RESUMO
The interpretation of oligonucleotide array experiments depends on the quality of the target cRNA used. cRNA target quality is assessed by quantitative analysis of the representation of 5' and 3' sequences of control genes using commercially available Test arrays. The Test array provides an economically priced means of determining the quality of labeled target prior to analysis on whole genome expression arrays. This manuscript validates the use of a duplex RT-PCR assay as a faster (6 h) and less expensive (
Assuntos
Humanos , Análise de Sequência com Séries de Oligonucleotídeos/métodos , RNA Complementar/genética , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa/métodos , BiotinilaçãoRESUMO
De las etapas del desarrollo del cáncer la más amenazante es la metástasis, por lo que se han hecho esfuerzos en su estudio y comprensión. Nosotros estudiamos el glicocáliz de tumores primarios de colon y sus metástasis a sacro, ganglios linfáticos e hígado. Se utilizaron muestras tumorales de pacientes post quirúrgicos con cáncer de cólon. Los cortes fueron fijados e incubados en PSA, DBA, UEA1, jacalina y ELC. Como controles utilizamos azúcares inhibitorios específicos. La mayor intensidad correspondió a Jacalina en tumores primarios y metástasis. PSA,ECL, y UEA1 reaccionaron con intensidad menor. No se registraron diferencias entre los tumores primarios y metastáticos, y tampoco entre las diferentes metástasis. No hubo reacción con el DBA. Estos resultados no muestran diferencias en el Glicocáliz con la presencia de los carbohidratos estudiados entre el tumor primario y la metástasis. Es posible que se deban continuar los estudios con otras lectinas en la búsqueda de las moléculas que llevan a la selectividad por órgano de las metástasis tumorales...
Assuntos
Neoplasias do Colo , Lectinas , Neoplasias Primárias Múltiplas , Biotinilação , Carboidratos , NeoplasiasRESUMO
A utilização de sondas de DNA para análise genômica em fase sólida tem se expandido e ultrapassado as áreas da pesquisa, estendendo-se ao terreno do diagnóstico de rotina nas áreas de medicina humana e animal, bem como nas ciências forenses. Estas sondas têm sido utilizadas desde o surgimento da primeira técnica de hibridização descrita com o southern blotting, que envolve a imobilização, em filtros de papel, de fragmentos de DNA separados eletroforeticamente. Outra técnica descrita como o dot-hibridização é menos complexa do que o southern convencional por não requerer o passo prévio de eletroforese e por ser menos exigente quanto à qualidade do DNA, já que dispensa a digestão com enzima de restrição. A marcação mais comum para estas sondas é o fósforo radioisótopo (32P), que, apesar de sua alta sensibilidade, apresenta os inconvenientes de risco físico, necessidade de autorização para manipulação de radioisótopos, alto custo e uma vida média muito curta. Uma série de alternativas para o 32P têm sido utilizadas, com marcas diretas ou secundárias, entre elas a biotina, que tem mostrado grandes vantagens e tem sido usada também em laboratórios especializados e bem equipados. Este trabalho descreve uma modificação do método clássico descrito para sondas de DNA acopladas por biotina hidrazida. Utilizamos a N-hidroxisuccinimida biotina (BNHS) em dimetilformamida, para marcar resíduos de citosina disponíveis em segmentos de fita simples de DNA extraído de Corynebacterium pseudotuberculosis. A variação da proporção de biotina e de DNA, bem como sua especificidade e sensibilidade, foram cuidadosamente testadas e criteriosamente analisadas através de ensaios de hibridização, adsorvendo-se DNA cromossômico do C. pseudotuberculosis e outros DNAs em papel de nitrocelulose, seguindo-se a incubação com as sondas biotiniladas descritas,avidina-peroxidase e revelação com 4-cloro-1-naftol. Os resultados mostraram que a sonda de DNA produzida tem as características favoráveis...
