TRIAGEM NEONATAL DE IMUNODEFICIÊNCIAS GRAVES COMBINADAS POR MEIO DE TRECS E KRECS: SEGUNDO ESTUDO PILOTO NO BRASIL / NEWBORN SCREENING FOR SEVERE COMBINED IMMUNODEFICIENCIES USING TRECS AND KRECS: SECOND PILOT STUDY IN BRAZIL

RESUMO Objetivo: Validar a quantificação de T-cell receptor excision circles (TRECs) e kappa-deleting recombination circles (KRECs) por reação em cadeia de polimerase (polymerase chain reaction, PCR) em tempo real (qRT-PCR), para triagem neonatal de imunodeficiências primárias que cursam com defeitos nas células T e/ou B no Brasil. Métodos: Amostras de sangue de recém-nascidos (RN) e controles foram coletadas em papel-filtro. O DNA foi extraído e os TRECs e KRECs foram quantificados por reação duplex de qRT-PCR. O valor de corte foi determinado pela análise de Receiver Operating Characteristics Curve, utilizando-se o programa Statistical Package for the Social Sciences (SSPS) (IBM®, Armonk, NY, EUA). Resultados: 6.881 amostras de RN foram analisadas quanto à concentração de TRECs e KRECs. Os valores de TRECs variaram entre 1 e 1.006 TRECs/µL, com média e mediana de 160 e 139 TRECs/µL, respectivamente. Três amostras de pacientes diagnosticados com imunodeficiência grave combinada (severe combined immunodeficiency, SCID) apresentaram valores de TRECs abaixo de 4/µL e um paciente com Síndrome de DiGeorge apresentou TRECs indetectáveis. Os valores de KRECs encontraram-se entre 10 e 1.097 KRECs/µL, com média e mediana de 130 e 108 KRECs/µL, e quatro pacientes com diagnóstico de agamaglobulinemia tiveram resultados abaixo de 4 KRECs/µL. Os valores de corte encontrados foram 15 TRECs/µL e 14 KRECs/µL, e foram estabelecidos de acordo com a análise da Receiver Operating Characteristics Curve, com sensibilidade de 100% para detecção de SCID e agamaglobulinemia, respectivamente. Conclusões: A quantificação de TRECs e KRECs foi capaz de diagnosticar crianças com linfopenias T e/ou B em nosso estudo, validando a técnica e dando o primeiro passo para a implementação da triagem neonatal em grande escala no Brasil.

ABSTRACT Objective: To validate the quantification of T-cell receptor excision circles (TRECs) and kappa-deleting recombination excision circles (KRECs) by real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) for newborn screening of primary immunodeficiencies with defects in T and/or B cells in Brazil. Methods: Blood samples from newborns and controls were collected on filter paper. DNA was extracted and TRECs, and KRECs were quantified by a duplex real-time PCR. The cutoff values were determined by receiver operating characteristic curve analysis using SPSS software (IBM®, Armonk, NY, USA). Results: Around 6,881 samples from newborns were collected and TRECs and KRECs were quantified. The TRECs values ranged between 1 and 1,006 TRECs/µL, with mean and median of 160 and 139 TRECs/µL, respectively. Three samples from patients with severe combined immunodeficiency (SCID) showed TRECs below 4/µL and a patient with DiGeorge syndrome showed undetectable TRECs. KRECs values ranged from 10 to 1,097 KRECs/µL, with mean and median of 130 and 108 KRECs/µL. Four patients with agammaglobulinemia had results below 4 KRECs/µL. The cutoff values were 15 TRECs/µL and 14 KRECs/µL and were established according to the receiver operating characteristic curve analysis, with 100% sensitivity for SCID and agammaglobulinemia detection, respectively. Conclusions: Quantification of TRECs and KRECs was able to diagnose children with T- and/or B-cell lymphopenia in our study, which validated the technique in Brazil and enabled us to implement the newborn screening program for SCID and agammaglobulinemia.

Human polyclonal anti-hepatitis B surface antigen immunoglobulin reduces the frequency of acute rejection after liver transplantation for chronic hepatitis B

BACKGROUND: Use of polyclonal anti-hepatitis B surface antigen immunoglobulin (HBIg) has been shown to reduce hepatitis B virus (HBV) recurrence after liver transplantation (LT) and to decrease the frequency of acute cellular rejection (ACR). However, the protective role of HBIg against ACR remains controversial, since HBV infection has been also associated with a lower incidence of ACR. AIM: To assess the relationship between HBIg immunoprophylaxis and the incidence of rejection after LT. METHODS: 260 patients (158 males, 43 + or - 14 years old) submitted to LT were retrospectively evaluated and divided into three groups, according to the presence of HBsAg and the use of HBIg. Group I was comprised of HBsAg-positive patients (n = 12) that received HBIg for more than 6 months. Group II was comprised of HBsAg-positive patients that historically have not received HBIg or have been treated irregularly for less than 3 months (n = 10). Group III was composed of 238 HBsAg-negative subjects that have not received HBIg. RESULTS: HBIg-treated patients (group I) had significantly less ACR episodes, when compared to group II and III. No differences between groups II and III were observed. CONCLUSIONS: Long-term HBIg administration contributes independently to reduce the number of ACR episodes after LT

Obtention of rabies antigen through BHK21 cells adhered to microcarriers

Foram produzidos quatro lotes de antigeno rabico a partir de suspensoes de virus resultantes de celulas BHK21 infectadas, aderidas a microcarregadores do tipo Cytodex 1 e cultivadas em biorreator. Em paralelo foi utilizada a metodologia de producao de virus rabico com celulas BHK21 em monocamadas, contidas em garrafas de 350cm2. Os resultados encontrados demonstraram que os titulos infectantes foram de 10 elevado a 6.69 DL50/mL para as suspensoes virais obtidas em garrafas e 10 elevado a 7.28 DL50/mL para as do biorreator. Os volumes das suspensoes virais colhidas foram, em media de 11.900 mL por lote do biorreator e 800 mL por garrafa. Com o antigeno produzido no biorreator foram imunizados 10 cavalos. As medias dos titulos de anticorpos anti-rabicos encontrados nos soros destes animais foram de 240 e 212 UI/mL, respectivamente apos a base e o primeiro reforco. Atraves da infeccao de celulas BHK21 aderidas, a microcarregadores e cultivadas em biorreator, pode-se obter antigeno rabico em larga escala e com titulos infectantes satisfatorios

Anticuerpos y receptores de células B / Antibodies and B cell receptors

Las inmunoglobulinas o anticuerpos son glicoproteínas que se encuentran en la superficie de los linfocitos B y son secretadas por las células plasmáticas, linfocitos B terminalmente diferenciados, en respuesta a un antígeno y, como tal, representan la inmunidad humoral de los vertebrados. Existen 5 formas o isotipos principales: IgG, IgM, IgA, IgD e IgE. Las Igs presentan una estructura básica que posee dos cadenas pesadas (H) idénticas y dos cadenas livianas (L) idénticas, unidas entre sí por puentes disulfuro e interacciones no covalentes. Ambos tipos de cadenas presentan un patrón estructural que consiste de segmentos o dominios de 110 aminoácidos. El análisis de su secuencia de aminoácidos revela la existencia de un dominio variable (V) hacia el extremo aminoterminal y varios dominios constantes (C) hacia el extremo carboxilo terminal. Las cadenas pesadas también poseen un dominio variable (VL) y uno constante (CL). Las cadenas pesadas también poseen un dominio variable (VH) pero tienen 3 ó 4 dominios constantes (CH). Los dominios variables de mabas cadenas contienen zonas de alta variabilidad no contiguas en la secuencia de aminoácidos, son las denominadas regiones hipervariables o CRD (determinantes de complementariedad) y son las principales responsables de la diversidad de los anticuerpos...

La inmunoperoxidasa en el estudio de las trombocitopenias inmunológicas / Immunoperoxidase in the studies of immune thrombocytopenias

The usefulness of different techniques to measure platelet bound IgG has been reviewed by George(16). We present here the results obtained with a technique designed to measure membrane bound IgG employing an anti-human IgG labeled with peroxidase and using O-dianisidine-H2O2 to reveal the enzymatic activity(17). We studied 152 patients with chronic autoimmune thrombocytopenic (ATP) including 120 adults and 32 children (age below 15 years old), diagnosed by exclusion of diseases that may be associated with thrombocytopenic purpura of either immune or non-immune mechanisms. Besides, 79 patients with thrombocytopenia related to other diseases were also evaluated. The normal values in 215 controls were 188 +/- 4 IgG molec/platelet (mean +/- SE), while in the whole population of chronic ATP the results were 4714 +/- 344, p < 0.001. In pediatric cases the results had a tendency to values higher than in adults. A negative correlation was found between the number of platelets and the amount of bound IgG, r = 0.41 p < 0.001. IgG bound platelets were also increased in treated patients at relapse. The percent of normal IgG bound platelet was 4,5 percent in patients with a platelet count below 50.000/microliter and 39 percent in those with normal platelet number. Patients with secondary thrombocytopenia had elevated IgG/platelet while the values were normal in patients with thrombocytopenia of unknown etiology. We conclude that the immunoperoxidase technique is useful to establish the immunologic nature of thrombocytopenia.

La inmunología en lactantes y preescolares en riesgo nutricional / Immunologic assessment of children at risk of undernutrition

La desnutrición, con su alta prevalencia de procesos infecciosos, origina cambios en el sistema inmune. Se realizó la evaluación del estado nutricional e inmunológica en 55 niños lactantes y preescolares que presentaron diarrea (ED) o infección respiratoria (IR) y se comparó con un grupo control. Se determinaron linfocitos T (LT) por rosetas y B (LB) por inmunoglobulina de superficie, a niveles de inmunoglobulinas A, G y M, y fracciones 3 y 4 de complemento por inmunodifusión radial. LT y LB en controles sanos fue de 52,3 ñ 7,9 y 20,1 ñ 6,4 respectivamente; en los enfermos fueron bajos IgA y C3 fue para EDy mayores y significativos en IR. La asociación patología desnutrición disminuyó los LT y LB y la fracción 3 de complemento. En los desnutridos las poblaciones de linfocitos aumentaron después e una semana de terapia específica y nutricional. Hubo relación entre severidad del daño nutricional y cambios inmunológicos

Actividad inmunoadyuvante del Staphylococcus aureus: efecto sobre la respuesta humoral y el sistema fagocítico mononuclear en ratas / Inmunoadyuvant activity of staphylococcus aureus:effect on humoral response and mononuclear phagocytic system in rats

Se estudió el efecto del S. aureus y de varios tipos celulares sobre: a) producción de anticuerpos (hemaglutininas) y b) estimulación del Sistema Fagocítico Mononuclear (S.F.M.). Ratas adultas, endocriadas,recibieron:I) células de exudado peritoneal (CEP); II) células del bazo (CB); III) células de bazo no-adherentes (CBN-A); IV) células de exudado peritoneal normal (CEPN); V) células de bazo normal (CBN); VI) células de bazo normal no-adherentes (CBN N-A); VII) S. aureas s.c. y VIII) (-). I, II y III proveían de ratas inoculadas 7 días antes con S. aureus y IV,V y VI de animales normales. Se sensibilizó con glóbulos rojos de carnero al 50 por ciento. Se determinó el título de hemaglutininas séricas totales y con 2 mercapto etanol en la Respuesta primaria y en la Respuesta secundaria, posterior al segundo inóculo. Se estimó peso y se practicó un estudio anatomopatológico del hígado y bazo de los animales tratados con S. aureus y testigos. Se hallaron diferencias significativas en el título de hemaglutininas en todos los días estudiados (Respuesta primaria y secundaria)-p<0,0l;p<0,05-entre los grupos I,II,III,VII vs. IV,V,VI y VIII. Se pesó el hígado y bazo (corregido/peso del animal) en ratas inoculadas con S. aureus (1) y sin tratamiento o control (2). Los valores fueron significativamente mayores en (1) (p<0,001). Hígado: a) 5,746 Ð 0,67; b) 3,609 Ð 0,456. Bazo: a)0,5698 Ð 0,067; b) 0,325 Ð 0,05. Las modificaciones anatomopatológicas en hígado y bazo se observaron con mayor frecuencia e intensidad en los animales tratados que en los testigos (p<0,01). Se confirma el efecto adyuvante del S. aureus, ya que produce aumento de peso e importantes modificaciones anatomopatológicas del órganos del S.F.M., eleva la respuesta humoral a un antígeno no relacionado y estimula la memoria inmunológica

Formación de roseta espontánea con eritrocitos de ratón en la leucemia linfoide crónica / Spontaneous mouse erythrocyte-rosette formation in chronic lymphocytic leukemia

Se estudió la formación de linfocitos formadores de roseta espontánea con eritrocitos de ratón (linfocitos-FRER) en 41 enfermos con leucemia linfoide crónica (LLC), 31 hombres y 10 mujeres. La edad promedio fue de 70 años, con un rango entre 30 y 80 años. Treinta y cinco pacientes presentaron valores de inmunoglobulinas de superficie IgS superiores al 40