RESUMO
A revisão sistemática teve como objetivo avaliar a efetividade dos testes de ácido nucleico no rastreio da C. trachomatis. A maioria dos estudos foi localizada via internet, entretanto, alguns deles foram encontrados em revistas que abordavam o tema e mediante contato com especialistas. Os artigos foram selecionados após criteriosa avaliação crítica da força de evidência científica, obedecendo às regras da Associação Médica Brasileira e do Conselho Federal de Medicina, além dos critérios de Irwig, para análise qualitativa dos artigos. A revisão incluiu todos os estudos publicados a partir de 1990 que avaliavam testes de ácido nucleico em mulheres sexualmente ativas, assintomáticas e que tivessem sido submetidas à avaliação clinica e a testes moleculares. Os testes de ácido nucleico que utilizavam sondas de RNA e amplificação de DNA (PCR) foram comparados à cultura (padrão-ouro) com o intuito de determinar se seriam método de diagnóstico adequado para o rastreio da infecção. Após análise qualitativa, foram selecionados 12 estudos, mas não foi possível realizar avaliação quantitativa dos mesmos devido à heterogeneidade dos dados. A efetividade e os benefícios dos testes de ácido nucleico justificam estudos de custo-efetividade, com o intuito de avaliar o impacto do rastreio universal na redução das complicações advindas da infecção clamidiana
This systematic review aims at evaluating the effectiveness of the nucleic acid test for detection of C. trachomatis. Most of the studies were searched electronically and key journals were hand-searched. Further studies were identified in the internet and by contacting experts in the field. The articles were selected after careful critical evaluation of the strength of scientific evidence, according to the rules of the Brazilian Medical Association and the Federal Council of Medicine, besides the Irwig's criteria for qualitative analysis of article The review included all studies published from 1990 onward that evaluated nucleic acid tests in asymptomatic, young and sexually active women that have been subjected to clinical evaluation and molecular testing. The nucleic acid tests taken with the use of probes of RNA and amplification (PCR) were compared to culture (gold standard) in order to determine if a method of diagnosis would be appropriate for screening of infection. After the qualitative analysis, we selected 12 studies; it has not been possible to perform their quantitative evaluation due to the heterogeneity of data. The effectiveness and benefits of DNA testing justify the cost-effectiveness studies in order to assess the impact of universal screening in reducing the complications that arise from chlamydial infection
Assuntos
Humanos , Feminino , Ácidos Nucleicos , Cervicite Uterina/diagnóstico , Chlamydia trachomatis/isolamento & purificação , Infecções por Chlamydia/complicações , Infecções por Chlamydia/diagnóstico , Infecções por Chlamydia/microbiologia , Programas de Rastreamento/métodos , Sondas RNA , Técnicas e Procedimentos DiagnósticosRESUMO
A técnica de hibridização in situ (ISH) tem sido usada para identificar mRNA (ou DNA) em amostras de tecido de material humano e animal. Embora uma série de protocolos para essa técnica seja utilizada, as descrições não são bem detalhadas. O objetivo deste trabalho é descrever a reação de hibridização in situ em tecido fresco e sua aplicação em patologia, tornando mais compreensível essa técnica tão importante, que possibilita observar a localização tecidual e a expressão temporal e espacial dos transcritos de um determinado gene (mRNA). Resultados de reações com as ribossondas PITX1, SHH e WNT-5A, realizadas em amostras de tecido congelado, são apresentados.
In situ hybridization (ISH) has been used to identify mRNA (or DNA) in fresh tissue samples of humans and animals. Several protocols describing this technique are available, although its description is not usually detailed enough. The present work describes in situ hybridization reaction on fresh tissue in a way to make understandable this important technique, which allows verifying the cellular localization, and the spatial and temporal expression, of gene transcripts (mRNA). Results with PITX1, TGIF, SHH and WNT-5A riboprobes, in fresh tissue samples, are presented.
Assuntos
Hibridização In Situ/métodos , Sondas RNA , Fixação de Tecidos , Técnicas HistológicasRESUMO
O objetivo deste artigo é revisar e comentar as vantagens e desvantagens dos diferentes tipos de testes de detecçäo de Chlamydia trachomatis na rotina de laboratórios clínicos, com ênfase nas técnicas de amplificaçäo. A Chlamydia trachomatis é considerada a bactéria sexualmente transmissível mais freqüente em países desenvolvidos e de grande impacto no sistema reprodutivo das mulheres. É o agente causador de doenças do trato urogenital, linfogranuloma venéreo (LGV), tracoma, conjutivite de inclusäo e pneumonia no recémðnascido. Um dos fatores de risco para a infecçäo é a prática sexual entre adolescentes. A recorrência das infecções é comum. Episódios sucessivos de infecçäo aumentam o risco de desenvolver seqüelas e a chance de contrair a infecçäo pelo vírus da imunodeficiência humana. O dignóstico da infecçäo pela Chlamydia trachomatis ainda é crítico, devido à freqüência de infecções assintomáticas. As técnicas de amplificaçäo de ácidos nucléicos permitem utilizar urina para a detecçäo da clamídia, simplificando a coleta. Apresentam maior sensibilidade do que a cultura e do que os testes mais utilizados, como a imunofluorescência direta e o enzimaimunoensaio. A cultura celular, utilizada como padräoðouro, tem especificidade de 100 por cento e sensibilidade de 70 por cento a 85 por cento. De acordo com o Centers for Disease Control (CDC), um diagnóstico é considerado definitivo quando positivo em cultura ou em pelo menos dois testes näoðculturais distintos. Os testes de amplificaçäo säo mais dispendiosos do que os demais testes näoðculturais, mas de menor custo que a cultura
Assuntos
Humanos , Técnicas Bacteriológicas , Chlamydia trachomatis , Técnicas de Laboratório Clínico , Técnica Direta de Fluorescência para Anticorpo , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo , Técnicas Imunoenzimáticas , Infecções por Chlamydia/diagnóstico , Infecções por Chlamydia/microbiologia , Técnica de Amplificação ao Acaso de DNA Polimórfico , Sondas RNA , Sensibilidade e EspecificidadeRESUMO
Background: Restenosis post stenting is due to the deposit of extracellular matrix, mainly collagen in the neointima. Controversy exists regarding if collagen is generated locally or by immigration from the adventitia. Aim: To study the fibrocellular response after stent implantation in rabbit iliac arteries. To observe, by immunohistochemistry and in situ hybridization, if collagen type I mRNA is expressed in the neointima, in the media or in the adventitia. Material and methods: Thirty eight white rabbits (New Zealand) of 4 kg received an hypercholesterolemic diet during 1 month. After this period, in all but 6 of them, an angioplasty with stent implantation was performed via right carotid artery in both iliac arteries, using a 1:1.3 relationship regarding the reference vessel. Angiograms were performed at day 0, 4, 21, and 40, followed by paraffin fixation of the injured segments, immunohistochemistry for a-actin and in situ hybridization to detect procollagen type I (a1R1) mRNA. Results: No hybridization was observed in non injured arteries or at day 0 (n= 6). Expression of a1R1 mRNA was observed in the neointima starting at day 4 after stenting (n= 8). At day 21 (n= 8) hybridization of procollagen type I was not only observed in the neointima, but also in the media, which became equally intense in both areas. At day 40 (n= 6) hybridization was observed similarly in the media and adventitia. Conclusions: In this model, hybridization of procollagen type I started in the neointima, then involved the media and finally the adventitia. This finding might be useful for designing therapies to be delivered locally at the end of an angioplasty to prevent collagen deposition in the neointima
Assuntos
Animais , Coelhos , Angioplastia , Colágeno/biossíntese , Oclusão de Enxerto Vascular/fisiopatologia , Sondas RNA , Modelos Animais de Doenças , Imuno-Histoquímica/métodosRESUMO
A survey for citrus viroids was conducted in the major citrus commercial growing areas in Costa Rica. Screening of 36 sweet orange and 12 lemon trees resulted in the detection of members of four of the five citrus viroid groups as determined by nucleic acid hybridization using specific RNA probes and polymerase chain reaction (PCR) using specific oligonucleotide primers. CEVd, CVd-IIa, CVD-IIb and CVd-III viroids were found to be widespread in the three main regions of commercial citrus production. CVd-Ib was only found in lemon in Nicoya
Assuntos
Citrus/virologia , Hibridização de Ácido Nucleico/genética , Viroides/isolamento & purificação , Costa Rica , Reação em Cadeia da Polimerase , Sondas RNA , Viroides/genéticaRESUMO
A localizaçao celular do pró-colágeno 1(I) foi observada na interface de coral natural, sete dias após implante no nosso trabecular de ratos, utilizando-se sondas de RNA marcadas com digoxigenina. A eficácia deste método foi comparada com aquela de sondas de RNA marcadas com enxofre(35). A hibridizaçäo "in situ" realizada utilizando-se sondas de RNA de osteoblastos, marcada com digoxigenina, provou ser täo eficiente quanto aquela marcada com S(35). Embora a porcentagem de fibroblastos marcados com S(35) tenha sido maior do que aqueles marcados com digoxigenina, näo houve diferença significante quanto à eficiência dos dois métodos
