Polymerase chain reaction-Based clonality analysis of cutaneous B-cell lymphoproliferative processes

Introduction: The differential diagnosis of B-cell lymphoproliferative processes remains a challenge for pathologists, dermatologists and oncologists, despite advances in histology, immunohistochemistry and molecular biology. Objective: Evaluate aid and limitations of clonality analysis in the diagnosis of primary cutaneous B-cell lymphomas and B-cell pseudolymphomas. Methods: This study included 29 cases of B-cell lymphoproliferative processes classified as primary cutaneous B-cell lymphomas (13), B-cell pseudolymphomas (6) and inconclusive cases (10) using histology and immunohistochemistry. The clonality analysis was performed by polymerase chain reaction analysis of immunoglobulin light chain and heavy chain rearrangements. Results: DNA quality was shown to be generally poor; eight samples were inadequate for polymerase chain reaction analysis. The results showed monoclonality in eight of the primary cutaneous B-cell lymphomas and polyclonality in four of the B-cell pseudolymphomas. In addition, monoclonality was shown in two of the inconclusive cases by histology and immunohistochemistry, demonstrating the utility of polymerase chain reaction as an ancillary diagnostic tool for primary cutaneous B-cell lymphomas. Discussion: The low quality DNA extracted from these cases demanded the use of an IgH protocol that yielded small fragments and IgK. Both methods used together improved detection. Conclusion: Use of the two protocols, immunoglobulin heavy chain FR3-trad and immunoglobulin light chain-Kappa Biomed protocols for clonality analysis improved diagnostic accuracy.

Nefropatía no amiloidea por depósito de inmunoglobulinas monoclonales: A propósito de un caso de enfermedad idiopática por depósito de cadenas ligeras / Nonamyloidotic glomerular disease caused by light chain deposits: a case report

La nefropatía de las gammapatías monoclonales es debida, principalmente, al depósito de cadenas ligeras. Las enfermedades renales paraproteinémicas son lesiones asociadas con depósitos de inmunoglobulinas intactas o fragmentos de inmunoglobulinas (cadenas pesadas y cadenas ligeras). La enfermedad por depósito de cadenas ligeras es una condición rara, caracterizada por el depósito de cadenas monoclonales ligeras en muchos órganos y, en el riñón, predominantemente, en glomérulos y membranas basales tubulares. La enfermedad está frecuentemente asociada con alteraciones linfoproliferativas y la mayoría de casos son causados por depósito de cadenas ligeras kappa. Aunque se presenta sobre todo en cuadros malignos, en ocasiones, no se detecta enfermedad hematológica y se denomina idiopática o primaria. Suele manifestarse como una insuficiencia renal grave con proteinuria nefrótica, no tiene tratamiento claramente establecido y el pronóstico es malo. Se describen las características clínicas e histológicas del primer caso informado en Colombia de nefropatía por depósito de cadenas ligeras, diagnosticado en el contexto de una enfermedad renal paraproteinémica sin datos de malignidad.

The nephropathy of monoclonal gammopathies is principally caused by light chain deposits of fragmented immunoglobins. Paraprotein-related renal diseases are associated with such deposits of intact (heavy chain) or fragmentary (light chain) immunoglobins. A condition of pathological light chain deposits is rare and characterized by deposits of fragments of monoclonal immunoglobulins in many organs. Renal deposits occur primarily in glomeruli and tubular basement membranes. This disease is frequently associated with lymphoproliferative disorders. The majority of cases are caused by deposits of kappa light chains. Whereas this disease is most frequently associated with hematologic malignancies, occasionally a case occurs without detectable hematological pathologies; these cases are called idiopathic or primary. They usually manifest themselves as severe renal insufficiencies with nephrotic-range proteinuria. No treatment regime has been clearly established and the prognosis is poor. Herein, the clinical and histological characteristics are described regarding the first case in Colombia of light chain deposit disease without symptoms of malignancy.

Impacto dos genes IgVH, LPL, ADAM29 e da proteína Zap-70 no prognóstico da leucemia linfocítica crônica / Prognostic impact of IgVH, LPL and ADAM29 genes, and Zap-70 protein in chronic lymphocytic leukemia

Objetivo: A leucemia linfocítica crônica (LLC) é marcada pela heterogeneidade evolutiva, que não pode ser prevista pelos atuais sistemas de estadiamento clínico. Recentemente, o estado mutacional dos genes IgVH vem sendo considerado como o melhor marcador de prognóstico nesta doença. No entanto, sua análise não é aplicável à rotina clínica, sendo o nosso principal objetivo o encontro de um marcador substituto (surrogate) de fácil utilização e reprodutibilidade. Métodos: Foram estudados pacientes com LLC acompanhados pelo Grupo Cooperativo Francês em LLC, pela Universidade Federal de São Paulo ou pelo Hospital do Servidor Público Estadual-SP. Inicialmente, investigamos a possibilidade de substituição do estudo IgVH pelo estadiamento clínico de Binet. A seguir, empregamos a técnica de microarrays buscando marcadores surrogate no perfil de expressão gênica diferencial entre os grupos IgVH mutado e não-mutado. Enfim, utilizamos RT-PCR quantitativa e citometria de fluxo para validação de nossos achados numa série ampliada de pacientes, onde analisamos o impacto da expressão de cada marcador em relação ao prognóstico na LLC. Resultados: O estadiamento clínico de Binet e o estado mutacional IgVH mostraram-se como fatores independentes, porém complementares, de prognóstico na LLC. Encontramos os genes LPL, ADAM29 e ZAP-70 como potenciais surrogates ao estado mutacional IgVH. Confirmamos os resultados obtidos nos microarrays, e verificamos que os perfis de expressão da relação LPLIADAM29 e a da proteína Zap-70 possuem alta correlação com o estado mutacional IgVH e com o prognóstico na LLC. Além disso, a associação dos resultados de LPLIADAM29 e Zap-70 mostrou ser capaz de dispensar o estudo IgVH em 80 por cento dos pacientes. Conclusões: O estadiamento clínico ainda possui um papel independente de prognóstico na LLC, e a avaliação do estado mutacional IgVH pode ser substituída, num futuro próximo, por LPL, ADAM29 e Zap-70

Prognostic significance of bi/oligoclonality in childhood acute lymphoblastic leukemia as determined by polymerase chain reaction

CONTEXT: The CDR-3 region of heavy-chain immunoglobulin has been used as a clonal marker in the study of minimal residual disease in children with acute lymphoblastic leukemia. Southern blot and polymerase chain reaction studies have demonstrated the occurrence of bi/oligoclonality in a variable number of cases of B-lineage acute lymphoblastic leukemia, a fact that may strongly interfere with the detection of minimal residual disease. Oligoclonality has also been associated with a poorer prognosis and a higher chance of relapse. OBJECTIVES: To correlate bi/oligoclonality, detected by polymerase chain reaction in Brazilian children with B-lineage acute lymphoblastic leukemia with a chance of relapse, with immunophenotype, risk group, and disease-free survival. DESIGN: Prospective study of patientsÆ outcome. SETTING: Pediatric Oncology Unit of the University Hospital, Faculty of Medicine of Ribeiräo Preto, University of Säo Paulo. PARTICIPANTS: 47 children with acute lymphoblastic leukemia DIAGNOSTIC TEST: Polymerase chain reaction using consensus primers for the CDR-3 region of heavy chain immunoglobulin (FR3A, LJH and VLJH) for the detection of clonality. RESULTS: Bi/oligoclonality was detected in 15 patients (31.9 percent). There was no significant difference between the groups with monoclonality and biclonality in terms of the occurrence of a relapse (28.1 percent versus 26.1 percent), presence of CALLA+ (81.2 percent versus 80 percent) or risk group (62.5 percent versus 60 percent). Disease-free survival was similar in both groups, with no significant difference (p: 0.7695). CONCLUSIONS: We conclude that bi/oligoclonality was not associated with the factors investigated in the present study and that its detection in 31.9 percent of the patients may be important for the study and monitoring of minimal residual disease

Propuesta de caracterización y tipificación de proteínas monoclonales aplicable al laboratorio clínico / Proposal of characterization and typification of monoclonal proteins applicable to clinical laboratory

En el presente trabajo se incorporan y ordenan procedimientos para obtener la mayor información posible a nivel laboratorio clínico en la indagación de proteínas "M" y la definición de su clase (cadenas pesadas) y tipo (cadenas livianas). Se propone una secuencia de las siguientes técnicas: electroforesis, inmunoelectroforesis, inmunofijación, inmunodifusión radial cuantitativa, tratamientos despolimerizantes e inmunosustracción. La inmunosustracción, descripta por W. A. White y col., consiste en la remoción de la inmunoglobulina en estudio mediante un antisuero específico en presencia de polietilenglicol, separación del inmunocomplejo precipitado y posterior evaluación del sobrenadante mediante inmunofijación; se identifica la cadena liviana que pertenece a la inmunoblobulina sustraída por su ausencia al fijar con el antisuero correspondiente. Es particularmente útil cuando se desea establecer la correspondencia liviana/pesada en presencia de bandas homogéneas múltiples, identificar bandas menores enmascaradas en un fondo policlonal y excluir la presencia coincidente de cadenas livianas libres. Se aconseja incorporar el tratamiento despolimerizante con 2-mercaptoetanol previamente a la cuantificación de IgM por inmunodifusión radial ya que la comparación previa entre controles tratados y no tratados reveló una diferencia muy significativa cuando se analizó mediante contraste de diferencias entre pares homólogos (n = 12, test t = 37,2 p <0,01)

Characterization of plasma cell subsets in thyroid disease

La glándula tiroides puede presentar patologías que desde el punto de vista histológico muestran diferentes grados de infiltración linfocitaria y plasmocitaria. Con el fin de identificar los subtipos de células plasmáticas en algunas patologías tiroideas nosotros hemos realizado un estudio inmunohistoquímico sobre la presencia de cadenas pesadas (IgG, IgA, IgM) y livianas (K y L) que se pueden encontrar en el citoplasma de las células plasmáticas. En las tiroiditis de Hashimoto estudiadas se encontró un predominio de células plasmáticas conteniendo IgG y kappa. El estroma linoplasmocitario que a veces acompaña al carcinoma papilar de tiroides también mostró una mayor frecuencia de células plasmáticas con IgG, aunque lambda fue la cadena liviana predominante en este caso. Por otro lado, las tiroiditis de Riedel mostraron un mayor predominio de IgA y lambda. Los 6 casos de fibrosis retroperitoneal, enfermedad a veces asociada con tiroiditis de Riedel, mostraron en conjunto una distribución de subtipos de células plasmáticas similar a la observada en las tiroiditis de Riedel aunque la frecuencia de células con IgA fue menos marcada. Estos resultados sugieren que la desigual distribución de inmunoglobulinas citoplasmáticas en estas entidades estudiadas puede estar relacionada con la presencia de diferentes antígenos involucrados en el proceso patogénico que trae aparejado el infiltrado linfoplasmocitario