Immature Platelet Fraction and Thrombin Generation: Preeclampsia Biomarkers / Fração de plaquetas imaturas e geração de trombina: Biomarcadores da pré-eclâmpsia

Abstract Preeclampsia, a human pregnancy syndrome, is characterized by elevated blood pressure and proteinuria after the 20th week of gestation. Its etiology remains unknown, and its pathophysiological mechanisms are related to placental hypoperfusion, endothelial dysfunction, inflammation, and coagulation cascade activation. Recently, the role of the complement system has been considered. This syndrome is one of the main causes of maternal and fetal mortality and morbidity. This article discusses the hypothesis of preeclampsia being triggered by the occurrence of inadequate implantation of the syncytiotrophoblast, associated with bleeding during the first stage of pregnancy and with augmented thrombin generation. Thrombin activates platelets, increasing the release of antiangiogenic factors and activating the complement system, inducing the membrane attack complex (C5b9). Immature platelet fraction and thrombin generation may be possible blood biomarkers to help the early diagnosis of preeclampsia.

Resumo A pré-eclâmpsia, uma síndrome da gestação humana, é caracterizada por elevação da pressão arterial e proteinúria patológica após a 20ª semana de gestação. Sua etiologia permanece desconhecida, e seus mecanismos fisiopatológicos estão relacionados à hipoperfusão placentária, disfunção endotelial, inflamação, e ativação da cascata de coagulação. Recentemente, o papel do sistema do complemento foi considerado. Essa síndrome é uma das principais causas de morbidade e mortalidade materna e fetal. Este artigo discute a hipótese de a pré-eclâmpsia ser desencadeada pela ocorrência da implantação inadequada do sinciciotrofoblasto, associada ao sangramento durante o primeiro trimestre da gravidez com aumento da geração de trombina. A trombina ativa plaquetas, aumentando a liberação de fatores antiangiogênicos na circulação e ativando o sistema do complemento, especialmente o complexo de ataque de membrana (C5b9). Portanto, a fração de plaquetas imaturas e a geração de trombina podem ser possíveis biomarcadores sanguíneos para auxílio no diagnóstico precoce da pré-eclâmpsia.

Recurrent pterygium resection associated to fibrin membrane graft: report of two cases / Resseção do pterígio recorrente associada ao enxerto de membrana fibrina: relato de dois casos

ABSTRACT We propose a novel surgical technique in cases of aggressive recurrent pterygium non-subsidiary of treatment with conjunctival autografts or antimetabolites. Two presented cases were treated with surgical excision and a sutured plasma rich in growth factors membrane (mPRGF) followed by rich in growth factors (PRGF) eye drops treatment. After surgery, dexamethasone, tobramycin and PRGF eye drops were prescribed for 6 weeks. After a 12-month and 3-year post-surgical follow-up respectively, treated eyes with mPRGF did not present relapse, and visual acuity improved in both cases. No ocular complications, pain, eye discomfort nor other symptoms were observed. The combined use of PRGF eye drops and mPRGF seems an effective and safe therapy for recurrent pterygium.

RESUMO Nós propomos uma nova técnica cirúrgica em casos de pterígio agressivo recorrente não subsidiário de tratamento com autoenxertos conjuntivais ou antimetabólitos. Dois casos foram tratados com excisão cirúrgica e um plasma suturado rico em membrana de fatores de crescimento (mPRGF), seguido de tratamento com colírios ricos em fatores de crescimento (PRGF). Após a cirurgia, foram prescritos colírios de dexametasona, tobramicina e PRGF por 6 semanas. Após 12 meses e 3 anos de acompanhamento pós-cirúrgico respectivamente, os olhos tratados com mPRGF não apresentaram recidiva e a acuidade visual melhorou nos dois casos. Não foram observadas complicações oculares, dor, desconforto ocular ou outros sintomas. O uso combinado de colírios de PRGF e mPRGF parece uma terapia eficaz e segura para o pterígio recorrente.

Activated platelets in central venous catheters: a flow cytometry and numerical simulation approach

The central venous catheter that is inserted in patients undergoing hemodialysis can cause hemodynamic instability and trigger complications such as thrombus formation. The objective of this study was to investigate hemostatic and numerical influences on thrombus formation in patients undergoing hemodialysis with a central venous catheter. Participants were assigned to three groups: I: clinical and laboratorial healthy individuals matched by sex and age (controls); II: participants after one month of insertion of the catheter and III: participants after 4 months of insertion of the catheter. Platelet activation was investigated by GPIIb/IIIa and p-selectin expressions using flow cytometry. A three-dimensional model of the catheter was constructed in the numerical simulation for the calculation of partial differential equation of a platelet activation model. A significant difference was detected by the expression of p-selectin comparing the group I (33.42 ± 4.74), group II (40.79 ± 5.54) and group III(51.00 ± 7.21) (p < 0.0001). The median values for GPIIb/IIIa were 10426 (10029-10721), 13921 (13412-15652) and 19946 (18714-21815) after catheter insertion (p < 0.0001), for groups I, II and III, respectively. Excluding the first arterial orifice, venous orifices tend to have greater platelet activation when compared to the other arterial orifices. The results of this study showed the influence of arterial and venous lateral orifices in stimulating the development of thrombi associated with the activation of platelet markers the longer the catheter was used.

Determinación de la viabilidad de los concentrados plaquetarios obtenidos de capa leucocitaria (buffy coat) durante siete días de almacenamiento / Monitoring of the Viability of Platelet Concentrates Obtained from Buffy Coat during Seven Days of Storage / Determinação da viabilidade de concentrados de plaquetas obtidos de camada leucocitária (buffy coat) durante sete dias de armazenamento

Introducción: los concentrados plaquetarios (CPG) son hemocomponentes lábiles afectados por varios factores, desde el método de obtención hasta las condiciones de almacenamiento, que provocan una paulatina pérdida de funcionalidad, por lo que es necesario evaluar parámetros de calidad que garanticen la viabilidad de las plaquetas durante los días de almacenamiento, con el propósito de monitorear el mantenimiento de las características funcionales de las plaquetas. Materiales y métodos: estudio descriptivo transversal, con un tamaño muestral de 64 cpq, evaluados a los 3, 5 y 7 días de almacenamiento. Los parámetros monitoreados fueron físicos, de almacenamiento y porcentaje de la activación plaquetaria mediante la medición de P-selectina (cd62) por citometría de flujo. Se aplicó el estadístico de chi cuadrado, Anova de un factor, Kruskall-Wallis y correlación de Pearson. Resultados: existen diferencias significativas al séptimo día con relación al tercer y quinto día de almacenamiento, especialmente en el parámetro de formación de remolino plaquetario o swirling (p < 0.005) y agregados plaquetarios (p = 0.001). La activación plaquetaria aumentó significativamente (p = 0.001) desde el quinto día. Conclusiones: la viabilidad de los cpq difiere con los días de almacenamiento, por lo que es necesario evaluar pH, formación de remo-linos y agregados a todos los cpq antes de ser transfundidos como indicativos de activación plaquetaria y disminución de su funcionalidad

Introduction: Platelet concentrates (cpq) are labile blood components affected by several factors from the method of production to storage conditions that cause a gradual loss of functionality. For this reason, it is necessary to evaluate the platelet quality parameters that guarantee the viability during the storage days, with the purpose of monitoring the maintenance of the functional characteristics of the platelets. Materials and methods: This cross-sectional descriptive study had a sample size of 64 platelet concen-trates, evaluated at 3, 5, and 7 days of storage. The monitored parameters were the physical storage parameters and percentage of platelet activation by measuring P-selectin (cd62) via flow cytometry. The chi-square statistic, one-way Anova, Kruskal­Wallis test, and Pearson correlation were applied. Results: Significant differences were observed on the 7th day in relation to the 3rd and 5th day of storage, espe-cially in the swirling parameter (p < 0.005) and platelet aggregates (p = 0.001). The platelet activation increased significantly (p = 0.001) on the 5th day. Conclusions: Based on the findings of this study, the viability of the platelet concentrates differs with the days of storage. For this reason, it is necessary to evaluate the swirling, pH, and aggregates to all platelet concentrates before being transfused as an indication of platelet activation and decreased functionality

Introdução: os concentrados de plaquetas (cpq) são hemocomponentes lábeis afetados por diversos fato-res, desde o método de obtenção até as condições de armazenamento que ocasionam uma perda grada-tiva de funcionalidade, sendo necessário avaliar os parâmetros de qualidade que garantem a viabilidade das plaquetas ao longo dos dias de armazenamento, a fim de monitorar a manutenção das características funcionais das plaquetas. Materiais e métodos: estudo descritivo transversal, com tamanho de amostra de 64 cpq, avaliados aos três, cinco e sete dias de armazenamento. Os parâmetros monitorados foram físicos, de armazenamento e porcentagem de ativação plaquetária pela dosagem de P-selectin (cd62) por citometria de fluxo. Os testes estatísticos aplicados incluíram o teste qui-quadrado, anovade um fator, teste de Kruskall-Wallis e correlação de Pearson. Resultados: há diferenças significativas no sétimo dia em relação ao terceiro e quinto dia de armazenamento, principalmente no parâmetro formação de rede-moinhos ou swirling de plaquetas (p < 0.005) e agregados plaquetários (p = 0.001). A ativação plaquetária aumentou significativamente (p = 0.001) a partir do quinto dia. Conclusões: a viabilidade dos concentra-dos de plaquetas difere com os dias de armazenamento, por isso é necessário avaliar o pH, a formação de redemoinhos e agregados a todos os concentrados de plaquetas antes de serem transfundidos como indicativo de ativação plaquetária e diminuição de sua funcionalidade

Alteraciones hematológicas en COVID-19 / Hematological Findings in COVID-19

Resumen El SARS (síndrome respiratorio agudo grave) es el estadio grave de la COVID-19 ocasionado por el SARS-CoV-2, que causa infecciones respiratorias en humanos y cuya transmisión se da principalmente por contacto. El virus ingresa a la célula huésped por la interacción de la proteína S con la enzima convertidora de angiotensina II (ACE2), presente en el tracto respiratorio, así como en monocitos, macrófagos, células endoteliales, corazón y tracto gastrointestinal. El aumento de IFN frena la replicación viral y activa la respuesta inmune adaptativa. Así, las manifestaciones clínicas de la infección se presentan frecuentemente a nivel del tracto respiratorio; sin embargo, también pueden involucrar otros sistemas como el hematopoyético. En el hemograma se observan recuentos celulares alterados, principalmente leucocitos y plaquetas. La linfopenia y neutrofilia se asocian con enfermedad severa y la trombocitopenia se presenta de manera heterogénea en la infección. Entre las complicaciones se encuentra la coagulación intravascular diseminada, producida cuando los monocitos y las células endoteliales son activadas por la liberación de citoquinas; esto genera daño endotelial, con la síntesis del factor tisular, secreción de factor tisular, activación plaquetaria y liberación del factor Von Willebrand, así como una condición hiperfibrinolítica especialmente en estadios tardíos de la infección. Las pruebas de laboratorio como el dímero D, los productos de degradación de la fibrina (PDF), tiempo de protrombina (TP), tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPA), entre otras, son fundamentales para el diagnóstico, seguimiento y pronóstico de la enfermedad.

Abstract Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS) is the serious condition of coronavirus (COVID-19) caused by SARS-COV-2 which causes respiratory infections in humans, and whose transmission is given mainly through the contact. this virus enters into the host cell due to the spike protein (S) interaction with the angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2), which is not only present in the respiratory tract but also monocytes, macrophages, endothelial cells, the heart, and gastrointestinal tract. The increase in INF stops viral replication and activates the adaptive immune response. The infection's clinic manifestations often occur in the respiratory tract; however, other systems like the hematopoietic may be affected. Altered cell counts, mainly leukocytes and platelets, are seen on the blood count. Lymphopenia and neutrophilia are associated with severe disease; thrombocytopenia is present in a heterogeneous way in the infection. Among the disease's complications are the Disseminated Intravascular Coagulation (DIC) that results when monocytes and endothelial cells are activated because of the release of cytokines, causing endothelial damage, with the synthesis of the tissue factor, tissue factor discharge, platelet activation, and the von Willebrand factor release, generating a hyperfibrinolytic condition especially in the infection's late-stage. Laboratory tests such as D-dimer (D-D), Fibrinogen Degradation Products (FDP), Prothrombin Time (PT), Activated Partial Thromboplastin Time (APTT) among others, are essential to the diagnosis, monitoring, and prognosis of the disease.

Low triiodothyronine syndrome is associated with platelet function in patients with nephrotic syndrome

SUMMARY OBJECTIVE The objective of this study was to investigate the effects of low triiodothyronine syndrome (LT3S) on platelet function and clotting factors in patients with nephrotic syndrome(NS). METHODS Patients with primary nephrotic syndrome were divided into two groups, normal thyroid function (group A) and LT3S (group B), based on whether they had LT3S or not. Healthy subjects were selected as the control group (group C). Blood coagulation function was detected in each group. The platelet activation function (CD62P, CD63) was determined by flow cytometry. The platelet aggregation rate was detected by an optical method using adenosine diphosphate and arachidonic acid as inducers. RESULTS The proportion of primary nephrotic syndrome with LT3S was 23.2% (69/298). Compared with group C, group A had higher CD62P and PAgTADP, and group B had higher CD62P, CD63, PAgTAA, and PAgTADP; the difference was statistically significant (all P < 0.05). There was no significant difference in renal pathology between group A and group B (X2 = 4.957, P = 0.421). Compared with group A, the 24-hour urine protein, CD63, PAgTAA, and PAgTADP were higher in group B, and APTT and Alb were lower. The difference was statistically significant (P < 0.05). Logistic regression analysis showed that LT3S was associated with CD36 (OR: 3.516; 95% CI: 1.742~8.186; P = 0.004) and PAgTAA (OR: 0.442; 95% CI: 1.001~1.251; P = 0.037). CONCLUSION NS patients are prone to LT3S. Patients with LT3S may have abnormal platelet activation and increase of platelet aggregation.

RESUMO OBJETIVO O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da síndrome do baixo triiodotironina (LT3S) na função plaquetária e nos fatores de coagulação em pacientes com síndrome nefrótica (SN). MÉTODOS Pacientes com síndrome nefrótica primária foram divididos em dois grupos, função tireoidiana normal (grupo A) e LT3S (grupo B), com base na presença ou não de LT3S. Indivíduos saudáveis foram selecionados como grupo de controle (grupo C). A função de coagulação do sangue foi analisada em cada grupo. A função de ativação plaquetária (CD62P, CD63) foi determinada por citometria de fluxo. A taxa de agregação plaquetária foi detectada por um método óptico usando adenosina difosfato e ácido araquidônico como indutores. RESULTADOS A proporção de síndrome nefrótica primária com LT3S foi de 23,2% (69/298). Em comparação com o grupo C, o grupo A apresentou níveis mais altos de CD62P e PAgTADP, e o grupo B apresentou maiores CD62P, CD63, PAgTAA e PAgTADP; a diferença teve significância estatística (P < 0,05). Não houve diferença significativa na patologia renal entre o grupo A e o grupo B (X2 = 4,957, P = 0,421). Em comparação com o grupo A, a proteína em urina de 24 horas, CD63, PAgTAA e PAgTADP foram maiores no grupo B, já APTT e Alb foram mais baixos. A diferença apresentou significância estatística (P < 0,05). A análise de regressão logística mostrou uma associação entre LT3S e CD36 (OR: 3,516; 95% IC: 1,742~8,186; P = 0,004) e PAgTAA (OR: 0,442; 95% IC: 1,001~1,251; P = 0,037). CONCLUSÃO Pacientes com síndrome nefrótica estão propensos à síndrome do baixo triiodotironina (LT3S). Pacientes com LT3S podem ter ativação plaquetária anormal e aumento da agregação plaquetária.

Utilidad diagnóstica del volumen plaquetario medio en embarazadas con preeclampsia / Diagnostic utility of mean platelet volume in pregnant women with preeclampsia

RESUMEN OBJETIVO: Establecer la utilidad diagnóstica del volumen plaquetario medio en embarazadas con preeclampsia. MÉTODOS: Se realizó un estudio de de casos y controles en el Hospital Central "Dr. Urquinaona", Maracaibo, Venezuela. Se seleccionó un total de 180 embarazadas. Se incluyeron 90 preeclámpticas como grupo de estudio (grupo A) y un grupo de control seleccionado por tener edad e índice de masa corporal similares al grupo de estudio, que consistió en 90 embarazadas normotensas sanas (grupo B). Las muestras de sangre se recolectaron en todas las pacientes antes del parto e inmediatamente después del diagnóstico en el grupo A, para determinar los valores de volumen plaquetario medio. Se determinaron las características generales, valores de volumen plaquetario medio y eficacia diagnóstica. RESULTADOS: Se encontraron diferencias estadísticamente significativas en los valores de volumen plaquetario medio entre las pacientes del grupo A (10,35 +/− 1,11 fL) y las pacientes del grupo B (9,54 +/− 0,96 fL; p < 0,001). No se observaron correlaciones significativas con los valores de presión arterial sistólica y diastólica (p = ns). Un valor de corte de 10,3 fL presentó un valor por debajo de la curva de 0,71, sensibilidad del 53,3%, especificidad del 63,1%, valor predictivo positivo del 63,2% y valor predictivo negativo del 59,6%, con una exactitud diagnóstica del 61,1%. CONCLUSIÓN: Los valores volumen plaquetario medio no son útiles para discriminar el diagnóstico de preeclampsia en las embarazadas, a pesar que las preeclámpticas presentaron valores significativamente más elevados de al compararlo con embarazadas normotensas sanas.

ABSTRACT OBJECTIVE: To establish the diagnostic utility of the mean platelet volume in pregnant women with preeclampsia. METHODS: Case-control study was done at Hospital Central "Dr. Urquinaona", Maracaibo, Venezuela. A total of 180 patients were selected. Ninety preeclamptic patients were selected as the study group (group A) and 90 healthy normotensive pregnant women with the same age and body mass index as the study group were selected as controls (group B). Blood samples were extracted from all patients before labor and immediately after diagnosis in group A to determine mean platelet volume. General characteristics, mean platelet volume values and diagnostic efficacy were determined. RESULTS: There was a statistically significant difference in mean platelet volume values between patients in study group (group A: 10.35 +/− 1.11 fL) and patients in control group (group B: 9.54 +/− 0.96 fL; p < 0.001). There was no significant correlation with systolic and diastolic blood pressure values (p = ns). A cutoff value of 10.3 fL had an area under the curve of 0.71, sensitivity 53.3%, specificity 63.1%, positive predictive value 63.2% and negative predictive value 59.6%, with diagnostic accuracy of 61.1%. CONCLUSION: Mean platelet volume values are not useful for discriminating the diagnosis of preeclampsia in pregnant women, although the preeclamptic values were significantly higher when compared with healthy normotensive pregnant women.

Infecções graves, risco cardiovascular e função plaquetária em indivíduos infectados pelo HIV-1 / Serious infections, cardiovascular risk and platelet function in HIV-1 infected individuals

Introdução: A infecção pelo HIV-1 se tornou uma doença crônica. Este novo cenário clínico está associado a um estado pró-inflamatório e a um aumento proporcional na incidência de doenças cardiovasculares (DCV). Este tema foi abordado e será exposto na forma de dois artigos originais. Artigo 1: "Infecções graves aumentam o risco cardiovascular em indivíduos infectados pelo HIV". Objetivo: Avaliar se a presença de infecções graves influencia a ocorrência de DCV em indivíduos infectados pelo HIV. Métodos: Indivíduos infectados pelo HIV incluídos na coorte do Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas (INI/FIOCRUZ) entre 2000 e 2013 foram seguidos até a ocorrência do primeiro evento cardiovascular, morte ou fim do estudo. Infecção grave foi definida como hospitalização associada ao tratamento de infecção. Modelos de regressão de Cox, ajustados para potenciais confundidores, foram utilizados para avaliar o efeito de uma hospitalização por infecção no risco de ocorrência de DCV. Resultados: O risco de uma DCV foi 4 vezes maior no período de <3 meses pós-hospitalização (hazard ratio ajustada [aHR], 4,52; intervalo de confiança de 95% [CI] 2,46-8,30) e permaneceu elevado até um ano (3-12 meses após a alta hospitalar aHR 2.39, IC 95% 1.30-4.38)

Conclusão: Infecções graves aumentam o risco cardiovascular na população estudada. Um gradiente de efeito foi observado, sendo o risco maior nos primeiros meses após o evento infeccioso. Artigo 2: "Persistência da ativação plaquetária e apoptose em indivíduos infectados pelo HIV-1". Objetivo: Investigar marcadores de ativação plaquetária e apoptose em indivíduos infectados pelo HIV-1 e controlados virologicamente. Métodos: Citometria de fluxo e microscopia de fluorescência foram utilizadas para avaliar parâmetros de ativação, função mitocondrial e apoptose em plaquetas de indivíduos infectados pelo HIV- 1 da coorte do INI/FIOCRUZ, e controles. Resultados: Maior ativação (expressão de Pselectina), disfunção mitocondrial (despolarização mitocondrial e aumento da geração de espécies reativas de oxigênio) e apoptose (fosfatidilserina e caspase-9) foi evidenciada na plaqueta de indivíduos infectados pelo HIV-1, comparada com controles. Conclusões: Apesar do controle virológico, infecção pelo HIV-1 está associada a um fenótipo de ativação, apoptose e exaustão granular. (AU)

Aplicación de las plaquetas en la extrofia vesical / Use of platelet in bladder exstrophy

La extrofia vesical es una anomalía congénita grave del tracto urinario inferior que afecta la vejiga, los huesos pelvianos, la pared abdominal, los genitales externos, el perineo y, en algunos casos, el intestino. Los tratamientos convencionales están basados en técnicas quirúrgicas, para lograr reconstruir la vejiga, los genitales y cerrar el defecto de la pared. Se presenta el caso de una niña de 3 años de edad, en la que el tratamiento quirúrgico se había aplicado en 6 ocasiones sin resultados. Se decidió combinar el tratamiento quirúrgico con la aplicación de medicina regenerativa. Se le aplicó lisado de plaquetas en la pared de la vejiga y los bordes de la pared abdominal a razón de 1 mL semanal, durante 4 semanas. Se logró la regeneración de los tejidos que permitió afrontar los bordes de dichas estructuras y realizar la técnica quirúrgica convencional. Como resultado se logró cierre total de vejiga, uretra y pared abdominal, sin fístulas entre estas estructuras ni al exterior. La utilización del lisado de plaquetas favorece el crecimiento y regeneración de los tejidos que componen el tracto urinario. La cirugía puede ser una solución definitiva, después de haber aplicado los factores de crecimiento plaquetarios, que preparan el tejido en cuanto a calidad y cantidad, favoreciendo el afrontamiento de los bordes, la cicatrización y disminuyendo las complicaciones posquirúrgicas(AU)

Bladder exstrophy is a severe congenital anomaly of lower urinary tract that affects the bladder, pelvic bones, abdominal wall, external genitalia, perineum and in some cases intestine. Conventional treatments are based on surgical techniques, in order to reconstruct bladder, genitals and close wall defect. We present a case of a 3 year old girl, in which surgical treatment was applied 6 times without results. It was decided to combine the surgical treatment with application of regenerative medicine. It was applied platelet lysate in the bladder wall and the edges of the abdominal wall at the rate of 1 mL weekly for 4 weeks, achieving tissue regeneration. It enabled to face the edges of those structures and perform conventional surgical technique. As a result, we achieved a total closure of bladder, urethra and abdominal wall, without fistulas either between these structures or outside. Therefore the use of platelet lysate promotes growth and tissue regeneration comprising the urinary tract, decreasing number of interventions, time exposition structures of the abdominal cavity, and post surgical complications such as fistulas(AU)

Mean platelet volume is decreased in adults with active lupus disease / O volume plaquetário médio está reduzido em adultos com lúpus ativo

ABSTRACT Background: Only a few biomarkers are available for assessing disease activity in systemic lupus erythematosus (SLE). Mean platelet volume (MPV) has been recently studied as an inflammatory biomarker. It is currently unclear whether MPV may also play a role as a biomarker of disease activity in adult patients with SLE. Objective: We investigated the association between MPV and disease activity in adult patients with SLE. Methods: In this retrospective study, we compared two groups of adult patients divided according to disease activity (36 per group). Subjects were age- and gender-matched. Results: MPV was significantly decreased with respect to those of inactive patients (7.16 ± 1.39 vs. 8.16 ± 1.50, p = 0.005). At a cutoff level of 8.32 fL, MPV has a sensitivity of 86% and a specificity of 41% for the detection of disease activity. A modest positive correlation was found between MPV and albumin (r = 0.407, p = 0.001), which in turn is inversely associated with disease activity. Conclusions: In summary, MPV is decreased in adult patients with active lupus disease, and positively correlated with albumin, another biomarker of disease activity. Prospective studies are needed to evaluate the prognostic value of this biomarker.

RESUMO Antecedentes: Existem poucos biomarcadores disponíveis para avaliar a atividade da doença no lúpus eritematoso sistêmico (LES). O volume plaquetário médio (VPM) foi recentemente estudado como um biomarcador inflamatório. Atualmente não está claro se o VPM também pode desempenhar um papel como um biomarcador da atividade da doença em pacientes adultos com LES. Objetivo: Investigou-se a associação entre o VPM e a atividade da doença em pacientes adultos com LES. Métodos: Neste estudo retrospectivo, compararam-se dois grupos de pacientes adultos divididos de acordo com a atividade da doença (36 por grupo). Os indivíduos foram pareados por idade e gênero. Resultados: O VPM esteve significativamente diminuído nos pacientes com doença ativa em comparação com os níveis em pacientes com doença inativa (7,16 ± 1,39 versus 8,16 ± 1,50, p = 0,005). Em um nível de corte de 8,32 fL, o VPM tem uma sensibilidade de 86% e uma especificidade de 41% para a detecção da atividade da doença. Encontrou-se uma correlação positiva modesta entre o VPM e a albumina (r = 0,407, p = 0,001), que por sua vez está inversamente associada à atividade da doença. Conclusões: Em resumo, o VPM está diminuído em pacientes adultos com lúpus ativo e positivamente correlacionado com a albumina, outro biomarcador da atividade da doença. São necessários estudos prospectivos para avaliar o valor prognóstico desse biomarcador.

Method to obtain platelet-rich plasma from rabbits (Oryctolagus cuniculus ) / Método de obtenção de plasma rico em plaquetas de coelhos (Oryctolagus cuniculus)

Platelet-rich plasma (PRP) is a product easy and inxpesnsive, and stands out to for its growth factors in tissue repair. To obtain PRP, centrifugation of whole blood is made with specific time and gravitational forces. Thus, the present work aimed to study a method of double centrifugation to obtain PRP in order to evaluate the effective increase of platelet concentration in the final product, the preparation of PRP gel, and to optimize preparation time of the final sample. Fifteen female White New Zealand rabbits underwent blood sampling for the preparation of PRP. Samples were separated in two sterile tubes containing sodium citrate. Tubes were submitted to the double centrifugation protocol, with lid closed and 1600 revolutions per minute (rpm) for 10 minutes, resulting in the separation of red blood cells, plasma with platelets and leucocytes. After were opened and plasma was pipetted and transferred into another sterile tube. Plasma was centrifuged again at 2000rpm for 10 minutes; as a result it was split into two parts: on the top, consisting of platelet-poor plasma (PPP) and at the bottom of the platelet button. Part of the PPP was discarded so that only 1ml remained in the tube along with the platelet button. This material was gently agitated to promote platelets resuspension and activated when added 0.3ml of calcium gluconate, resulting in PRP gel. Double centrifugation protocol was able to make platelet concentration 3 times higher in relation to the initial blood sample. The volume of calcium gluconate used for platelet activation was 0.3ml, and was sufficient to coagulate the sample. Coagulation time ranged from 8 to 20 minutes, with an average of 17.6 minutes. Therefore, time of blood centrifugation until to obtain PRP gel took only 40 minutes...

O plasma rico em plaquetas (PRP) é um produto de fácil obtenção a baixo custo, destacando-se pelos seus fatores de crescimento na reparação tecidual. Para obtenção do PRP, a centrifugação do sangue total é realizada com tempos e forças gravitacionais específicas. Assim, o presente trabalho teve por objetivo estudar o método da dupla centrifugação para obtenção do PRP, a fim de avaliar a eficácia de aumento da concentração de plaquetas no produto final, a preparação de gel de PRP e otimizar o tempo de preparação da amostra final. Quinze coelhos Nova Zelândia Branco, fêmeas, foram submetidos à coleta de sangue para a preparação de PRP. As amostras foram separadas em dois tubos estéreis contendo citrato de sódio. Os tubos foram submetidos ao protoloco de dupla centrifugação, com a tampa fechada a 1600 revoluções por minuto (rpm) durante 10 minutos, resultando na separação dos glóbulos vermelhos, plaquetas e plasma contendo os leucócitos. Na sequência, foram destapados para pipetar o plasma e transferí-lo para outro tubo de estéril. O plasma foi novamente centrifugado a 2000pm durante 10 minutos, resultando em duas partes: a parte superior, que consistia em plasma pobre em plaquetas (PPP) e a parte inferior do botão de plaquetas. Parte PPP foi descartado de modo que apenas 1ml de PPP permaneceu no frasco juntamente com o botão de plaquetas. Este material foi agitado suavemente para promover a ressuspensão das plaquetas, o que resultou na produção de PRP. O protocolo de centrifugação dupla foi capaz de promover a concentração de plaquetas 3 vezes maior em relação à amostra de sangue inicial. O volume de gluconato de cálcio utilizado para a ativação das plaquetas foi de 0,3ml, e foi suficiente para coagular a amostra, e o tempo de coagulação variou de 8 a 20 minutos, com uma média de 17,6 minutos. O tempo da centrifugação do sangue até a obtenção do PRP gel levou apenas 40 minutos...

Alteraciones de la hemostasia en el síndrome drepanocítico / Hemostasis alterations in sickle cell syndrome

El síndrome drepanocítico (SD) comprende un grupo de anemias hemolíticas hereditarias de tipo multisistémico asociadas a la hemoglobina S. Los pacientes que padecen este síndrome tienen un mayor riesgo, en comparación con individuos sanos, de presentar accidentes cerebrovasculares, hipertensión pulmonar, necrosis avascular de articulaciones, síndrome torácico agudo y complicaciones durante el embarazo, asociados a un estado de hipercoagulabilidad inducido por alteraciones en los diferentes componentes de la hemostasia, que incluyen la activación del endotelio y de los sistemas plaquetario, de la coagulación y de la fibrinólisis. Esta revisión resume las alteraciones en la hemostasia reportadas en los pacientes con SD, en los cuales se ha demostrado: mayor interacción de células endoteliales con leucocitos, hematíes y plaquetas; aumento de la expresión de proteínas de adhesión, como el factor von Willebrand y sus multímeros de alto peso molecular; aumento de la adhesión y la agregación plaquetaria y de la expresión de proteínas en sus membranas. En el sistema de coagulación se ha detectado aumento en la expresión del factor tisular (FT) en micropartículas derivadas de diferentes células, aumento de marcadores de activación de este sistema, entre estos los fragmentos 1.2 de la protrombina y los complejos trombina-antitrombina y una disminución de las proteínas C y S que actúan como anti-coagulantes. Adicionalmente, se han encontrado aumentados los marcadores de activación del sistema fibrinolítico como los dímeros D y los complejos plasmina/antiplasmina. Todas estas manifestaciones favorecen la aparición de complicaciones trombóticas, implicadas en el deterioro de la calidad de vida de los pacientes. Se recomienda implementar en el diagnóstico y seguimiento de esta enfermedad, la determinación de variables del sistema hemostático, con el fin de identificar alteraciones en etapas tempranas y aplicar terapias que puedan prevenir complicaciones trombóticas.

Sickle cell syndrome (SCS) includes a group of congenital hemolytic anemias associated to the presence of hemoglobin S, which is characterized by acute pain episodes and progressive damage of different organs. Some patients with sickle cell syndrome have shown, when compared with healthy individuals, an increased risk of presenting stroke, pulmonary hypertension, avascular necrosis of joints, acute chest syndrome and pregnancy complications, associated to a hypercoagulable state induced by alterations in different components of hemostasis, such as changes that include activation of the endothelium, platelet activity, coagulation and fibrinolytic systems. This paper compiles hemostasis disorders, associated with thrombotic manifestations, reported until now in sickle cell syndrom. These patients have an increase in activation markers of the coagulation system, such as prothrombin fragment 1.2, thrombin-antithrombin complex, etc., depletion of natural anticoagulant proteins, abnormal activation of the fibrinolytic system and increased tissue factor expression. Similarly, abnormal expression of glycoproteins and increased adhesion and platelet aggregation have been reported. All these alterations produce a hypercoagulable state, which induces, among other things, the appearance of thrombotic complications. In view of the importance of controlling the different complications that can occur in patients with sickle cell syndrome, we recommend the implementation, in diagnosis and monitoring studies, of the evaluation of the different components of the hemostatic system, identifying alterations at an early stage and applying effective treatments to prevent thrombotic complications.

Expressão gênica do colágeno em ferida cutânea de equinos tratada com plasma rico em plaquetas / Collagen gene expression in skin wound of horses treated with platelet-rich plasma

[...]The objective of this study was to evaluate type I and III collagen gene expression during different phases of the healing process of PRP-treated skin. Eight healthy crossbred geldings, aged 16 and 17 years (16.37±0.52) were used. Three quadrangular-shaped lesions (6.25cm²) were surgically induced in the right and left gluteal regions of all the animals. Twelve hours after induction of the lesions, 0.5mL of PRP was administered in each of the four edges of the wounds (T=treated group) in one of the gluteal regions, randomly chosen. The contralateral region was used as control (NT=non-treated group). The wounds were submitted to daily cleaning with Milli-Q water, and the samples were obtained with a 6mm diameter biopsy Punch. Six skin biopsies were obtained, with the first being performed on the day the lesions were induced (T0), and the others 1 (T1), 2 (T2), 7 (T3), and 14 (T4) days, after the wound was induced. The sixth biopsy (T5) was performed after fully healed of the skin. Evaluation of type I and III collagen gene expression was carried out by the qRT-PCR technique. The data were analyzed by the Bonferroni test, Student t-test, paired t-test, and regression analysis (p<0,05). Difference (p<0.05) between groups were observed for both collagen gene expressions from T1 to T4, being higher in the animals of group T. The peak for type I and III collagen gene expressions occurred in T5 for both groups, but the highest expression was different (p<0.05) from zero time, starting in T3. In the animals of treated group, collagen expression started to establish at T5, while in the horses of NT group, the values remained increased. Local administration of a single PRP dose in cutaneous wound of the gluteal region of horses results in a higher local gene expression of type I and III collagens. However, this expression does not alter the maximum time of macroscopic healing of the wound.

[...] Objetivou-se avaliar a expressão dos genes dos colágenos tipos I e III durante diferentes fases do processo de cicatrização da pele tratada com PRP. Foram utilizados oito equinos machos castrados, mestiços, hígidos, com idade entre 16 e 17 (16,37±0,52) anos. Três feridas em formato quadrangular (6,25cm²) foram confeccionadas nas regiões glúteas direita e esquerda de todos os animais. Doze horas após indução das lesões, 0,5mL do PRP foi administrado em cada uma das quatro extremidades das feridas (T=grupo tratado), de uma das regiões glúteas, escolhida aleatoriamente. A região contralateral foi utilizada como controle (NT=grupo não tratado). As feridas foram submetidas à limpeza diária com água Milli Q, e amostras foram obtidas com biópsias utilizando-se Punch de 6mm de diâmetro. Seis biópsias de pele foram obtidas a primeira no dia de indução das lesões (T0), e as demais com 1 (T1) 2 (T2) 7 (T3) e 14 (T4) dias após a realização das feridas. A sexta biópsia (T5) foi realizada após o completo fechamento da pele. A avaliação da expressão dos genes dos colágenos tipos I e III foi realizada pela técnica qRT-PCR e os dados analisados pelo teste de Bonferroni, t de Student, t pareado e análise de regressão (p<0,05). Diferenças (p<0,05), entre grupos, foram observadas para a expressão de ambos os colágenos nos T1 a T4, sendo maior nos animais do grupo T. O pico de expressão dos colágenos tipos I e III ocorreu no T5 para ambos os grupos, mas a maior expressão foi diferente (p<0,05) do tempo zero a partir do T3. Nos animais do grupo tratado a expressão dos colágenos começou a estabilizar no T5, enquanto que nos equinos do NT os valores permaneceram elevados. A administração local de uma única dose do PRP em ferida cutânea na região glútea de equinos, resulta em maior expressão gênica local dos colágenos tipos I e III. Entretanto, essa expressão não altera o tempo máximo de fechamento macroscópico da ferida.

Avaliação da relação entre produção plaquetária e expressão de proteínas do sistema apoptótico plaquetário em diferentes graus de plaquetopenia da Trombocitopenia Imune (PTI) / Assessment of ratio between platelet production and apoptosis in Immune Thrombocytopenia (ITP) at different degrees of thrombocytopenia

A Trombocitopenia imune (PTI) é uma doença imuno mediada adquirida de adultos e crianças caracterizada por plaquetopenia transitória ou persistente, onde o grau de plaquetopenia aumenta o risco de sangramento. Geralmente, os pacientes apresentam manifestações clínicas apenas em plaquetopenias abaixo de 50x103/mm3, e contagem de plaquetas entre 100 e 150 x103/mm3, se estável por mais de 6 meses, necessariamente não indica uma condição patológica. Tem sido sugerido diferentes processos fisiopatológicos relacionados às plaquetas de acordo com a intensidade da plaquetopenia, e que alterações na megacariocitopoiese e diminuição da sobrevida plaquetária são eventos determinantes na PTI. Contagem de plaquetas reticuladas em citometria de fluxo é um teste muito útil para avaliação da plaquetopenia, pois reflete a atividade megacariocitopoiética, destruição das plaquetas e a própria contagem de plaquetas. Tanto as plaquetas quanto os megacariócitos apresentam a via intrínseca da apoptose. A atividade dos principais mediadores da apoptose intrínseca, como Bax a Bak, é regulada por proteínas anti-apoptótica da família Bcl-2, tais como Bcl-xL. Um balanço entre Bcl-xL e Bax regula a sobrevivência plaquetária. Pacientes de PTI apresentam aumento da ativação plaquetária e da formação de micropartículas derivadas de plaquetas (MPP). Nosso objetivo foi avaliar a relação entre produção e apoptose plaquetária, e associá-la com a ativação plaquetária e a formação de MPP nos diferentes graus de intensidade da PTI. Os pacientes recrutados foram diagnosticados para trombocitopenia imune (PTI) primária, "idiopática", não esplenectomizados, acompanhados regularmente no ambulatório de Doenças Hemorrágicas e Trombóticas, do Serviço de Hematologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, e foram divididos grupos de acordo com contagem de plaquetas: < 50x103/mm3 (n=7); entre 50-100x103/mm3 (n=7); > 100x103/mm3 (n=7). Como grupo...

Immune thrombocytopenic (ITP) is an immune-mediated acquired disease of adults and children characterized by transient or persistent decrease of the platelet count and, depending upon the degree of thrombocytopenia, increased risk of bleeding. ITP usually presents with clinical manifestations only in platelet counts below 50x103/mm3, and counts between 100 and 150x103/mm3 if they have been stable for more than 6 months do not necessarily indicate a pathologic condition. It has been suggested the existence of different pathophysiological processes involving platelets according to the severity of thrombocytopenia, and that alterations in the megakaryopoiesis and reduced platelet lifespan play a key role in ITP. The flow cytometric analysis of reticulated platelets is useful for evaluating thrombocytopenia that reflect the activity megakaryopoiesis, platelets destruction, plataelet count, and age. Platelets and megakaryocytes contain intrinsic pathway of apoptosis. The activity of key mediators of intrinsic apoptosis, Bak and Bax, is tightly controlled by anti-apoptotic Bcl-2 family members, of which Bcl-xL, wich have been shown to coordinately regulate platelet survival. ITP patients have a larger amount of activated platelets that express P-selectin as well as an increase of platelets-derived microparticles (PMP). We suggest a relationship between platelet production and Bcl-xL and Bax expression in ITP patients from different degrees of thrombocytopenia, that has relate with platelet activation and PMP. Our aim was assessment of ratio between platelets production and apoptosis, and it associate with platelets activation and PMP in differents thrombocytopenia degree in ITP. Patients were considered eligible for the study if they were on regular follow-up at the clinic of haemorrhagic and thrombotic diseases of the Hematology Service of Clinics Hospital of University of São Paulo Medicine School diagnosed with primary immune thrombocytopenia, "idiopathic"....

Mecanismos de ativação plaquetária na dengue: contribuições para a patogênese / Mechanisms for platelet activation in dengue: contributions to the pathogenesis

A dengue é a arbovirose humana mais prevalente no mundo. A infecção pelo vírus da dengue (DENV) tem um vasto espectro de sintomas, causando desde febre auto-limitada até casos graves com sangramento e choque podendo evoluir para o óbito. Apesar de plaquetopenia ser frequentemente observada em pacientes com dengue, a participação das plaquetas na patogênese da dengue permanece pouco explorada. Nós inicialmente investigamos a ativação plaquetária em pacientes com dengue ou em plaquetas expostas ao DENV in vitro. Na tentativa de associar a ativação plaquetária com mecanismos imunopatogênicos da dengue, a secreção de citocinas e quimiocinas em plaquetas estimuladas com o DENV e a síntese de IL-1beta em plaquetas de pacientes com dengue foram investigadas. Os mecanismos envolvidos no processamento e secreção da IL-1beta, bem como suas contribuições para a permeabilidade endotelial também foram objetos de estudo. A formação de agregados plaqueta-monócito e a expressão de marcadores de ativação de monócitos também foram avaliados em pacientes com dengue. Finalmente, nós investigamos o impacto da apoptose de plaquetas na dengue e sua relação com o desfecho de plaquetopenia. Nossos resultados indicam intensa ativação plaquetária em pacientes com dengue, especialmente em pacientes com dengue grave. Nós observamos uma expressão elevada de IL-1beta em plaquetas e micropartículas (MP) derivadas de plaquetas de pacientes com dengue, ou após a exposição de plaquetas ao DENV in vitro...

Dengue is the most frequent hemorrhagic viral disease and re-emergent infection in theworld. Dengue infection has a large spectrum of clinical manifestations from self-limitedfebrile illness to severe syndromes accompanied by bleeding and shock. Althoughthrombocytopenia is characteristically observed in mild and severe forms of dengue, therole of platelet activation in dengue pathogenesis has not been fully elucidated. Wehypothesize that platelet activation have major roles in inflammatory amplification andincreased vascular permeability during severe forms of dengue. Here we investigate plateletactivation in patients with dengue or in platelets exposed to DENV in vitro. The secretionof cytokines and chemokines in DENV-stimulated platelets and the synthesis of IL-1 beta inplatelets from patients with dengue were investigated. The mechanisms involved inprocessing and secretion of IL-1beta, as well as potential contribution of these events toendothelial permeability during infection were also evaluated. Platelet-monocyteaggregates formation and markers of monocyte activation were evaluated in patients withdengue. Finally, we investigated the impact of platelet apoptosis in dengue-associatedthrombocytopenia. Our results show increased platelet activation in patients with dengue,especially patients with severe dengue...

Clinical implications of elevated serum soluble CD137 levels in patients with acute coronary syndrome

OBJECTIVES: Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease. Research has focused on identifying specific serum biomarkers to detect vulnerable plaques. These markers serve as diagnostic tools for acute coronary syndrome and assist in identifying high-risk patients. However, the existing data are limited and conflicting. This study tested the hypothesis that CD137 levels identify patients with acute coronary syndrome who are at a heightened risk for recurrent cardiac events. METHODS: The levels of soluble CD137 (sCD137) were measured using ELISA in 180 patients with acute coronary syndrome and 120 patients with acute chest pain. Platelet activation was assessed by flow cytometry. Receiver operating characteristic curve analysis was performed to evaluate the prognostic characteristics of sCD137. RESULTS: The levels of sCD137 were elevated in 75 patients with acute coronary syndromes and 20 patients with acute chest pain (>35.0 ng/ml). In patients with acute coronary syndrome, elevated sCD137 levels (>35.0 ng/ml) indicated an increased risk for major adverse cardiovascular events (OR =1.93, 95% CI: 1.39-2.54). Elevated serum levels of sCD137 and cTnT were correlated with a significantly increased risk of major adverse cardiovascular events in both groups after 30 days, six months and nine months of follow-up. The increased sCD137 levels were significantly correlated with the levels of troponin I (r = 0.4799, p<0.001). Importantly, 26 patients with normal cTnI levels had acute coronary syndrome. However, elevated sCD137 levels identified these patients as a being high-risk subgroup (OR = 2.14, 95% CI: 1.25-4.13). CONCLUSIONS: Elevated sCD137 levels indicate an increased risk of cardiovascular events in patients with acute coronary syndrome. Soluble CD137 may be a useful prognostic marker or indicator for adverse events in patients with acute coronary syndrome.

Avaliação da função plaquetária na infecção pelo HIV-1 / Platelet activation and cell death pathways in platelets isolated from HIV/AIDS patients

A terapia antirretroviral de alta potência (TARV) aumentou significativamente a sobrevida e a qualidade de vida dos pacientes portadores de HIV/AIDS, levando, por conseguinte, à cronificação da doença. Neste novo cenário epidemiológico, cresce a importância de complicações cardiovasculares como o infarto agudo do miocárdio e a trombose venosa profunda. A plaqueta tem papel central na gênese destas complicações e seu papel na infecção pelo HIV-1 começa a ser explorado na literatura. No presente trabalho objetivamos avaliar a função plaquetária durante a infecção pelo HIV-1, especificamente o grau de ativação, disfunção mitocondrial, morte celular, produção de óxido nítrico e resposta a estímulos agonistas. Para tal, avaliamos 30 voluntários saudáveis e 26 pacientes infectados pelo HIV- 1 em acompanhamento no Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC) da Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ) de Janeiro de 2012 a Janeiro de 2013. Dentre os pacientes infectados avaliados, 17 apresentavam uso regular de TARV e tinham a carga viral para HIV-1 no sangue periférico indetectável (< 50 cópias/mm3 ) e 9 apresentavam carga viral para HIV-1 no sangue periférico detectável (> 50 cópias/mm3 ). Observamos que a plaqueta dos dois grupos de pacientes portadores de HIV/AIDS analisados exibe um aumento no perfil de ativação (expressão de P-selectina e exposição de fosfatidilserina), aumento na produção de óxido nítrico e menor indução da expressão de P-selectina após estímulo com trombina, quando comparada à resposta da plaqueta de indivíduos controles. Além disso, observamos sinais claros de ativação da via intrínseca de apoptose (diminuição do potencial de membrana mitocondrial, aumento na produção de superóxido mitocondrial, exposição de fosfatidilserina e ativação de caspase 9) mesmo com o controle da replicação viral, atingido com o uso regular de TARV...

The advent of highly active antiretroviral therapy (HAART) has increased life expectancy and the quality of life of patients living with HIV/AIDS. Now, new clinical data emphasizes long term complications of HIV-1 infection, such as cardiovascular diseases. Blood human platelets have a pivotal role in thrombus formation and their physiology during the course of HIV-1 infection has recently begun to be explored. The aim of the present study is to build up this literature by characterizing platelet activation, mitochondrial dysfunction, apoptosis and response to agonist stimulus in HIV/AIDS patients and control subjects. From January of 2012 to January of 2013 we included 30 healthy volunteers and 33 HIV-1 infected subjects from the outpatient clinic of Evandro Chagas Clinical Research Institute (IPEC), Oswaldo Cruz Foundation (FIOCRUZ). Among the HIV-1 population, 18 patients were under HAART therapy and had achieved virological suppression (viral load in peripheral blood < 50 copies/mm3 ) and 9 patients had uncontrolled viral replication (viral load in peripheral blood > 50 copies /mm3 ). We noted that HIV-1 infected individuals exhibit increased platelet activation (P-selectin expression and fosfatidilserine exposition), enhanced nitric oxide (NO) production and abnormal response to agonistic stimulus (thrombin). Moreover, we noted marked sigs of intrinsic apoptotic pathway activation (decreased transmembrane mitochondrial potential, increased superoxide production, fosfatidilserine exposure and caspase 9 activation) in patients under virological suppression achieved through HAART...