Can widely used cell type markers predict the suitability of immortalized or primary mammary epithelial cell models?

BACKGROUND: Mammary cell cultures are convenient tools for in vitro studies of mammary gland biology. However, the heterogeneity of mammary cell types, e.g., glandular milk secretory epithelial or myoepithelial cells, often complicates the interpretation of cell-based data. The present study was undertaken to determine the relevance of bovine primary mammary epithelial cells isolated from American Holstein (bMEC US) or Swiss Holstein-Friesian (bMEC CH) cows, and of primary bovine mammary alveolar epithelial cells stably transfected with simian virus-40 (SV-40) large T-antigen (MAC-T) for in vitro analyses. This was evaluated by testing their expression pattern of cytokeratin (CK) 7, 18, 19, vimentin, and α-smooth muscle actin (α-SMA. RESULTS: The expression of the listed markers was assessed using real-time quantitative PCR, flow cytometry and immunofluorescence microscopy. Characteristic markers of the mesenchymal (vimentin), myoepithelial (α-SMA) and glandular secretory cells (CKs) showed differential expression among the studied cell cultures, partly depending on the analytical method used. The relative mRNA expression of vimentin, CK7 and CK19, respectively, was lower (P < 0.05) in immortalized than in primary mammary cell cultures. The stain index (based on flow cytometry) of CK7 and CK19 protein was lower (P < 0.05) in MAC-T than in bMECs, while the expression of α-SMA and CK18 showed an inverse pattern. Immunofluorescence microscopy analysis mostly confirmed the mRNA data, while partly disagreed with flow cytometry data (e.g., vimentin level in MAC-T). The differential expression of CK7 and CK19 allowed discriminating between immortal and primary mammary cultures. CONCLUSIONS: The expression of the selected widely used cell type markers in primary and immortalized MEC cells did not allow a clear preference between these two cell models for in vitro analyses studying aspects of milk composition. All tested cell models exhibited to a variable degree epithelial and mesenchymal features. Thus, based on their characterization with widely used cell markers, none of these cultures represent an unequivocal alveolar mammary epithelial cell model. For choosing the appropriate in vitro model additional properties such as the expression profile of specific proteins of interest (e.g., transporter proteins) should equally be taken into account.

Utilidad clínica de los marcadores tumorales / Clinical utility of tumor markers

Los marcadores tumorales, también denominados marcadores biológicos o biomarcadores, se definen como moléculas, sustancias o procesos que se alteran cualitativa o cuantitativamente como resultado de una condición precancerosa o un cáncer, detectables mediante una prueba de laboratorio en sangre, en líquidos orgánicos o en tejidos. La naturaleza de los marcadores tumorales es muy variable: va desde ácido nucleico, ADN o ARN, una proteína o un péptido, hasta procesos complejos como un anticuerpo, la apoptosis, la amilogénesis y la proliferación. Desde el punto de vista de su origen, los marcadores tumorales se producen por el tumor mismo, como la gonadotropina coriónica en el coriocarcinoma, o como respuesta a la lesión tumoral en el tejido circundante, como el antígeno carcinoembrionario en el cáncer de mama. No hay un marcador tumoral ideal, definido como aquel con una sensibilidad y especificidad del 100. Los marcadores tumorales pueden ser utilizados para el cribado en población con riesgo de presentar un cáncer para su detección precoz con enfermedad confinada y potencialmente curable, como parte del diagnóstico, en el diagnóstico diferencial, como prueba de valor pronóstico y predictivo, como herramienta para evaluar el tratamiento administrado, y para la detección de las recaídas cuando éstas se presentan y el paciente tiene una nueva oportunidad de tratamiento, antes de que las manifestaciones clínicas reaparezcan. En este módulo se analizan los principales marcadores tumorales disponibles en el medio, como el antígeno carcinoembrionario, la alfafetoproteína, el antígeno específico de próstata, el CA 15-3, el CA 125, el CA 19-9, el Cyfra 21-1, la gonadotropina coriónica, la calcitonina, la ferritina, la beta 2 microglobulina, entre otros marcadores. Además, se hará referencia a marcadores subrogados de cáncer, como la presencia de la infección por Helicobacter pylori y el virus del papiloma humano.

Perspectivas para el desarrollo de vacunas e inmunoterapia contra cáncer cervicouterino / Perspectives for vaccines and immunotherapy againts cervical cancer

El cáncer cervicouterino representa un grave problema de salud pública, debido a la asociación de la neoplasia con el virus del papiloma humano; actualmente se realizan estudios usados estrategias dirigidas a combatir este patógeno, mediante vacunas, que podrían ser de gran utilidad para el control de la progresión de la enfermedad. El estudio tanto de la inmunología humoral como celular ha servido para el desarrollo de vcunas. Así, la utilización de partículas virales sintéticas para el estudio de anticuerpos neutralizantes y el uso de proteínas tempranas virales, entre otras, para la inducción de inmunidad mediada por células, han sido la pauta para realizar estudios que dirijan la respuesta inmune para prevenir la infección celular tanto hacia células infectadas no transformadas como hacia células transformadas viralmente con resultados favorables

Expresión de la proteína del gen supresor de tumores p53 en el carcinoma de próstata / Expression of the supressor gene protein of p53 tumors in prostatic carcinoma

El cáncer de la próstata es una de las neoplasias más frecuentes en hombres mayores de 50 años. La mutación y expresión del gen supresor de tumores p53 ha sido demostrado en la carcinogénesis de múltiples neoplasias y en alrededor del 40 por ciento de los cánceres de la próstata. El objeto de este trabajo es determinar la frecuencia de la expresión del gen p53 en el carcinoma prostático. Se estudia la expresión de la proteína p53 en 35 carcinomas prostáticos mediante la técnica de inmunohistoquímica con anticuerpo monoclonal. Los pacientes se distribuyeron por etapas clínicas: Etapa A = 4 casos; Etapa B = 5 casos; Gleason entre 4 y 7 y el 16 por ciento entre 8 y 10. El promedio de edad fue 70,7 años (límites 53-85 años). No se observó tinción positiva en ninguno de los controles ni en los tumores en etapas A y B. Se observó tinción positiva de la proteína del gen p53 en 11 de los 35 casos (31,4 por ciento), 17 por ciento en los en Etapa C y un 64,2 por ciento tumores en los en Etapa D (p = 0,01). No se observó diferencia respecto del índice de Gleason aun cuando los tumores mejor diferenciados presentaron menor positividad. Nuestros resultados muestran que la proteína del gen supresor de tumores p53 no guarda relación con el índice de Gleason y sólo se observa en tumores avanzados, especialmente en la Etapa D, y su determinación puede contribuir significativamente a una mejor evaluación preoperatoria de los pacientes

Inmunolocalización subcelular de antígeno tumoral mayor, proteína p53 y antígeno nuclear de proliferación celular en células transformadas por el virus SV40 / Subcellar immunolocalization of SV40-large T antigen, p53 and proliferating cell nuclear antigen in SV40-virus transformed cells

La localización intracelular de proteínas involucradas en el control proliferativo puede ser estudiada mediante técnicas de inmunocitoquímica. Con el propósito de establecer la distribución del antígeno tumoral mayor del virus SV40 (agT), proteína p53 (p53) y antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA) tanto en el núcleo como en la superficie de células transformadas por el virus SV40 provenientes de una línea de cultivo, se utilizaron técnicas de inmunoperoxidasa tanto a nivel de microscopia de luz y electrónica como técnicas de inmunofluorescencia. Para lograr la optimización de dichas técnicas en nuestro material se evaluaron distintos procedimientos de fijación, dos métodos de permeabilización celular y se efectuaron modificaciones a las técnicas de inmunoperoxidasa e inmunofluorescencia. Los resultados mostraron inmonorreactividad nuclear conservada para los tres antígenos estudiados cuando se utilizaron fijadores alcohólicos. La fijación con aldehídos permitió una buena morfología y óptima inmunorreactividad a nivel de microscopia de luz, pero las células debieron ser sometidas a un tratamiento previo de permeabilización. A nivel de microscopia electrónica se observó pobre morfología con fijadores alcohólicos, la que mejoró notablemente utilizando fijadores a base de aldehídos. Cuando se utilizó glutaraldehídos como fijador no hubo conservación de la inmunorreactividad. El agT de superficie fue demostrado con una técnica de inmunoperoxidasa modificada para ser aplicada a células sin fijar mantenidas en suspensión.

Antígenos de diferenciación en leucemias y linfomas / Differentiation antigens in leukemia and lymphomas

El autor describe los antígenos de diferenciación leucocitarios y su utilización como marcadores en la clasificación y determinación y determinación del grado madurativo de las leucemias agudas y síndromes linfoproliferativos. Analiza la técnica de ordenación de los genes de inmunoglobulinas y del receptor para antígenos células T en el estudio de otros procesos

A problemática dos condilomas atípicos do cérvix / The problem of atypical cervical condylomas

Com base em uma revisäo dos casos de condilomas cervicais estudados clinicamente, colpo-cito-histologicamente e mediante auto-radiografia e microscopia eletrônica, investigou-se o problema dos condilomas atípicos. Descrevem-se as últimas variedades de HPV descobertas, a relaçäo dos condilomas com as CIN e seu possível diagnóstico diferencial. Finalmente, destaca-se a importância do estudo das células de Langerhans e dos mercadores imunológicos para o diagnóstico dos condilomas atípicos

Differential detection of murine mammary tumor virus constituents by immuno-electron microscopy

Diferentes antigenos del virus productor de tumores mamarios del raton (MMTV) fueron detectados con la aplicación de varios anticuerpos poli monoespecíficos y una técnica inmunocitoquímica de alta resolución con oro coloidal. Anticuerpos preparados contra el virus total aislado (partículas B), las proteínas p14, p25 y una glicoproteína gp55 fueron marcados con el complejo oro coloidal proteína A en secciones de carcinomas mamarios espontáneos del raton, incluidos en resina acrílica (L. R. Whrite, London Resin Company). La estructura proteica de las nucleocapsides y la envoltura viral fueron los componentes más inmunoreactivos de la subestrutura del virus MMTV. Una continuidad de los constituyentes antigénicos del virus fueron encontrados en las diferentes etapas de la morfogénesis del virus demonstrándose una correlación entre estructuras precursoras y el virus infeccioso

Absence of BKVT- antigen antibodies, in patients with leukemia aplastic anemia

A presença de anticorpos contra o antígeno-T produzido por vírus BK foi testada no soro e urina de pacientes com transplante de medula óssea e em controles. Nenhum paciente com transplante, nem com anemia aplástica ou leucemia, desenvolveu anticorpos antiantígeno T, indicando ausência de um papel etiológico do vírus BK ( um polioma humano) em leucemia ou anemia aplástica

Demostración óptima del Cáncer Gástrico Incipiente Tipo IIc por el Método del Doble Contraste, utilizando diferentes cantidades de aire. / The best demonstration of early Gastric cancer type IIc with the Double contrast X ray method.Using different amounts of air.

Los autores presentan un estudio de los tres elementos que caracterizan al Cáncer gástrico incipiente tipo IIc que son: la iregularidad del borde de la erosión, la alteración del extremo de los pliegues dentro de la lesión y el aspecto granular de su superficie. En 25 casos investigados, empleando radiografías con doble contraste se insufló diferentes cantidades de aire(pequeña, moderada y gran cantidad). Se comparan los tres elementos citados con los grados de distención mencionados y se establece la cantidad óptima a insuflar para demostrarlos en detalle. La visualización del borde de la lesión con su aspecto corroído se aprecia claramente al insuflar gran cantidad de aire, lo que constituye el factor esencial en el diagnóstico diferencial del cáncer incipiente tipo IIc con las lesiones benignas especialmente de la cicatriz de la úlcera.