Caracterización de la cadena CD3 epsilon en el primate del nuevo mundo Aotus nancymaae / Characterizing the CD3 epsilon chain from the new world primate Aotus nancymaae

Introducción. El complejo asociado al receptor de las células T (TCR), está constituido por las moléculas CD3 (δ , γ , ε ) y las cadenas ζ , todas proteínas transmembranales esenciales para la transducción de señales durante la activación del linfocito y la respuesta inmune, así como durante el desarrollo de lostimocitos. Objetivo. En este trabajo se buscaba determinar la estructura primaria de la cadena CD3 ε , en el mono del nuevo mundo Aotus nancymaae. Materiales y métodos. A partir de ARN total obtenido de células mononucleares de sangre periférica, se amplificó la molécula de CD3 ε , luego se clonó en un vector y finalmente se secuenció. Resultados. Se presenta la secuencia deducida de aminoácidos de la cadenaCD3 ε de Aotus nancymaae. Se estableció una identidad del 84 por ciento y del 76 por ciento en la secuencia nucleotídica y la de aminoácidos, respectivamente, con su contra partehumana. La molécula de Aotus, muestra bastante variabilidad en la región extracelular y bastante conservación en la intracelular. Subregiones delectodominio que son importantes para el plegamiento de la molécula, así como para la asociación con las otras cadenas del complejo están conservadas. Conclusiones. La estructura primaria determinada aquí, sugiere que la proteína de Aotus tiene una funcionalidad similar y que los pasos iniciales de activación de la célula T, se suceden como en humanos; por otra parte, la gran variabilidad encontrada en el ectodominio, permite explicar porque algunos anticuerpos monoclonales dirigidos contra el complejo CD3 de humano, no reconocen estas estructuras en el Aotus.

The calcium chelator BAPTA affects the binding of assembly protein AP-2 to membranes

Clathrin coated vesicles are involved in receptor-mediated transport. The coat of these vesicles is constituted mostly of clathrin and the assembly proteins AP-1 or AP-2. In the present study using an in vitro binding system, we found that the interaction of AP-2 but not AP-1 with membranes diminished when the calcium chelating agent BAPTA was added. The maximal inhibitory effect was observed with 10 mM of the chelating agent. Binding of AP-2 to membranes was recovered by adding calcium in a concentration-dependent fashion. Binding was also affected when the membranes were previously treated with BAPTA and then washed. However, other chelating agents such as EDTA or EGTA, as well as the zinc chelating TPEN, did not have any effect on the binding. From these results we postulate a role for calcium in regulating the assembly-disassembly cycle of adaptors in the formation of clathrin coated vesicles.