, cuya principal característica es la acumulación de glicina en los fluidos corporales, producido por una falla en el complejo de clivaje enzimático de este aminoácido. Presentación del caso. Presentamos el caso de un recién nacido de 36 semanas, con adaptación neonatal espontánea, sin historia de noxa perinatal ni hipoglicemia documentada, quien tras un corto período de 24 horas presentó deterioro neurológico progresivo, rápida alteración del estado de conciencia hasta el coma y falla ventilatoria. Llamó la atención al ingreso la hipotonía severa generalizada, hiporreflexia, ausencia de reflejos primitivos, con episodios de hipo aislado y movimientos oculares anormales. Ante la sospecha de un error innato del metabolismo se realizó el perfil de aminoácidos donde se evidenció elevación significativa de la glicina, 1417 mmol/L (referencia 94-553 umol/L). Se solicitaron aminoácidos en líquido cefalorraquídeo, glicina muy elevada 1263 mmol/L (referencia 3-7 umol/L), con lo que se confirma la sospecha de hiperglicinemia no cetósica. Se decidió iniciar manejo con benzoato de sodio y dextrometorfano. La resonancia magnética inicial fue normal, en estudio control se encontraron al igual que en el electroencefalograma hallazgos reportados previamente en la literatura para esta patología. Discusión. La mayoría de los niños con HNC se presentan en el período neonatal o en la primera infancia, y solo los casos más leves se presentan al final de la infancia o la niñez. En las presentaciones de inicio neonatal, el 85% tiene HNC grave y el 15% tiene forma atenuada, como este caso. El diagnóstico de la HNC se hace con base en la sospecha clínica, confirmada por los hallazgos de laboratorio, con la alteración característica de la glicina tanto en plasma como en el LCR y soportada por los hallazgos de las neuroimágenes y electroencefalograma (EEG). Conclusiones. La HNC no es una condición tan inusual, aunque sí posiblemente subdiagnosticada por la forma de presentación tan catastrófica, además porque no produce grandes desarreglos metabólicos de rápido diagnóstico. Por este motivo, ante un paciente con cuadro clínico sugestivo, con coma, alteración respiratoria y convulsiones de difícil manejo, y muy característicamente hipo, debe solicitarse el estudio de aminoácidos en plasma, neuroimágenes y EEG, con el fin de instaurar un manejo temprano.

Introduction. Nonketotic hyperglycinemia (NKH) is an autosomal recessive innate error of metabolism, whose main characteristic is the accumulation of glycine in body fluids, produced by a failure in the enzymatic cleavage complex of this amino acid. Case Presentation. We present the case of a 36-week-old newborn, with spontaneous neonatal adaptation, no history of perinatal noxa or documented hypoglycemia, who after a short period of 24 hours presented progressive neurological deterioration, rapid alteration of consciousness to coma and ventilatory failure. At admission the patient was noted for severe generalized hypotonia, hyporeflexia, absence of primitive reflexes, with episodes of isolated hiccups and abnormal eye movements. In view of the suspicion of an innate error of metabolism, an amino acid profile was performed, showing a significant elevation of glycine, 1417 umol/L (reference 94-553 umol/L). Amino acids were requested in cerebrospinal fluid, glycine very elevated 1263 umol/L (reference 3-7 umol/L), confirming the suspicion of nonketotic hyperglycinemia. It was decided to start treatment with sodium benzoate and dextromethorphan. The initial MRI was normal; in the control study, findings previously reported in the literature for this pathology were found, as well as in the electroencephalogram. Discussion. Most children with NKH will display it in the neonatal period or early infancy, with only the mildest cases presenting in late infancy or childhood. In neonatal-onset cases, 85% have severe NKH and 15% have attenuated form, as in this case. The diagnosis of NKH is made based on clinical suspicion, confirmed by laboratory findings, with the characteristic alteration of glycine in both plasma and CSF and supported by neuroimaging and electroencephalogram (EEG) findings. Conclusions. NKH is not such an unusual condition, although it is possibly underdiagnosed because of its catastrophic presentation and because it does not produce major metabolic disorders that are quickly diagnosed. For this reason, in a patient with a suggestive clinical condition, with coma, respiratory alteration and unmanageable seizures, and very characteristically hiccups, the study of amino acids in plasma, neuroimaging and EEG should be requested, in order to establish early treatment.

Introdução. A hiperglicinemia não-cetótica (HNC) é um erro inato do metabolismo de herança autossômica recessiva, cuja principal característica é o acúmulo de glicina nos fluidos corporais, produzido por uma falha no complexo de clivagem enzimática deste aminoácido. Apresentação do caso. Apresentamos o caso de um recém-nascido de 36 semanas, com adaptação neonatal espontânea, sem história de noxa perinatal nem hipoglicemia documentada, que após um curto período de 24 horas apresentou deterioração neurológica progressiva, alteração rápida de consciência até coma e falha ventilatória. Na admissão, eram notáveis a hipotonia grave generalizada, hiporreflexia, ausência de reflexos primitivos, com episódios de soluços isolados e movimentos oculares anormais. Diante da suspeita de erro inato no metabolismo, foi realizado o perfil de aminoácidos, onde foi constatada elevação significativa da glicina, 1417umol/L (referência 94-553 umol/L). Foram solicitados aminoácidos no líquido cefalorraquidiano, glicina muito alta 1263umol/L (referência 3-7 umol/L), confirmando a suspeita de hiperglicinemia não-cetótica. Foi decidido iniciar o tratamento com benzoato de sódio e dextrometorfano. A ressonância magnética inicial foi normal, tanto em estudo controle quanto no eletroencefalograma, foram encontrados achados previamente relatados na literatura para esta patologia. Discussão. A maioria das crianças com HNC estão no período neonatal ou na primeira infância, e apenas os casos mais leves ocorrem na infância ou na infância tardia. Nas apresentações de início neonatal, 85% têm HNC grave e 15% têm forma atenuada, como neste caso. O diagnóstico de HNC é feito com base na suspeita clínica, confirmada por achados laboratoriais, com alteração característica da glicina tanto no plasma quanto no LCR e apoiado por achados de neuroimagem e eletroencefalograma (EEG). Conclusões. A HNC não é uma condição tão incomum, embora possivelmente seja subdiagnosticada por sua apresentação catastrófica, também por não produzir grandes distúrbios metabólicos que possam ser diagnosticados rapidamente. Por esse motivo, em um paciente com quadro clínico sugestivo, com coma, distúrbios respiratórios e convulsões de difícil manejo, e soluços muito característicos, deve ser solicitado um estudo de aminoácidos no plasma, neuroimagem e EEG a fim de estabelecer um tratamento rápido.

Study of muscle fibers of the extensor digitorium longus and soleus muscles of C57BL/6 females exposed to glyphosate during pregnancy and lactation / Estudo das fibras musculares dos músculos extensor longo dos dedos e sóleo de fêmeas C57BL/6 expostas ao glifosato durante a prenhez e a lactação

ABSTRACT Objective To evaluate the morphology and morphometry of the muscles extensor digitorium longus and soleus of C57BL/6 females, who were exposed to glyphosate during pregnancy and lactation. Methods Twelve female mice from the C57BL/6 lineage were used. After detection of pregnancy, they were divided into a Control Group, which received only water, and a Glyphosate Group, which received water with 0.5% glyphosate during pregnancy and lactation. Both groups received ad libitum standard diet. After weaning, the females were euthanized and weighed; naso-anal length was measured, and fats were collected and weighed. The muscles extensor digitorium longus and soleus were collected, and their length and weight were measured. Then, the muscles were fixed in Methacarn to perform the histological study of muscle fibers. Results Glyphosate Group presented lower weight gain during pregnancy and also lower final body weight and naso-anal length; however, the other body parameters evaluated did not present a significant difference in relation to the Control Group. Significant differences were also not observed in the analysis of muscle fibers and connective tissue. Conclusion Exposure to 0.5% glyphosate during pregnancy and lactation resulted in lower weight gain during pregnancy, final weight, and naso-anal length. Despite not directly altering the morphology of muscle tissue, these results may indicate enough exposure to interfere with animal metabolism.

RESUMO Objetivo Avaliar a morfologia e a morfometria dos músculos extensor longo dos dedos e sóleo de fêmeas C57BL/6 expostas ao glifosato durante a prenhez e lactação. Métodos Foram utilizados 12 camundongos fêmeas da linhagem C57BL/6. Após detecção da prenhez, foram separadas em Grupo Controle, que recebeu somente água, e Grupo Glifosato, que recebeu água com 0,5% de glifosato durante a prenhez e lactação. Ambos os grupos receberam dieta padrão ad libitum. Após o desmame, as fêmeas foram eutanasiadas e pesadas; o comprimento nasoanal foi mensurado, e as gorduras foram coletadas e pesadas. Os músculos extensor longo dos dedos e sóleo foram coletados, e seu comprimento e peso foram mensurados. Em seguida, os músculos foram fixados em Methacarn para a realização do estudo histológico das fibras musculares. Resultados O Grupo Glifosato apresentou menor ganho de peso durante a prenhez e também menor peso corporal final e comprimento nasoanal, entretanto os demais parâmetros corporais avaliados não apresentaram diferença significativa em relação ao Grupo Controle. Na análise das fibras musculares e do tecido conjuntivo, também não foram observadas diferenças significativas. Conclusão A exposição a 0,5% de glifosato durante a prenhez e lactação resultou em menor ganho de peso na gestação, peso final e comprimento nasoanal, o que pode indicar que, apesar de não alterar a morfologia do tecido muscular diretamente, a exposição foi suficiente para interferir no metabolismo dos animais.

Isolation of culturable mycota from Argentinean soils exposed or not-exposed to pesticides and determination of glyphosate tolerance of fungal species in media supplied with the herbicide / Aislamiento de la microbiota cultivable de suelos argentinos expuestos y no expuestos a plaguicidas y determinación de la tolerancia a glifosato de especies fúngicas en medios suplementados con el herbicida

Abstract The current agricultural system has led to the development of glyphosate (GP)-resistant weeds, causing an increase in GP doses and applications. Native mycota of pesticide-contaminated sites are the major source of pesticide-degrading microorganisms. The aims of the present study were to isolate the GP-tolerant culturable mycota in two soils with different pesticide exposure from Córdoba, Argentina, and to evaluate the growth parameters in native fungal isolates in the presence of GP and the effective dose that caused 50% growth reduction. The results showed that the genera Fusarium, Aspergillus, Mucor, Penicil-lium and Sterilia were the prevalent fungi isolated from soils both exposed and not-exposed to pesticides. The highest value (>100 mM) of effective concentration of herbicide that caused 50% growth inhibition (EC50), was found for Trichoderma isolates. Sterilia spp. had EC50 val-ues of 100mM, while Aspergillus spp. and Mucor had EC50 values between 50 and 100mM. The growth rate evaluation varied according to the isolates and GP concentrations. The data showed that all Aspergillus spp., Trichoderma spp., Mucor and three Sterilia spp. had the best growth performance in media supplied with GP after a variable acclimation period. This study provides valuable data for further studies that would allow to know the metabolic capacity of these fungal species that can be potential candidates for GP removal from contaminated environments.

Resumen El sistema agrícola actual condujo ai desarrollo de malezas resistentes a glifos-ato (GP), lo que deriva en el aumento de las dosis y el número de aplicaciones requeridas. La microbiota nativa de sitios contaminados con plaguicidas constituye la fuente principal de microorganismos capaces de degradar este herbicida. Los objetivos del presente estudio fueron aislar la microbiota cultivable tolerante a GP a partir de dos suelos agrícolas con diferente grado de exposición a plaguicidas, ambos de la provincia de Córdoba, Argentina, y evaluar en los hongos nativos aislados los parámetros de crecimiento en presencia de GP y la dosis efectiva que produce un 50% de reducción del crecimiento (EC50). Los géneros Fusarium, Aspergillus, Mucor, Penicillium y Sterilia fueron los de mayor prevalencia, tanto en suelos expuestos como no expuestos a plaguicidas. La mayor EC50 hallada (> 100 mM) correspondió a dos aislamientos de Trichoderma. En dos aislamientos de Sterilia, los valores de EC50 fueron de 100 mM, mientras que en los dos de Aspergillus y en uno de Mucor fueron de entre 50 y 100 mM. La velocidad de crecimiento varió según la concentración de GP empleada y el aislamiento considerado. Todos los aislamientos de Aspergillus, Trichoderma y Mucor, y tres aislamientos de Sterilia mostraron el mejor rendimiento en cuanto al crecimiento en los medios con GP después de un período de aclimatación variable. Este trabajo proporciona datos preliminares valiosos referidos a la capacidad metabólica de estos aislados y su potencial para remover GP en ambientes contaminados.

Tolerance of dark septate endophytic fungi (DSE) to 1 agrochemicals in vitro / Tolerancia de hongos endofíticos septados oscuros a agroquímicos in vitro

Abstract Dark septate endophytes (DSE) are a heterogeneous group of fungi, mostly belonging to the Phylum Ascomycota, that are involved in a mutualistic symbiosis with plant roots. The aim of this study is to evaluate the behavior of two strains of DSE isolated from wheat roots of two cropping areas in the province of Buenos Aires, Argentina, against some agrochemicals. Of all the isolates obtained, two strains were identified as Alternaria alternata and Cochliobolus sp. These DSE were found to be tolerant to glyphosate, carbendazim and cypermethrin when evaluated at the recommended agronomic dose (AD), 2 AD and, in some cases, 10 AD. This work contributes to the study of the biology of this group of fungi and their tolerance in the presence of xenobiotics widely used in agriculture.© 2019 Asociaci´on Argentina de Microbiolog´ıa. Published by Elsevier Espa˜na, S.L.U. This is an open access article under the CC BY-NC-ND license (https://creativecommons.org/licenses/bync-nd/4.0/).

Resumen Los endófitos septados oscuros (DSE) son un grupo heterogéneo de hongos que participan de una simbiosis mutualista con raíces de plantas, perteneciendo principalmente al Phylum Ascomycota. El objetivo de este estudio fue aislar DSE de raíces de trigo proveniente de dos áreas de cultivo de la provincia de Buenos Aires y evaluar el comportamiento de dos cepas de DSE aisladas de raíces de trigo frente a algunos agroquímicos en dos áreas de cultivo de la provincia de Buenos Aires. De todos los aislamientos obtenidos se seleccionaron dos cepas que se identificaron como Alternaria alternata y Cochliobolus sp. Se encontró que estos DSE son tolerantes al glifosato, el carbendazim y la cipermetrina, evaluados a las dosis agronómicas recomendadas (AD), a 2x AD y, en algunos casos, a 10x AD. Este trabajo contribuye al conocimiento de la biología de este grupo de hongos y su tolerancia a xenobióticos ampliamente utilizados en la agricultura.

Efecto del glifosato sobre la microbiota, calidad del suelo y cultivo de frijol biofortificado en el departamento del Cesar, Colombia / Effect of glyphosate on microbiota, soil quality and biofortified bean crop in Codazzi, department of Cesar, Colombia

Resumen Las estrategias en seguridad alimentaria con cultivos de alto contenido nutricionaldeben enmarcarse en prácticas agrícolas sostenibles, orientadas a la conservación del suelo, elalto rendimiento y la inocuidad. Esta última característica implica la producción de alimentos sintrazas detectables de agroquímicos, los que podrían amenazar la salud del consumidor. Se des-arrolló un estudio con el objetivo de evaluar el efecto del herbicida glifosato sobre la fertilidadquímica y microbiológica del suelo, así como su residualidad en la semilla de frijol biofortificadocultivado en el departamento de Cesar, Colombia. La metodología comprendió un análisis corre-lacional de indicadores de calidad de suelo, rendimiento del cultivo y residualidad en los granos.Los tratamientos evaluados incluyeron la aplicación o no de glifosato, el uso de coberturas sin-téticas (mulch) o naturales, frente al control manual de las malezas. Se hallaron diferenciasde rendimiento y de la respuesta de los indicadores químicos y microbiológicos en función deltratamiento y las condiciones iniciales de la rizósfera de frijol. La aplicación del herbicida glifo-sato en suelo sin mulch generó una disminución del 29% en el rendimiento, asociada a la mayorprevalencia de plagas y enfermedades fúngicas. En ninguno de los tratamientos con aplicaciónde glifosato se observó residualidad de este herbicida en semillas, pero sí de otras moléculasderivadas de insecticidas usados en el sistema local de producción. De este estudio se concluyóque en lotes de frijol biofortificado con alta presión de la maleza Cyperus rotundus (coquito), se recomienda el uso del herbicida glifosato acompañado de mulch como alternativa para mantener la productividad en el tiempo. Esto constituye un sistema de protección frente al efectonegativo del herbicida sobre ambos, el sistema radical de la planta y la microbiota del suelo.© 2019 Asociacion Argentina de Microbiologıa. Publicado por Elsevier España, S.L.U. Este es un artıculo Open Access bajo la licencia CC BY-NC-ND (https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Abstract Strategies aimed at achieving food safety in crops of high nutritional value shouldbe carried out through sustainable agricultural practices aimed at soil conservation, high yieldand food safety. This latter characteristic implies food production without detectable tracesof agrochemicals that threaten health. The objective of this study was to assess the effect ofthe herbicide glyphosate on the chemical and biological fertility of the soil and to determineits residual activity on biofortified bean seeds in Codazzi, Department of Cesar, Colombia. Themethod included a correlational analysis of soil quality, crop yield and residuality in bean grains.The treatments included glyphosate application and synthetic and natural mulches, comparedto manual control. The results showed differences in the response of chemical, microbiologicaland yield indicators between treatments and the initial conditions of the bean rhizosphere. Theuse of the herbicide glyphosate in mulch-free soil generates yield losses of 29% associated witha higher incidence of pests and fungal diseases; in all treatments, no glyphosate residualitywas detected in seeds; however, residuality was detected in other molecules derived frominsecticides associated with the local production system. In conclusion, in plots with high weedpressure by Cyperus rotundus, the use of mulch is recommended as an alternative to maintainbean productivity over time; by offering protection against the effect of the herbicide on boththe root system of the plant and the soil microbiota of the biofortified bean crop.© 2019 Asociaci´on Argentina de Microbiolog´ıa. Published by Elsevier España, S.L.U. This is anopen access article under the CC BY-NC-ND license (https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Pouteria torta: a native species of the Brazilian Cerrado as a bioindicator of glyphosate action / Pouteria torta: espécie native do Cerrado Brasileiro como bioindicadora da ação do glyphosate

Abstract In Brazil, the expansion of agricultural activity and the associated indiscriminate use of herbicides such as glyphosate is directly related to the loss of biodiversity in the Cerrado. The identification of plant species as bioindicators of herbicide action, especially species native to the area, can help in monitoring the impacts of xenobiotics in the remaining Cerrado. Thus, this study was designed to evaluate the possible use of the native Cerrado species Pouteria torta as a bioindicator of glyphosate action via changes in physiological performance. At 16 months after sowing, the effect of glyphosate was evaluated by applying the following doses: 0 (control), 25, 50, 100, 200, 400, 800, and 1200 g a.e. ha-1. In response to glyphosate, P. torta exhibited reductions in photosynthesis and chloroplastid pigment content, as well as accumulation of shikimic acid and the occurrence of chlorosis and necrosis. These changes demonstrate the high sensitivity of P. torta to glyphosate and its potential for use as a bioindicator of this herbicide.

Resumo No Brasil, a expansão da atividade agrícola, aliada a utilização indiscriminada de herbicidas como o glyphosate, possui relação direta com a perda da biodiversidade no Cerrado. A identificação de espécies vegetais bioindicadoras da ação de herbicidas, particularmente as nativas do Cerrado, pode auxiliar em processos de monitoramento dos impactos desse xenobiótico nas remanescentes do Cerrado. Assim, este estudo foi projetado para avaliar o possível uso de Pouteria torta, espécie nativa do cerrado, como bioindicadora da ação do glyphosate via mudanças na sua performance fisiológica. Após 16 meses de semeadura, o efeito do glyphosate foi avaliado quando aplicadas as seguintes doses: 0 (controle), 25, 50, 100, 200, 400, 800 e 1200 g e. a. ha-1. Em reposta ao glyphosate, as plantas de P. torta apresentaram redução na sua performance do processo fotossintético e no conteúdo de pigmentos cloroplastídicos, além do acúmulo de ácido chiquímico e da ocorrência de cloroses e necroses. Essas alterações demonstram a alta sensibilidade de P. torta ao glyphosate, o que potencializa a sua utilização como bioindicadora da ação desse herbicida.

Morphological effects on helminth parasites caused by herbicide under experimental conditions / Efeitos morfológicos em helminto parasito causado por herbicida em condições experimentais

Abstract Helminth parasites have been studied as potential accumulators for different pollutants. Echinostoma paraensei is a foodborne trematode whose vertebrate host, the rodent Nectomys squamipes, is naturally exposed to environmental pesticides. However, little information exists regarding the pesticide's effects on helminths. This study investigated the morphological effects on the trematode, E. paraensei, after experimental Roundup® herbicide exposure, in concentrations below those recommended for agricultural use. After two hours of exposure, scanning electron microscopy (SEM) showed changes to the tegument, such as furrowing, shrinkage, peeling, spines loss on the peristomic collar, and histopathological evidence of altered cells in the cecum and acinus vitelline glands with vacuoles and structural changes to the muscular layers. Glycidic content was decreased, primarily in the connective tissue. As E. paraensei is an intestinal parasite of the semi-aquatic wild rodent, N. squamipes, it is predisposed to pesticide exposure resulting from agricultural practices. Therefore, we emphasize the need to evaluate its impact on helminth parasites, due to their pivotal role in regulating host populations.

Resumo Helmintos parasitos tem sido estudados como acumuladores potenciais para diferentes poluentes. O trematódeo E. paraensei tem como hospedeiro vertebrado o roedor Nectomys squamipes naturalmente exposto a pesticidas no meio ambiente. No entanto, pouca informação está disponível sobre os efeitos dos pesticidas em helmintos parasitos. O presente estudo investigou, em condições experimentais, os efeitos morfológicos no trematódeo E. paraensei após a exposição ao herbicida Roundup®, em concentrações abaixo das recomendadas para a utilização agrícola. A microscopia eletrônica de varredura (MEV) mostrou após duas horas de exposição, alterações no tegumento, como enrugamento, contração e descamação com perda de espinhos no colar peristômico e análise histopatológica evidenciou células do ceco alteradas, as glândulas vitelínicas com vacúolos e mudanças estruturais nas camadas musculares. Diminuição do conteúdo glicídico, principalmente no tecido conjuntivo, também foi observado. Considerando a predisposição à exposição a pesticidas agrícolas de N. squamipes infectado por E. paraensei, são necessários estudos para avaliar o impacto de tais resíduos frente aos helmintos e seus hospedeiros.

Brown Stink Bug Mortality by Seed Extracts of Tephrosia Vogelii Containing Deguelin and Tephrosin

ABSTRACT Extracts of the seeds of Tephrosia vogelii Hook. f. were studied in relation to its chemical composition and toxicity to the brown stink bug Euschistus heros (F.). The extracts were obtained in ethyl acetate and ethanol in the sequence according to the polar nature of the solvents. Extracts were sprayed in concentration of 1.0, 2.5, 5.0, 7.5 and 10% on third-instars nymphs and adults, and mortality was recorded. Presence two rotenoids in ethyl acetate was detected, with analyzed with gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Crude fraction analyses confirmed the presence of these rotenoids (tephrosin - 2.71% in ethyl acetate and 3.66% in methanol; and deguelin - 10.46% in ethyl acetate and 1.22% in methanol) and three other rotenoids in small amounts. Eight days after applications, ethyl acetate caused more stink bugs mortality and on less time than ethanol extract, because great quantity of rotenoids, as polarity. Concentrations above to 1 and 2.5% of the ethyl acetate extracts caused mortality above 80% of the nymphs and adults of E. heros, respectively. Concentration were considered high, thus chemist analyzes demonstrated high rotenoids presence. In conclusion, seed T. vogelli extracts, rich in deguelin and tephrosin (3:1), cause mortality of E. heros, however, high concentration are necessary.

Thidiazuron (TDZ) increases fruit set and yield of 'Hosui' and 'Packham's Triumph' pear trees

ABSTRACT The low fruit set is one of the main factors leading to poor yield of pear orchards in Brazil. The exogenous application of thidiazuron (TDZ) and aminoethoxyvinilglycine (AVG) has shown promising results in some pear cultivars and other temperate fruit trees. The objective of this study was to evaluate the effect of TDZ and AVG on fruit set, yield, and fruit quality of 'Hosui' and 'Packham's Triumph' pears. The study was performed in a commercial orchard located in São Joaquim, SC. Plant material consisted of 'Hosui' and 'Packham's Triumph' pear trees grafted on Pyrus calleryana. Treatments consisted on different rates of TDZ (0 mg L-1, 20 mg L-1, 40 mg L-1 and 60 mg L-1) sprayed at full bloom for both cultivars. An additional treatment of AVG 60 mg L-1 was sprayed one week after full bloom in 'Hosui'. The fruit set, number of fruit per tree, yield, fruit weight, seed number, and fruit quality attributes were assessed. Fruit set and yield of both cultivars are consistently increased by TDZ, within the rates of 20 to 60 mg L-1. Besides, its application increased fruit size of 'Hosui' and did not negatively affect fruit quality attributes of both cultivars.

Assessment of growth of Aspergillus spp. from agricultural soils in the presence of glyphosate / Evaluación del crecimiento de Aspergillus spp. aislados de suelos agrícolas en presencia de glifosato

Agriculture is one of the bases of the Argentine economy. Glyphosate is undoubtedly one of the most important herbicides used. The increasing consumption and the efficiency of glyphosate-based herbicides have encouraged several studies on their persistence in soils, their effects on soil microbiota and their degradation processes. Fungi have been reported as being the main herbicide-degrading microorganisms as well as the most tolerant to environmental stress conditions. This study evaluated the growth performance of Aspergillus section Flavi and Aspergillus niger aggregate strains on Czapek Dox media supplied with a commercial glyphosate formulation as sole source of carbon (CZC), phosphorus (CZP) or nitrogen (CZN). Six Aspergillus spp. strains were evaluated. Each medium was stab-inoculated with fungal spores from 7-day old cultures. Two measures of colony radii were taken daily. All of the Aspergillus section Flavi strains showed a significant increase (from 24 to 44%) in growth rate on the CZN medium, as compared to controls. The A. niger aggregate strains exhibited the same behavioral pattern under all the conditions tested, except on the CZN medium. Velutinous or slightly floccose colonies with abundant sporulation were observed on CZP. Moreover, the colonies produced sparse sporulation on CZC or CZN media, being their appearances completely different from those on the CZP medium. This study establishes that A. section Flavi and A. niger aggregate strains can grow in vitro in the presence of glyphosate, especially when it is used as a sole source of phosphorus or nitrogen.

La agricultura es una de las bases de la economía argentina. El glifosato es, indudablemente, uno de los herbicidas más utilizados. El incremento en el consumo y la eficiencia de estos herbicidas han estimulado investigaciones sobre su persistencia en el suelo, sus efectos sobre la microbiota edáfica y su proceso de degradación. Los hongos son conocidos por su importancia como degradadores de herbicidas y por su tolerancia a condiciones de estrés ambiental. El objetivo del presente estudio fue evaluar el crecimiento de cepas de Aspergillus sección Flavi y del agregado Aspergillus niger en el medio Czapeck Dox suplementado con una solución comercial de glifosato como única fuente de carbono (CZC), de fósforo (CZP) o de nitrógeno (CZN). Seis cepas de Aspergillus fueron evaluadas. Cada medio fue inoculado con esporas fúngicas provenientes de cultivos de 7 días. Diariamente se tomaron 2 medidas del radio de las colonias. Todas las cepas de Aspergillus sección Flavi mostraron un incremento significativo (del 24 al 44%) en la velocidad de crecimiento en el medio CZN comparado con los controles. Las cepas del agregado A. niger mostraron el mismo comportamiento bajo todas las condiciones ensayadas, excepto en el medio CZN. Se observaron colonias velutinosas o ligeramente flocosas con abundante esporulación en los medios CZP. En los medios CZC o CZN, las colonias produjeron una esporulación escasa. Este estudio establece que cepas de Aspergillus sección Flavi y del agregado A. niger pueden desarrollar in vitro en presencia de glifosato, especialmente cuando es usado como única fuente de fósforo o nitrógeno.

Dietas pós-eclosão suplementadas com fontes de gordura e acrescidas de taurina e glicina sobre a morfometria intestinal e o desempenho de frangos de corte de um a 21 dias / Post-hatch diets supplemented with sources of fat and added taurine and glycine on the intestinal morphology and performance of broilers at 1 to 21 days

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do fornecimento de dietas pós-eclosão suplementadas com diferentes fontes de gordura insaturada e adicionadas ou não de taurina e glicina sobre o desempenho produtivo, a biometria e a morfometria do intestino delgado de pintos de corte de um a 21 dias de idade. Foram utilizados 480 pintos de corte machos de um dia de idade da linhagem Cobb. O delineamento foi inteiramente ao acaso, em esquema fatorial 2 x 4, com e sem suplementação de taurina e glicina e quatro dietas (controle, óleo de peixe, de soja e de girassol), totalizando oito tratamentos com seis repetições de 10 aves cada. As rações experimentais foram fornecidas de zero a quatro dias de idade. O desempenho zootécnico foi avaliado ao alojamento e aos quatro, sete e 21 dias de idade. Nestas mesmas datas, foram sacrificadas duas aves por unidade experimental para biometria do intestino e histomorfometria da mucosa do intestino. A adição de diferentes fontes de gordura e a suplementação de glicina e taurina às dietas de transição não influenciaram o desempenho produtivo de um a 21 dias. A suplementação das dietas com glicina e taurina alterou a morfologia da mucosa intestinal, principalmente do duodeno, resultando em maior comprimento do vilo e relação vilo:cripta. Entretanto, parte dos efeitos positivos depende do tipo de óleo adicionado, mostrando que dietas pós-eclosão acrescidas de fontes de lipídios podem ser benéficas no desenvolvimento da capacidade funcional do intestino de frangos de corte.(AU)

The aim of this study was to assess post-hatch diets supplemented with different sources of unsaturated fat and added or not with taurine and glycine on the productive performance, biometry and morphology of small intestine of chicks from 1 to 21 days of age. Four hundred and eighty (480) one day old male broiler Cobb chicks were used. The experimental design was completely randomized in a factorial 2 x 4, with and without supplemental taurine and glycine and 4 diets (control, fish, soy and sunflower oil), totaling six treatments with six repetitions of 10 birds each. The experimental diets were supplied from 0 to 4 days old. The performance was evaluated in housing and 4, 7 and 21 days of age. On these same dates, 2 birds per experimental unit were sacrificed for gut biometrics and histomorphometry of intestinal mucosa. The addition of different sources of fat, glycine and taurine supplementation on transition diets did not influence productive performance from 1 to 21 days. Supplementation of diets with glycine and taurine altered the morphology of the intestinal mucosa, mainly of the duodenum, resulting in greater length of villi and villi: crypt ratio. However, the positive effects depend on the type of oil added, showing that post-hatch diets increased with lipid sources may be beneficial in the development of the functional capacity of the intestine of broilers.(AU)

Efeitos de osmólitos na L- asparaginase II de Erwinia chrysanthemi em meio aquoso / Effects of omolytes in L- asparaginase II from Erwinia chrysanthemi in aqueous medium

A L- asparaginase é uma enzima aplicada no tratamento de Leucemia Linfoide Aguda, que atua na hidrólise da L- asparagina, privando a célula tumoral de um aminoácido essencial para o seu crescimento. A L- asparaginase, como outros biofármacos, deve ser estável, manter sua atividade específica e formar poucos agregados. A fim de manter a integridade do biofármaco, são utilizados adjuvantes nas formulações farmacêuticas, e dentre os mais importantes estão os osmólitos. Essas moléculas protegem a estrutura nativa da proteína, sendo capazes de interferir na formação de agregados e garantir a estabilidade proteica. O presente trabalho teve o objetivo de estudar o efeito dos osmólitos sacarose, sorbitol, arginina e glicina na atividade específica, estabilidade, cinética e caracterização de agregados na solução de L- asparaginase II de Erwinia chrysanthemi. Os resultados mostraram que a maioria dos osmólitos testados aumentou a atividade específica e a estabilidade da enzima, o que pode estar relacionado com o aumento da velocidade máxima e do kcat observados no ensaio cinético realizado com sacarose e sorbitol. Um perfil diferente de agregados foi encontrado para cada tipo de osmólito. A presença de sacarose ou sorbitol resultou na menor quantidade de agregados na faixa de, respectivamente, 100 a 200 e 200 a 300 nm em relação a enzima sem osmólito. Por outro lado, aumento no número total de agregados e presença de moléculas de alto peso molecular (300 a 500 nm) foram observados nas soluções enzimáticas contendo, respectivamente, glicina e arginina. Dessa forma, os resultados obtidos neste trabalho poderão auxiliar na produção e escolha da formulação de biofármacos, e, consequentemente, melhorar o tratamento medicamentoso de pacientes.

L L-Asparaginase is an enzyme applied in the treatment of Acute Lymphoblastic Leukemia, which acts on the hydrolysis of L- asparagine, depriving the tumor cell of an essential amino acid for its growth. L-asparaginase, as other biopharmaceuticals, must be stable, maintain its specific activity and form few aggregates. In order to maintain the integrity of the biopharmaceutical, adjuvants are used in the pharmaceutical formulations, and among the most importants adjuvants are the osmolytes. These molecules protect the native structure of the protein, being able of interfering in the formation of aggregates and guarantee protein stability. The present work had the objective of studying the effect of the osmolytes sucrose, sorbitol, arginine and glycine in the specific activity, stability, kinetic and aggregates characterization, in L- asparaginase II solution of Erwinia chrysanthemi. The results showed that the majority of the tested osmolytes increased the specific activity of the enzyme and its stability, which may be related to the augment of maximum velocity and kcat observed in the kinetic assay performed with sucrose and sorbitol. A different profile of aggregates was found for each type of osmolyte. The presence of sucrose or sorbitol resulted in the least amount of aggregates in the range of, respectively, 100-200 and 200-300nm in relation to the enzyme without osmolyte. On the other hand, increase in the total number of aggregates and the presence of high molecular weight molecules (300 to 500 nm) were observed in the enzymatic solutions containing, respectively, glycine and arginine. Thus, the results obtained in this work may help in the production and choice of the formulation of biopharmaceuticals and, consequently, improve the drug treatment of patients.

Asn336 is involved in the substrate affinity of glycine oxidase from Bacillus cereus

Background: Glycine oxidase (GO), a type of D-amino acid oxidase, is of biotechnological interest for its potential in several fields. In our previous study, we have characterized a new glycine oxidase (BceGO) from Bacillus cereus HYC-7. Here, a variant of N336K with increased the affinity against all the tested substrate was obtained by screening a random mutant library of BceGO. It is observed that the residue N336 is invariable between its homogeneous enzymes. This work was aimed to explore the role of the residue N336 in glycine oxidase by site-directed mutagenesis, kinetic assay, structure modeling and substrate docking. Results: The results showed that the affinity of N336H, N336K and N336R increased gradually toward all the substrates, with increase in positive charge on side chain, while N336A and N336G have not shown a little significant effect on substrate affinity. The structure modeling studies indicated that the residue Asn336 is located in a random coil between -J-18 and a-10. Also, far-UV CD spectra-analysis showed that the mutations at Asn336 do not affect the secondary structure of enzyme. Conclusion: Asn336 site was located in a conserved GHYRNG loop which adjoining to substrate and the isoalloxazine ring of FAD, and involved in the substrate affinity of glycine oxidase. This might provide new insight into the structure-function relationship of GO, and valuable clue to redesign its substrate specificity for some biotechnological application.