Neoscytalidium dimidiatum un raro agente de onicomicosis no dermatofítica en Chile / Neoscytalidium dimidiatuma rare agent ofnon dermatophyticonychomycosisin Chile

El término de onicomicosis se emplea para describir las infecciones de las uñas causadas por diferentes grupos taxonómicos fúngicos ya sea filamentosos como levaduriformes. A pesar de que estas patologías son causadas en los vertebrados principalmente por integrantes de la Familia Artrodermatáceae (Onygenales), la micología médica aplicó para ellos la terminología más específica de dermatofitosis, por ser un grupo ecológico de mayor importancia y presencia clínica. Las dermatomicosis de piel y fanéreos, representan un conjunto de infecciones producidas por especies fúngicas distribuidas en ambientes diversos, capaces de crecer a temperaturas de 37° y que actúan usualmente como patógenos oportunistas cuando existe generalmente un factor predisponente en el huésped. Se destaca la colonización en una uña de los pies en un hombre de 49 años por Neoscytalidium dimidiatum(Penz.) Crous & Slippers, un reconocido fitopatógeno de rápido crecimiento, común en zonas tropicales y subtropicales, que presentó la capacidad de invadir tejidos queratinizados con un aspecto clínico indistinguible de los causadas por dermatofitos. Por la rara presencia de este hongo en nuestra zona geográfica (provincia de Valparaíso, Chile), se aportan los principales datos morfofisiológicos,taxonómicos y moleculares utilizados en su diagnóstico. (AU)

The term onychomycosis is used to describe nail infections caused by different fungal taxonomic groups, either filamentous or yeast. Despite the fact that these pathologies are caused in vertebrates mainly by members of the Artrodermatáceae Family (Onygenales), medical mycology applied the more specific terminology of dermatophytosis for them, as it is an ecological group of greater importance and clinical presence. Skin and pharynx dermatomycosis represent a set of infections produced by fungal species distributed in diverse environments, capable of growing at temperatures of 37° and that usually act as opportunistic pathogens when there is a predisposing factor in the host. The colonization on a toenail in a 49-year-old man by Nesoscytalidium dimidiatumis highlighted (Penz.) Crous & Slippers, a recognized fast-growing phytopathogen, common in tropical and subtropical areas, which presented the ability to invade keratinized tissues with a clinical appearance indistinguishable from those caused by dermatophytes. Due to the rare presence of this fungus in our geographical area (Valparaíso province, Chile), the main morphophysiological, taxonomic and molecular data used in its identificationare provided. (AU)

Diagnóstico molecular de Porphyromonas gingivalis: optimización del método / Molecular diagnosis of Porphyromonas gingivalis: optimization of the method

El objetivo del presente trabajo fue estandarizar y optimizar la técnica de PCR convencional para detección de Porphyromonas gingivalis ATCC 33277. Materiales y métodos: la cepa de P. gingivalis ATCC332227 se sembró en agar Bruella enriquecido con sangre de cordero, suplementado con hemina y vitamina K. El ADN se extrajo empleando el protocolo que usa bromuro de cetil trimetilamonio (CTAB). Se evaluó la cantidad y calidad del material genético obtenido con el fotómetro UV Ampli-Quat, AQ-07 Nucleic Acid. Se realizó la PCR convencional con diferentes concentraciones de MgCl2 1 mM, 1,5 mM y 2.0 mM y a dos temperaturas de alineamiento: 60ºC y 55ºC. Los productos PCR se separaron por electroforesis en un gel de agarosa 1 por ciento. Las bandas se visualizaron en un fotodocumentador. La sensibilidad se calculó teniendo en cuenta el número de bacterias en diferentes diluciones. Resultados: se obtuvo una concentración 1,55x10(6) ng/ul de ADN genómico a partir de una suspensión bacteriana de 10a células bacterianas/ml, con índice de pureza 1,648 (relación de OD260/OD280). Los mejores resultados se obtuvieron con una concentración de 2 mM de MgCl2 y una temperatura de alineación de 55ºC. En cuanto a la sensibilidad, se obtuvo un límite de detección de 5 x 10/5 uL células bacterianas en suspensión. Conclusión: en la prueba de PCR convencional para Prophyromonas gingivalis ATCC 33277, las condiciones óptimas de estandarización son la concentración de 2 mM de MgCl y 55ºC y es necesaria una carga bacteriana mínima de 5 x 10 células/5 ul como límite de detección.

Avaliação de novos fatores prognósticos em carcinomas vulvares através da integração de dados genômicos e transcriptômicos / Assessment of new prognostic factors in vulvar carcinomas by integrating genomic and transcriptomic data

O carcinoma vulvar é uma neoplasia rara, contudo possui elevada mortalidade (~40%) e pouco se conhece a respeito de sua assinatura molecular. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo identificar genes moduladores dessa neoplasia baseando-se em integração de dados genômicos e transcriptômicos. Para alcançar esse objetivo 17 amostras de carcinomas vulvares que continham DNA e RNA suficientes foram selecionadas para a realização das técnicas de CGH-array e Expressão em larga escala. Os genes obtidos a partir da integração de dados realizada pelo algoritmo CONEXIC foram submetidos a uma avaliação funcional in silico nos softwares IPA e KOBAS e dois genes foram selecionados para a validação por meio de qRT-PCR, absoluta e relativa. A expressão proteica desses genes foi avaliada por IHQ em 150 casos. A avaliação integrada dos dados revelou 47 candidatos a moduladores, dos quais 46 foram classificados com concomitante ganho de cópias e aumento da expressão gênica e somente um com perda de cópia associada à diminuição de expressão. A partir das análises os genes PLXDC2 e GNB3 foram selecionados, sendo o primeiro o único com perda de cópia e diminuição da expressão. A partir da avaliação das variações de intensidade de coloração IHQ entre os tumores foi possível observar que a alta expressão de GNB3 concomitante a menor expressão de PLXDC2 está associada a menor risco de desenvolver metástases linfonodais (p=0,016) e tempos maiores de sobrevida livre de doença (p=0,005). Sendo assim, é possível sugerir que a avaliação proteica desses genes poderia ser usada para avaliação prognóstica.

Vulvar squamous cell carcinoma (VSCC) is a rare disease that has a high mortality rate (~40%). However, little is known about its molecular signature. Therefore, our aims were to identify driver genes in VSCC, based on comparative genome hybridization (aCGH) and genome-wide expression (GWE) array. To achieve that, DNA and RNA were extracted from 17 frozen VSCC samples and examined by aCGH and GWE array, respectively. Based on the integration of data using the CONEXIC algorithm, PLXDC2 and GNB3 were validated by qRT-PCR. The expression of these genes was then analyzed by immunohistochemistry (150 FFPE samples). In our integrative analysis, we identified 47 putative drivers­46 of which were characterized by copy number gains that were concomitant with overexpression and 1 with a copy number loss and downregulation. Two of these genes were selected for further validation: PLXDC2 and GNB3. GNB3 was overexpressed and PLXDC2 was downregulated compared with normal samples. By IHC, both proteins were ubiquitously expressed throughout vulvar tissue. High expression of GNB3 and low PLXDC2 immunostaining in the same sample was linked to less lymph node metastasis (p=0.016) and greater disease-free survival (p=0.005). Based on a robust methodology never used before for VSCC evaluation, this study proposes 2 novel prognostic markers in vulvar cancer. GNB3 is associated with a good prognosis, and PLXDC2 correlates with worse outcomes.

Detecção de Brucella abortus em tecidos bovinos utilizando ensaios de PCR e qPCR / Detection of Brucella abortus in bovine tissue using PCR and qPCR

Objetivou-se no presente estudo avaliar as técnicas reação em cadeia da polimerase (PCR) e PCR em Tempo Real (qPCR) para detectar Brucella abortus, a partir de tecidos bovinos com lesões sugestivas de brucelose. Para isto, 21 fragmentos de tecidos bovinos coletados em abatedouros de Mato Grosso do Sul foram processados e submetidos ao cultivo microbiológico e extração do DNA genômico para realização das reações de PCR e qPCR. No cultivo microbiológico, oito amostras apresentaram crescimento bacteriano e cinco foram confirmadas como B. abortus por PCR. Diretamente das amostras de tecido, DNA do gênero Brucella (oligonucleotídeos IS711) foi detectado em 13 (61,9 por cento) amostras de tecido e 17 (81 por cento) amostras de homogeneizado. Já com os oligonucleotídeos espécie-específicos BruAb2_0168F e BruAb2_0168R, 14 (66 por cento) amostras de tecido e 18 (85,7 por cento) amostras de homogeneizado foram amplificadas. Seis amostras positivas na PCR espécie-específica foram sequenciadas e o best hit na análise BLASTn foi B. abortus. Na qPCR, 21 (100 por cento) amostras de tecidos e 19 (90,5 por cento) amostras de homogeneizado foram positivas para B. abortus. Dez amostras de DNA de sangue bovino de rebanho certificado livre foram utilizadas como controle negativo nas análises de PCR e qPCR utilizando-se os oligonucleotídeos BruAb2_0168F e BruAb2_0168R. Na PCR nenhuma amostra amplificou, enquanto que na qPCR 2 (20 por cento) amplificaram. Conclui-se que as duas técnicas detectam a presença de B. abortus diretamente de tecidos e homogeneizados, porém a qPCR apresentou maior sensibilidade. Os resultados obtidos indicam que a qPCR pode representar uma alternativa rápida e precisa para a detecção de B. abortus diretamente de tecidos, e ser utilizada em programas de vigilância sanitária, por apresentar sensibilidade e especificidade satisfatórias.

The aim of the study was to evaluate the technical polymerase chain reaction (PCR) and Real-Time PCR (qPCR) to detect Brucella abortus from bovine tissues with suggestive lesions of brucellosis. For this, 21 fragments of bovine tissues collected at abattoirs of Mato Grosso do Sul were processed and subjected to microbiological culture and extraction of genomic DNA to perform the PCR reactions and qPCR. Eight samples of microbiological culture showed bacterial growth and five samples were confirmed as B. abortus by PCR. DNA of Brucella (IS711 primers) was detected in 13 (61.9 percent) directly from tissue samples and 17 (81 percent) from tissue homogenate samples. With the species-specific set of primers BruAb2_0168F and BruAb2_0168R, 14 (66 percent) tissue samples and 18 (85.7 percent) tissue homogenate samples were positive. Six positive samples in the species-specific PCR were sequenced and the best hit in the BLASTn analysis was B. abortus. By qPCR, 21 (100 percent) tissue samples and 19 (90.5 percent) tissue homogenate samples were positive for B. abortus. Ten samples of DNA from bovine blood from an accredited-free herd were used as negative control in PCR and qPCR analysis using the primers BruAb2_0168F and BruAb2_0168R, and no one amplified by PCR, whereas two samples were amplified by qPCR (20 percent). In conclusion, both techniques detect the presence of B. abortus directly from tissues and homogenized, but the qPCR showed high sensitivity. The results indicate that qPCR can represent an alternative tool for faster and more accurate detection of B. abortus directly from tissues, and use in health surveillance programs by presenting satisfactory sensitivity and specificity.

Regulación del flujo sanguíneo uterino: II. funciones de estrógeno y receptores estrogénicos alfa/beta en acciones genómicas y no-genómicas del endotelio uterino / Regulation of uterine blood flow: II. functions of estrogen and estrogen receptor alpha/beta in genomic and non- genomic actions of the uterine endothelium

El embarazo está marcado por cambios y adaptaciones cardiovasculares que son importantes para el crecimiento y mantenimiento de la placenta y el feto. Durante este periodo, las adaptaciones vasculares uterinas manifiestan cambios clasificados como de corto o largo plazo los cuales están relacionados con adaptaciones vasodilatadoras, angiogénicas o de remodelación. El estrógeno y los receptores estrogénicos clásicos (REs), RE-alfa y RE-beta, han demostrado ser parcialmente responsables por facilitar el incremento dramático en el fluido sanguíneo uterino necesario durante el embarazo. En ésta revisión bibliográfica se discuten la base estructural para la diversidad y selectividad funcional de los REs por el estrógeno, el papel de los REs sobre los efectos genómicos y no-genómicos en células endoteliales de arterias uterinas (CEAU). Estos temas integran el conocimiento científico sobre la regulación molecular de CEAU para mantener el incremento fisiológico en la perfusión útero-placentaria observada durante un embarazo normal.

Pregnancy is marked by changes and cardiovascular adaptations that are important for the maintenance and growth of the placenta and fetus. During this period, the uterine vascular adaptations manifest changes that can be classified as short or long term and they related to adaptations for vasodilation, angiogenic or remodeling. Estrogen and the classical estrogen receptors (ERs), ER-alpha and ER-beta, have been shown to be partially responsible for facilitating this dramatic increase in uterine blood flow needed during pregnancy. This literature review discusses the basis for structural diversity and functional selectivity of ERs by estrogen, the role of ERs on the genomic and non-genomic effects in endothelial cells of uterine arteries (UAEC). These themes integrate scientific knowledge about the molecular regulation of UAEC to maintain the physiological increase in uteroplacental perfusion observed during normal pregnancy.

Detecção e caracterização de elementos conjugativos integrativos em bactérias isoladas de amostras ambientais / Detection and characterization of integrative conjugative elements in bacteria isolated from environmental samples

O reconhecimento da resistência antimicrobiana como um fenômeno emergente em saúde pública, tem constituído um problema em nível mundial. O abuso na utilização de antibióticos na medicina humana e veterinária, e na agricultura, tem originado incremento na diversidade de micro-organismos resistentes, refletindo em falha terapêutica. Os mecanismos de resistência a antibióticos em micro-organismos são mediados principalmente por genes adquiridos de DNA exógeno. A dinâmica da transferência horizontal é realizada por meio de elementos genéticos móveis que carregam genes de resistência. A ampla distribuição deste tipo de estruturas, como o elemento SXT, isolado inicialmente em V. cholerae, tem contribuído para a disseminação de complexos específicos clonais em determinadas áreas geográficas. Este estudo pioneiro no Brasil pesquisou a presença de elementos SXT, em espécies bacterianas do grupo das gama proteobactérias em espécies ambientais, determinou suas características estruturais e funcionais, incluindo genes de resistência a antibióticos, bem como a sensibilidade aos antibióticos dentre os isolados bacterianos que os abrigam. O resultado foi a classificação de 43 elementos SXT obtidos no Brasil, através da comparação com aqueles descritos na literatura. Dentre os elementos SXT obtidos, quatro são albergados por Morganella morganii, fato inédito na literatura. O conhecimento da evolução bacteriana constitui importante ferramenta para estabelecer estratégias eficazes de controle e tratamento de infecções, sem aumentar a pressão seletiva sobre os micro-organismos, bem como instrumento preciso e de grande importância para subsidiar estudos epidemiológicos.

Recognition of antimicrobial resistance as an emerging phenomenon in public health has been a problem worldwide. The abuse in the use of antibiotics in human and veterinary medicine, and agriculture, has caused an increase in the diversity of resistant microorganisms, reflecting in treatment failure. The mechanisms of antibiotic resistance in microorganisms are primarily mediated by genes acquired from exogenous DNA. The dynamics of the horizontal transfer is performed by mobile genetic elements which carry resistance genes. The wide distribution of these structures, such as the SXT element originally isolated from V. cholerae, has contributed to the spread of specific clonal complexes in certain geographical areas. This pioneering study in Brazil researched the presence of SXT elements in the group of bacterial species in environmental gamma-proteobacteria species, determined their structural and functional characteristics, including genes for resistance to antibiotics and the antibiotic susceptibility among bacterial isolates that harbor them. The result was the classification of 43 SXT elements found in Brazil, by comparison with those found in the literature. Among the SXT elements found, four are sheltered by Morganella morganii, unprecedented in the literature. Knowledge of bacterial evolution is an important to establish effective strategies to control and treat infections without increasing the selective pressure on microorganisms, as well as a precise instrument and very important tool to support epidemiological studies.

Determinantes e forças seletivas na evolução das proteínas / Determinants and selective forces in the evolution of proteins

A análise de grandes quantidades de dados aproveitando o poder computacional de ferramentas open sourcel que estão disponíveis na internet é o que veio a conhecer-se como quarto paradigma da investigação científica. Em muitas áreas do conhecimento como a Astronomia, a Física e Geologia, a experimentação, o desenvolvimento teórico e o poder computacional (os três primeiros paradigmas) têm dado lugar à análise rotineira de grandes quantidades de dados e o desenvolvimento de novos métodos, conceitos e teorias que permitam interpretar a informação gerada por novas tecnologias. No campo da biologia, esta mudança nos paradigmas da investigação científica supõe um desafio na hora de encarar uma questão biológica; mas, em contrapartida, ela oferece a oportunidade de validar teorias clássicas e ou testar hipóteses novas. Precisamente neste contexto, a presente tese aborda duas questões pertinentes ao campo da biologia evolutiva: Quais são os fatores que determinam a evolução de uma proteína? e Qual é a natureza da seleção cinética tradicional? Estas perguntas são, em principio, relevantes no âmbito teórico; por outro lado, sua compreensão, implicações e perspectivas têm também espaço importante na área experimental...

Perfil genômico dos poliovírus de origem vacinal isolados de casos de paralisias flácidas agudas, no Brasil, no período pós-eliminação dos poliovírus selvagens da região das Américas / Genomic profiling of poliovirus vaccine origin isolated from cases of acute flaccid paralysis in Brazil in the post-elimination of wild poliovirus from the Americas

A poliomielite (poliomielite anterior aguda, paralisia infantil) é uma doença infecciosa de caráter agudo que ocorre seguida a uma infecção causada por um dos três sorotipos de poiliovírus, denominados poliovírus tipos 1,2 e 3. em 1988, quando os poliovírus selvagens eram endêmicos em 125 paises ficou estabelecida durante a 41ª Assembléia Mundial da Saúde, em Genebra, a meta da erradicação da poliomielite até o ano 2000. os poliovirus selvagens estão hoje restritos a apenas quatro países (Nigéria, Afeganistão, Paquistão e Índia). Este grande sucesso é atribuído à utilização sistemática da vacina oral contra a poliomielite (VOP), desenvolvida pelo Dr. Albert Sabin. Esta vacina, licenciada nos anos 1960s, e que vem sendo utilizada por mais de quatro décadas, consiste de variantes atenuadas de cada um dos três sorotipos de poliovirus. Por ser uma vacina constituída por vírus vivos atenuados, os problemas a ela associados estão principalmente ligados à sua instabilidade genética e a possibilidade do aparecimento de mutações e recombinações nas subpopulações virais excretadas. Durante a replicação do vírus vacinal em humanos, freqüentemente ocorre reversão de algumas substituições nucleotídicas que conferem o fenótipo atenuado. Essa é a principal causa do aparecimento de raros casos de poliomielite associados à vacina (VAPP), relatodos em diferentes países, assim como surtos de poliomielite paralítica devidos à infecção por estes vírus vacinais derivados (PVDV) que possuem propriedades biológicas semelhantes aos poliovírus selvagens. A análise e caracterização de quatro regiões distintas do genoma viral (5’NC, VP1, 2C e 3D), dos poliovírus vacinais isolados no Laboratório de Enterovírus do Instituto Oswaldo Cruz, a partir de amostras clínicas de casos de paralisia flácida aguda que ocorreram no Brasil, no período de 1995 a 2007, constituíram no principal objetivo do presente trabalho. Um total de 177 amostras dos três sorotipos foi analisado por sequenciamento nucleoitidico em todo o gene que codifica a VP1; 222 amostras foram analisadas por duplex RT-PCR nas regiões 2C e 3D; 68 amostras foram analisadas na região 51-NC e 44 amostras foram analisadas nas 4 regiões (5’NC, VP1, 2C e 3D). Dois isolados de PV2, apresentando mais de 1 porcento de mutação em VP1, foram identificados e classificados como PVDV2. Existem aproximadamente 40 relatos de PVDV relacionados a pacientes imunodeficientes de 1962 a 2010, globalmente distribuídos, porém nenhum identificado no Brasil. Das 68 amostras seqüenciadas na região 5’NC visando à avaliação de uma importante posição nucleotídica envolvida na atenuação da neurovirulência em cada um dos 3 sorotipos (PV1480, PV2481 e PV3472), os seguintes resultados foram encontrados: PV1=18,5 porcento mutadas na posição 480, PV2=65 porventomutadas em 481 e PV3=81 porcento mutadas em 472. recombinação (em 2C/3D) foi encontrada em 15 amostras: 1 PV1 (1,3 porcento), 5 PV2 (6,6 porcento) e 9 PV3 (13,2 porcento). Os três sorotipos de poliovírus apresentaram comportamento distinto em relação às análises realizadas, sendo o sorotipo 3 o menos estável em relação ao padrão de recombinação e reversão à neurovirulência seguido pelo sorotipo 2 e o sorotipo 1 foi o mais estável. A monitoração do perfil genômico dos poliovírus vacinais em circulação é essencial no estágio final de erradicação global da poliomielite.

Desempenho fenotípico ao utilizar diferentes densidades de marcadores moleculares no mapeamento genômico / Phenotypic performance using different molecular markers density in genomic mapping

Objetivou-se avaliar, através do programa de simulação genética GENESYS, a densidade de marcadores moleculares (MM) no mapeamento de QTL (Quantitative Trait Loci). Foram considerados mapeamentos de alta, média e baixa resolução, em que os marcadores foram dispostos regulamente a cada 5 cM (192 MM), 10 cM (95 MM) e 20 cM (47 MM), respectivamente. Para cada intervalo, o mesmo número de marcadores utilizados foi reconsiderado, contudo, admitindo espaçamento aleatório. Os mapas foram comparados aos pares, com o mesmo número de marcadores distribuídos em intervalos regulares e de forma aleatória. A seleção assistida por marcadores foi utilizada para avaliar o desempenho fenotípico em cada cenário. Em todos os casos, os mapas que admitiram marcadores dispersosem intervalos fixos foram superiores em relação aos ganhos fenotípicos, em especial para o mapeamento de baixaresolução. Infere-se que a disposição estratégica de marcadores moleculares no mapeamento genômico é tanto maisrelevante quanto menor for o número de marcadores considerados na análise.

The objective of this study was to evaluate, through the program of genetic simulation GENESYS, the density of molecular markers (MM) in the mapping of QTL (Quantitative Trait Loci). High, medium and low resolution mapping were considered, in which markers were arranged regularly every 5 cM (192 MM), 10 cM (95 MM) and 20 cM (47 MM), respectively. For each gap, the same number of markers used was reconsidered, however, assuming random spacing. The maps were compared in pairs, with the same number of markers distributed at regularintervals and at random. The selection assisted by markers was used to assess the phenotypic performance in eachscenario. In all cases, the maps which admitted sparse markers at fixed intervals were superior in relation to phenotypic gains, especially for the mapping of low resolution. We conclude that the strategic distribution of molecular markers in genomic mapping is more relevant as the lower is the number of markers considered in the analysis.

Genotipo de los genes VKORC1 y CYP2C9 en la respuesta individual a la warfarina / Genotype of the VKORC1 and CYP2C9 genes in individual response to warfarin

Introducción: la warfarina es un fármaco ampliamente utilizado como anticoagulante oral. Su estrecho rango terapéutico y marcada variabilidad interindividual en la respuesta requieren un control riguroso en su administración para evitar accidentes hemorrágicos. Objetivos: correlacionar las variantes genéticas de CYP2C9*2 y *3 y VKORC1 (C1173T) con la respuesta y los efectos adversos. Material y método: los genotipos CYP2C9*1, *2, *3, y VKORC1 fueron obtenidos por PCR-RFLP y los resultados analizados usando el paquete estadístico SPSS 12.0. Resultados: hay una tendencia a la reducción de dosis en relación con la presencia de alelos polimórficos. Los portadores de CYP2C9*3 requirieron la menor dosis de mantenimiento, seguidos por los portadores de CYP2C9*2 y homocigotos CYP2C9 *1, en ese orden, (4,4±1,0 vesus 5,4±2,3 versus 7,0±3,6 mg/d, p=0,03). Los portadores CYP2C9*3 tuvieron, además, un aumento del riesgo de sobreanticoagulación y requirieron casi el doble de ajustes de dosis para lograr una adecuada anticoagulación. Para VKORC1, los homocigotas T/T necesitaron la dosis más baja, seguidos por los heterocigotas C/T y homocigotas C/C, en ese orden (3,6±0,6 versus 5,5±0,5 y 7,9±0,7 mg/d, p <0,001). Los pacientes T/T tuvieron un mayor riesgo de sobreanticoagulación que los C/T y C/C. El genotipo T/T de VKORC1 produce en todas las combinaciones con CYP2C9 una disminución cercana a 50% de la dosis diaria de warfarina. Conclusiones: se confirma una sensibilidad aumentada a la warfarina en pacientes portadores de alelos *2 y *3 de CYP2C9, y T de VKORC1. Se demuestra un efecto combinado (aproximadamente aditivo) de los alelos variantes de ambos genes.

Summary Introduction: warfarin is a widely used oral anticoagulant. Its narrow therapeutic range (NTR) and its large interindividual variability requires strict control when administered to avoid hemorrhagic accidents. Objectives: to correlate CYP2C9*2 and *3 and VKORC1 (C1173T) genetic variants with response and adverse side effects. Method: CYP2C9*1, *2, *3, and VKORC1 genotypes were obtained by a commonly used PCR-RFLP procedure. The results were analyzed using SPSS 12.0. statistical package. Results: there is a tendency to reduce the dosage in connection with the presence of polymorphic alleles. CYP2C9*3 carriers require the lower maintenance dosage, followed by CYP2C9*2 carriers and then by CYP2C9 *1 homozygotes (4.4±1.0 versus 5.4±2.3 versus 7.0±3.6 mg/d, p=0.03). CYP2C9*3 carriers also showed an increase in the anticoagulation risk, which required almost twice the number of dose adjustments to achieve appropriate anticoagulation. As to VKORC1, T/T homozygotes needed the lowest dose, followed by the C/T heterozygotes, and then by the C/C homozygotes (3.6±0.6 versus 5.5±0.5 and 7.9±0.7 mg/d, p <0,001). Risk of overcoagulation was higher in T/T patients than in C/T or C/C patients. T/T genotype of VKORC1 causes a decrease of nearly 50% in the warfarine daily dosage for all combinations with CYP2C9. Conclusions: we confirmed an increased sensitivity to warfarine in patient carriers of *2 and *3 CYP2C9 alleles and T VKORC1 alleles. We showed a combined effect (approximately accumulative) of variant alleles in both genes.

Résumé Introduction: la warfarine est une drogue très utilisée comme anticoagulant oral. Étant donné son restreint rang thérapeutique et sa remarquable variabilité interindividuelle, un contrôle rigoureux du dosage s’avère indispensable afin d’éviter des accidents hémorragiques. Objectifs: mettre en rapport les variantes génétiques de CYP2C9*2 et *3 et VKORC1 (C1173T) avec la réponse et les effets adverses. Matériel et méthode: les génotypes CYP2C9*1,*2,*3, et VKORC1 résultent par PCR-RFLP et les résultats analysés au moyen du paquet statistique SPSS 12.0. Résultats: il existe une tendance à réduire la dose par la présence d’allèles polymorphiques. Les porteurs de CYP2C9*3 ont requis une dose plus basse de maintien, puis les porteurs de CYP2C9*2 et homozygotes CYP2C9*1, dans cet ordre, (4,4±1,0 versus 7,0±3,6 mg/d, p=0,03). Les porteurs CYP2C9*3 ont aussi subi une augmentation du risque de suranticoagulation et ont requis presque le double d’ajustement de la dose pour atteindre une anticoagulation adéquate. Pour VKORC1, les homozygotes T/T ont requis une dose plus basse, suivis des hétérozygotes C/T et des homozygotes C/C, dans cet ordre (3,6±0,6 versus 5,5±0,5 et 7,9±0,7 mg/d, p <0,001). Les patients T/T ont subi un plus grand risque de suranticoagulation que les C/T et C/C. Le génotype T/T de VKORC1 provoque dans toutes les combinaisons avec CYP2C9 une diminution de 50% environ de la dose par jour de warfarine. Conclusions: on confirme une sensibilité augmentée à la warfarine chez les patients porteurs d’allèles *2 et *3 de CYP2C9, et T de VKORC1. Un effet combiné (à peu près aditif) des allèles variantes des deux gènes reste évident.

Resumo Introdução: a warfarina é uma droga muito usada como anticoagulante oral. Sua administração deve ser controlada rigorosamente para evitar acidentes hemorrágicos devido a uma aplicação terapêutica restrita e a variação da resposta individual. Objetivos: correlacionar as variantes genéticas de CYP2C9*2 e *3 y VKORC1 (C1173T) com a resposta e os efeitos adversos. Material e método: os genótipos CYP2C9*1, *2, *3, e VKORC1 foram obtidos por PCR-RFLP e os resultados foram analisados usando o programa SPSS 12.0. Resultados: observa-se uma tendência à redução da dose na presença de alelos polimórficos. Os portadores de CYP2C9*3 necessitam doses de manutenção mais baixas, seguidos pelos portadores de CYP2C9*2 e homozigotos CYP2C9 *1 (4,4±1,0 versus 5,4±2,3 versus 7,0±3,6 mg/d, p=0,03). Os portadores de CYP2C9*3 apresentaram também um aumento do risco de sobreanticoagulaçao e necessitam o dobro do número de ajustes de dose para obter uma anticoagulaçao adequada. Para VKORC1, os homozigotos T/T necessitaram a dose mais baixa, seguidos pelos heterozigotos C/T e homozigotos C/C (3,6±0,6 versus 5,5±0,5 y 7,9±0,7 mg/d, p <0,001). Os pacientes T/T apresentaram um risco maior de sobreanticoagulação que os C/T e C/C. O genótipo T/T de VKORC1 produz uma redução de aproximadamente 50% da dose diária de warfarina em todas as combinações com CYP2C9. Conclusões: confirma-se a sensibilidade aumentada à warfarina de pacientes portadores de alelos *2 y *3 de CYP2C9, e T de VKORC1. Demonstram-se um efeito combinado (aproximadamente aditivo) dos alelos variantes de ambos os genes.

Odontología genómica: la medicina oral del siglo XXI / Genomic dentistry: the oral medicine of 21st century

Los avances tecnológicos y la culminación del Proyecto Genoma Humano y con él la secuencia de 3.200 millones de los nucleótidos o de las letras (A-T/G-C) que la componen, y los aproximadamente 1.400 genes que pueden ser las causas de enfermedades consideradas hasta este momento como genéticas, han cambiado la cara de las investigaciones biológicas y han colocado a la genómica en la vanguardia de la ciencia biomédica. En la periodontología, así como en la medicina, estamos muy interesados en la genética y en los diferentes acomodos o polimorfismos de los nucleótidos (SNIPs), tanto en los humanos como en los patógenos, así como la interacción genética entre ellos

Infecções respiratórias agudas virais em crianças de Salvador: análise antigênica e genômica dos virus sincicial respiratório e adenovirus isolados com correlação clínica / Viral acute respiratory infections in childrens from Salvador: antigenic and genomics analysis of isolates of respiratory syncytial virus and adenovirus with clinic correlation

O presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de contribuir para o conhecimento da prevalência viral em casos de infecções respiratórias agudas (IRA) em crianças de Salvador, assim como realizar a caracterização antigênica e genômica dos adenovírus e vírus sincicial respiratório (VSR) isolados. Um total de 482 casos de infecção respiratória aguda do ano de 1998 foram investigados quanto a etiologia viral através de imunofluorescência indireta e isolamento em cultura celular. Trinta adenovírus isolados em 1998, 1997 e 1996 foram submetidos soroneutralização e análise de restrição enzimática. Imunofluorescência indireta e ELISA foram utilizados para caracterização antigênica de VSR detectados em 1998 e 1999, respectivamente. A caracterização genômica de VSR foi realizada através da amplificação do gene da proteína G e posterior seqüenciamento de nucleotídeos. Cento e cinquenta e quatro casos de infecção respiratória aguda tiveram sua etiologia viral diagnosticada. Os vírus mais prevalentes em ordem decrescente foram o VSR, influenza A, parainfluenza 3, adenovírus, influenza B e parainfluenza 1. As IRA virais acometeram principalmente crianças até um ano de idade, do sexo masculino, e foram diagnosticadas predominantemente como infecção de vias aéreas superiores. Dos 30 Adenovírus analisados, dezoito eram Ad2, seis Adl, cinco Ad3 e um Ad5. A caracterização genômica dos Ad2 mostrou que circularam o genotipo D5 e uma nova variante genômica. Entre os Ad 1, circularam o genotipo DI e duas novas variantes genômicas. Representantes dos Ad3 e Ad5 foram os tipos genômicos 3f e 5#, respectivamente. Entre 84 VSR detectados em 1998,64 pertenciam ao grupo A e 14 ao grupo B. A análise genômica de 6 cepas de VSR mostrou a existência de vários genótipos circulantes em 1999. O VSR foi o vírus mais prevalente entre sete vírus investigados. Durante o mesmo período epidêmico houve a circulação de ambos...