Falsely elevated serum estradiol due to heterophile antibody interference: a case report

SUMMARY Falsely elevated estradiol is rare, may result from heterophile antibody interference, and can result in unnecessary investigation and intervention. We present the case of a 56-year-old female with falsely elevated estradiol levels inconsistent with her overall clinical picture, which ultimately led to an unnecessary surgical procedure. With the use of alternative analytical platforms and a heterophile antibody blocking agent, we determined the false elevation was due to heterophile antibody interference. Clinicians must suspect and investigate for laboratory error when the clinical picture contradicts laboratory results.

Heterophilic antibodies in sera from individuals without loxoscelism cross-react with phospholipase D from the venom of Loxosceles and Sicarius spiders

Background Loxoscelism is a severe human envenomation caused by Loxosceles spider venom. To the best of our knowledge, no study has evaluated the presence of antibodies against Loxosceles venom in loxoscelism patients without treatment with antivenom immunotherapy. We perform a comparative analysis for the presence of antibodies capable of recognizing Loxosceles venom in a group of patients diagnosed with loxoscelism and in a group of people without loxoscelism. Methods The detection of L. laeta venom, Sicarius venom and recombinant phospholipases D from Loxosceles (PLDs) in sera from people with loxoscelism (Group 1) and from healthy people with no history of loxoscelism (Group 2) was evaluated using immuno-dot blot, indirect ELISA, and Western blot. Results We found naturally heterophilic antibodies (IgG-type) in people without contact with Loxosceles spiders or any clinical history of loxoscelism. Either serum pools or single sera from Group 1 and Group 2 analyzed by dot blot tested positive for L. laeta venom. Indirect ELISA for venom recognition showed titles of 1:320 for Group 1 sera and 1:160 for Group 2 sera. Total IgG quantification showed no difference in sera from both groups. Pooled sera and purified IgG from sera of both groups revealed venom proteins between 25 and 32 kDa and the recombinant phospholipase D isoform 1 (rLlPLD1), specifically. Moreover, heterophile antibodies cross-react with PLDs from other Loxosceles species and the venom of Sicarius spider. Conclusions People without contact with the spider venom produced heterophilic antibodies capable of generating a cross-reaction against the venom of L. laeta and Sicarius spiders. Their presence and possible interference should be considered in the development of immunoassays for Loxosceles venom detection.

Heterophilic antibodies in sera from individuals without loxoscelism cross-react with phospholipase D from the venom of Loxosceles and Sicarius spiders

Loxoscelism is a severe human envenomation caused by Loxosceles spider venom. To the best of our knowledge, no study has evaluated the presence of antibodies against Loxosceles venom in loxoscelism patients without treatment with antivenom immunotherapy. We perform a comparative analysis for the presence of antibodies capable of recognizing Loxosceles venom in a group of patients diagnosed with loxoscelism and in a group of people without loxoscelism. Methods The detection of L. laeta venom, Sicarius venom and recombinant phospholipases D from Loxosceles (PLDs) in sera from people with loxoscelism (Group 1) and from healthy people with no history of loxoscelism (Group 2) was evaluated using immuno-dot blot, indirect ELISA, and Western blot. Results We found naturally heterophilic antibodies (IgG-type) in people without contact with Loxosceles spiders or any clinical history of loxoscelism. Either serum pools or single sera from Group 1 and Group 2 analyzed by dot blot tested positive for L. laeta venom. Indirect ELISA for venom recognition showed titles of 1:320 for Group 1 sera and 1:160 for Group 2 sera. Total IgG quantification showed no difference in sera from both groups. Pooled sera and purified IgG from sera of both groups revealed venom proteins between 25 and 32 kDa and the recombinant phospholipase D isoform 1 (rLlPLD1), specifically. Moreover, heterophile antibodies cross-react with PLDs from other Loxosceles species and the venom of Sicarius spider. Conclusions People without contact with the spider venom produced heterophilic antibodies capable of generating a cross-reaction against the venom of L. laeta and Sicarius spiders. Their presence and possible interference should be considered in the development of immunoassays for Loxosceles venom detection.(AU)

Immune enhancement activities of silk lutein extract from Bombyx mori cocoons

BACKGROUND: Declining immune function poses an important clinical challenge worldwide and supplementation with natural products that possessing immune enhancing properties is a promising approach for preventing or delaying immune function decline. Cocoons from yellow silkworms are a significant source of lutein, and this unexplored silk extract could be a viable alternative source for dietary lutein. This study assessed immunomodulatory activities of the silk lutein extract. Female BALB/c mice orally received lutein, either as silk or marigold extracts (10 or 20 mg/kg daily), or vehicle only (1% tween 80 in PBS pH 7.4) for 4 weeks. Natural killer (NK) cell activity, specific antibody production, lymphocyte subpopulations, mitogen-induced lymphocyte proliferation, and cytokine production were examined. RESULTS: Silk lutein extract increased NK cell activity, and the effect was dose-related whereas marigold lutein extract was ineffective. Silk lutein extract dose-dependently enhanced antibody production in pre-immunized mice but marigold lutein extract had no effect. Feeding with silk lutein extract increased the populations of CD3+ and CD4 + CD3 + cells. Silk lutein extract also stimulated concanavalin A- and lipopolysaccharide-induced proliferations of T and B lymphocytes, respectively. Moreover, silk lutein extract increased IL-2 and IFN-γ production while the effect of marigold lutein extract was undetectable. CONCLUSIONS: Together, silk lutein extract enhanced both innate and adaptive immune functions. This preparation may prove to be an effective supplement for strengthened immunity.

Production and evaluation of chicken antibodies against a synthetic peptide from glial growth factor / Producción y evaluación de anticuerpos de gallinas contra un péptido sintético del factor de crecimiento glial

Neuregulins (NRG) are proteins that belong to the family of epidermal growth factors. It is well established that these factors are essential for the development and maintenance of the nervous system. Due to the difficulty of purifying enough quantities of these factors and the lack of specificity from commercially available antibodies, the aim of this work was to produce antibodies against a synthetic peptide capable to detect and identify neuregulin GGFb isoforms. To accomplish this goal, polyclonal antibodies were raised in hens against a synthetic peptide designed from the GGFb1 extracellular sequence. The sequence analysis was made using different epitope-predicting programs. Our results showed that the peptide sequence selected was immunogenic because it was capable of inducing a specific type B immune response in the experimental animal model. These antibodies were also capable of recognizing a recombinant GGF protein and GGF isoforms present in different samples. Our results suggest that the development of immunoglobulin Y (IgY) using synthetic peptides represents, a valuable tool for neuroscience research.

Las Neuregulinas (NRG) son proteínas que pertenecen a la familia de los factores de crecimiento epidermal. Se ha demostrado que estos factores son esenciales para el desarrollo y mantenimiento de la funcionalidad del sistema nervioso. Debido a la dificultad para purificar estas proteínas y la falta de especificidad de los anticuerpos disponibles comercialmente, el objetivo de este trabajo fue producir anticuerpos contra un péptido sintético capaz de detectar e identificar una isoforma de la Neuregulina (GGFb). Para lograr este objetivo, se desarrollaron anticuerpos en gallinas (IgY) contra un péptido sintético diseñado a partir de la secuencia aminoacídica de la región extracelular de GGFb, utilizando programas de predicción de epítopes. Los resultados demuestran que el péptido seleccionado fue immunogénico debido a que estimuló una respuesta inmune específica tipo B en el modelo utilizado. Estos anticuerpos fueron también capaces de reconocer una proteína recombinante e isoformas de GGF presentes en diferentes muestras biológicas. Nuestros resultados demuestran el potencial valor de las inmunoglobulinas Y (IgY) contra péptidos sintéticos como una herramienta de aplicación para la investigación en neurociencia.

Toxoplasma gondii: evaluation of immunofluorescence assay using heterologous secondary antibody in experimentally infected wild small rodents / Toxoplasma gondii: avaliação da reação de imunofluorescência indireta usando anticorpo secundário heterólogo em roedores silvestres experimentalmente infectados

Toxoplasmosis is a zoonotic infection caused by Toxoplasma gondii that affects a wide range of vertebrates. Rodents are intermediate hosts and serve as food for felids, the definitive hosts. However, because of the high variety of species in the order Rodentia, the serological diagnosis is difficult to perform, since the most used techniques require the use of specific antibody conjugated to fluorescein or enzymes. The aim of this study was to evaluate the use of a heterologous secondary antibody conjugate in Immunofluorescence Antibody Test (IFAT) for diagnosis of anti-T. gondii antibodies in two species of wild rodents: Euryoryzomys russatus (WAGNER, 1848) and Calomys callosus (RENGGER, 1830). The specie Mus musculus (Linnaeus, 1758) was used as control conjugate. The animals were experimentally infected with five cysts of T. gondii (strain ME 49) per animal. The Modified Agglutination Test (MAT), which does not require the use of conjugates, and the presence of T. gondii cysts in the rodents were used to confirm the infection. For each animal species, serum samples were collected weekly for five weeks and tested (50 samples per rodent specie, total of 150 samples). None of the samples from C. callosus and E. russatus were positive in the IFAT when anti-mouse heterologous conjugate was used. Brain cysts of T. gondii were microscopically observed in all animals, except in one of the E. russatus. Positive results were found in the MAT 14 days after T. gondii infection in all three species of rodents and IFAT of the control group (M. musculus) was also positive 14 days after infection using anti-mouse (homologous) conjugate. The use of heterologous secondary antibody conjugates should be used with caution and the MAT had a good agreement for serological diagnosis of T. gondii in the studied rodent species.

A toxoplasmose é uma zoonose causada pelo Toxoplasma gondii, que afeta uma grande variedade de vertebrados. Os roedores são hospedeiros intermediários e servem de alimento para felinos, os hospedeiros definitivos. No entanto, por causa da elevada variedade de espécies na ordem Rodentia, o diagnóstico serológico é difícil de ser realizado, uma vez que as técnicas mais empregadas requerem a utilização de um anticorpo específico conjugado com fluoresceína ou enzimas. O objetivo deste estudo foi avaliar o uso de um conjugado secundário heterólogo na Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para diagnóstico de anticorpos anti-T. gondii em duas espécies de roedores silvestres: Euryoryzomys russatus (WAGNER, 1848) e Calomys callosus (RENGGER, 1830). A espécie Mus musculus (Linnaeus, 1758) foi utilizada como controle do conjugado. As três espécies de roedores foram experimentalmente infectadas com cinco cistos de T. gondii (cepas ME 49) por animal. O Teste de Aglutinação Modificado (MAT), que não requer o uso de conjugados, bem como, a presença de cistos de T. gondii nos roedores foram usados para confirmar a infecção. Para cada espécie de animal, amostras de soro foram coletadas durante cinco semanas e testadas (50 amostras por espécie de roedor, total de 150 amostras). Nenhuma das amostras de C. callosus e E. russatus foram positivas na RIFI, quando foi usado o conjugado heterólogo anti-camundongo. Cistos cerebrais de T. gondii foram microscopicamente observados em todos os animais, exceto em um dos E. russatus. Resultados positivos foram encontrados pelo MAT após 14 dias de inoculação em todas as três espécies estudadas e pela RIFI no grupo controle (M. musculus), também no dia 14 após a infecção utilizando conjugado anti-camundongo. O uso de conjugados secundários heterólogos deve ser empregado com cautela e o MAT apresentou uma boa concordância para o diagnóstico sorológico de T. gondii nas espécies de roedores estudadas.

Thermostability of heterophile antibodies from human sera infected with Schistosoma mansoni and geo-helminths. an immuno-metric statistical analysis

Foram investigados anticorpos de soro humano que provocam lise de eritrócitos de carneiro em ensaios hemolíticos. O presente estudo mostra que a presença de anticorpos citolíticos termoestáveis contra hemácias de carneiro é dependente da infecção por Schistosoma mansoni e é mais freqüente em adultos do que em crianças. A característica termo estável da hemolisina em soros normais não é dependente da presença de Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura ou ancilostomídeos. Além disto, anticorpos heterófilos hemolíticos termo estáveis ativadores de complemento foram demonstrados em crianças com associação de altas cargas de ovos de S. mansoni. Os resultados foram obtidos usando-se os testes z- e o qui quadrado. O teste z- nos permite formular uma alternativa "one side", isto é, a tendência de um dos atributos. Por outro lado o teste do qui quadrado analisa a independência entre atributos usando-se uma tabela de contingência. Ao lado dos interessantes resultados obtidos no campo da esquistossomose mansoni, a abordagem estatística pode apontar novos caminhos para o tratamento de dados na ciência médica.

Ausencia de interferencias por anticuerpos heterófilos en la cuantificación de Troponina I Cardíaca, en pacientes con insuficiencia renal crónica terminal en tratamiento de hemodiálisis / Absence of interferences for heterophilic antibodies in the quantification de cardiac

El presente estudio pretende valorar el comportamiento de la adición del reactivo bloqueador de anticuerpos heterófilos (HBR) en la cuantificación de Troponina I cardíaca (TnIc) en pacientes con insuficiencia renal crónica terminal (IRCt) sometidos a tratamiento de hemodiálisis.Acada uno de los70 pacientes con IRCt en tratamiento de hemodiálisis en el Hospital Universitario Clínica San Rafael de Bogotá, se le tomó una muestra de suero y una de plasma heparinizado en la prediálisis, en las cuales se cuantificaron las concentraciones de TnIc con y sin adición de HBR, mediante el enzimoinmunoensayo Axsym. Se utilizó la prueba estadística de Wilcoxon. Los valores de TnIc en plasmas y sueros con y sin la adición de HBR no mostraron diferencias significativas (0.113 y 0.666 respectivamente), tanto en el total de los pacientes como en aquellos con enfermedad cardíaca crónica. El no haber encontrado diferencias en los valores de TnIc con y sin HBR nos lleva a pensar en la ausencia de anticuerpos heterófilos o en que el reactivo bloqueador HBR no tiene acción en esta población de pacientes.

Avaliaçäo dos potenciais problemas pré-analíticos e metabológicos em dosagens hormonais / Evaluating potential pre-analytical and methodological problems in hormone dosage

Dosagens hormonais säo particularmente susceptíveis a potenciais interferências, que podem ser de várias origens. Estes fatores interferentes podem ser divididos em pré-analíticos, metodológicos e pós-analíticos. Nesta revisäo nós procuramos abordar os dois primeiros tipos de interferentes. Os pré-analíticos incluem variaçöes fisiológicas relativas a dieta, ritmos biológicos, estresse, doenças näo endócrinas, uso de medicaçöes hormonais, etc. Podem também englobar problemas de coleta de amostras, que incluem o tipo de material utilizado, as condiçöes de manuseio e envio das amostras, e as conseqüências na preservaçäo física dos analitos. Já os interferentes metodológicos podem ser de várias origens e incluem anticorpos heterófilos, anticorpos endógenos anti-hormônios e outros interferentes das mais variadas origens. Todos estes fatores devem ser analisados em conjunto quando da interpretaçäo de uma dosagem hormonal.

On the correct determination of reference values for serum antibodies against pigeon serum antigen using a group of healthy blood donors

An ensymatic immunoassay was developed in order to evaluate the statistical distribution of IgG serum antibodies against pooled pigeon ser antigen in 102 healthy blood donors (HBD). A non-normal distribution was obtained as demonstrated by abnormal values of skewness (2.02) and kurtosis (6.50). A cut-off point (0.120) was determined from the mean plus 2 standard derivations of the optical density values obtained in the HBD group. This value was able to segregate 94 percent of subjects. However, when calculation of the mean less 2 SD was performed to delimit 95 percent of the samples, an aberrant negative value was obtained. In contrast, when the nonparametric method of percentile calculation was applied, an optical density value of 0.130 discriminated 97.5 percent of samples. In addition, the interval between p97.5 and p2.5 delimited 95 percent of samples. We conclude that when reference values and cut-off point are determined from an enzymatic immunoassay, careful analysis of the statistical distribution of reference values is necesary in order to avoid the inappropiated in this study for antibodies against pigeon serum antigens

Evaluación de la actividad fagocitaria y bactericida de los monocitos y heterófilos aviares contra Samonella gallinarum / Evaluation of phagocytic and bactericidal activities of avian monocytes and heterophils against Salmonella gallinarum in vitro

Se determinó, mediante ensayos in vitro, la capacidad fagocítica y bactericida de los deterófilos y de los monocitos aviares contra Salmonella gallinarum, en presencia y en ausencia de 10 por ciento de suero hiperinmune. En los ensayos de fagocitosis se observó que los hetrófilos fagocitaron al 28 ñ 4.7 por ciento de las bacterias sin opsonizar y al 45 ñ 9.9 por ciento de las bacterias opsonizadas, obteniéndose diferencias significativas (P< 0.05). En contraste, los monocitos sólo fagocitaron un 10.3 ñ 4.2 por ciento y un 11.7 ñ 3.8 por ciento de bacterias opsonizadas y sin opsonizar respectivamente (P> 0.05). En los ensayos bactericidas se observó que los heterófilos destruyeron al 90.46 ñ 3.3 por ciento de la bacteria sin opsonizar y 90 ñ 2.3 por ciento de la bacteria opsonizada (P> 0.05); sin embargo, en los monocitos se obtuvo un 10.5 ñ 6.6 por ciento y un 84.74 ñ 5 por ciento respectivamante, obteniéndose diferencias significativas (P< 0.05). Los resultados del presente estudio indican que la fagocitosis de los heterófilos fue significativamente incrementada por la opsonización; en el caso de los monocitos, no hubo un efecto significativamente mayor. Aproximadamente el 90 por ciento de las bacterias fagocitadas por los heterófilos fueron destruidos, como se determinó en el ensayo. La opsonización no incrementó significativamante el porcentaje de bacteria destruida por parte de los heterófilos, sin embargo, la psonización de Salmonella gallinarum sí favoreció la capacidad bactericida de los monocitos

Avaliaçäo de anticorpos naturais humanos (xeno-anticorpos) contra linfócitos de porco / Evaluation of human antibodies (xeno-antibodies) against porcine lymphocytes

A presença de anticorpos naturais contra células de porco (xeno-anticorpos) foi analisada em soros de indivíduos normais e de pacientes imunossuprimidos, imunodeficientes primários e renais crônicos hiperimunizados. Em indivíduos normais a média dos títulos observada foi de 1:664. Em 80,9 por cento de pacientes renais transplantados nao foi observado reduçao do título dos xeno-anticorpos após um ano de imunossupressao. Nos pacientes imunodeficientes foi observado um título mais reduzido, mas nunca inferior a 1:1. Após a eliminaçao dos anticorpos naturais do soro de pacientes renais crônicos hipersensibilizados com antígenos HLA, pela adsorçao dos soros com eritrócitos de porco seguido do tratamento com dithiotreitol (DTT), foi observado que os anticorpos IgG anti-HLA nao reagem com os antígenos de histocompatibilidade das células do porco. As conclusoes deste trabalho foram: o título dos xeno-anticorpos em indivíduos normais é muito elevado; a imunossupressao utilizada nos transplantes renais nao permite reduçao da barreira de anticorpos naturais; os imunodeficientes com títulos muito baixos destes anticorpos talvez possam usufruir de transplantes xenogênicos; o método de eliminaçao "in vitro" dos xeno-anticorpos é reproduzível; os soros dos pacientes renais crônicos hiperimunizados com antígenos HLA, nao reagem cruzadamente com linfócitos de porco.

Adecuación de la técnica de separación de heterófilos y monocitos aviares de sangre completa, utilizando gradientes discontínuos de Ficoll-Hypaque / Standardization of separation of avian heterophils and monocytes from whole blood using Ficoll-Hypaque discontinuous gradients

Se realizó la adecuación de la técnica de gradientes discontinuos de Ficoll-Hypaque, para la obtención de monocitos y heterófilos aviares puros y viables a partir sangre completa de pollos sanos de entre 8 y 9 semanas de edad. Al final de 10 repeticiones la cuenta total de monocitos obtenida fue de 0.25 X 10 6 a 0.46 X 10 6 por ml, con un porcentaje promedio de viabilidad y pureza de 97.65 ñ 1 para la primera y 95.17 ñ 0.97 para la segunda. La cuenta total de heterófilos fue de 0.41 X 10 6 a 1.15 X 10 6 por ml, con un porcentaje promedio de viabilidad y pureza de 99.4 ñ 0.4 para la primera y 96.77 ñ 1.88 para la segunda. Mediante esta técnica se pueden obtener monocitos y heterófilos viables, puros y cultivos in vitro para determinar mecanismos de quimiotaxis, fagocitosis y lisis contra bacterias

Evaluación retrospectiva de anticuerpos heterofilos y específicos contra el virus Epstein-Barr en pacientes con sospecha de mononucleosis infecciosa / Retrospective analysis of heterophile and specific antibodies to Epstein-Barr virus in patients with clinical diagnosis of infectious mononucleosis

Se realizó un estudio comparativo, retrospectivo entre las técnicas de Paul Bunnel Davidsohn y la de inmunofluorescencia para la pesquisa de anticuerpos específicos contra el virus de Epstein-Barr. Se analizaron 44 sueros de pacientes (18 hombres y 26 mujeres) menores de 30 años, enviados al Instituto de Salud Pública con el diagnóstico de mononucleosis infecciosa. Se detectaron 11 casos (+) para MNI, 9 de los cuales coincidieron por ambas técnicas. Un caso fue (+) solo por IFI y otro solo por PBD. Los (+) por IFI presentaron: IgG VCA (+), IgM VCA (+) y EBNA (-), los Ac anti early demostraron ser inespecíficos en el diagnóstico de esta enfermedad. Este trabajo demuestra que el PBD sigue siendo una buena alternativa para el diagnóstico de MNI y que bastaría realizar IgM VCA y EBNA para efectuar este mismo diagnóstico por la técnica de IFI. La detección de Ac específicos debiera realizarse de rutina en niños menores y cuando se desee conocer el estado inmune de un individuo al VEB