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Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B / Real-time polymerase chain reaction assay for Hepatitis B virus DNA quantification
Rodríguez Lay, Licel de los Ángeles; Montalvo Villalba, María Caridad; Sariego Frómeta, Susel; Bello Corredor, Marité; Mora Laguna, Elin; Kourí Cardellá, Vivian; Martínez Rodríguez, Pedro Ariel; Sánchez Wong, Meilin; Marrero, Bárbara.
Affiliation
  • Rodríguez Lay, Licel de los Ángeles; Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. La Habana. CU
  • Montalvo Villalba, María Caridad; Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. La Habana. CU
  • Sariego Frómeta, Susel; Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. La Habana. CU
  • Bello Corredor, Marité; Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. La Habana. CU
  • Mora Laguna, Elin; Centro Provincial de Higiene, Epidemiología y Microbiología. La Habana. CU
  • Kourí Cardellá, Vivian; Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. La Habana. CU
  • Martínez Rodríguez, Pedro Ariel; Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. La Habana. CU
  • Sánchez Wong, Meilin; Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. La Habana. CU
  • Marrero, Bárbara; Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. La Habana. CU
Rev. cuba. med. trop ; 64(3): 290-303, jul.-sep. 2012.
Article in Spanish | LILACS | ID: lil-653847
Responsible library: CU1.1
RESUMEN

Introducción:

los niveles de ADN viral en muestras de suero son un marcador útil para monitorear la progresión de la enfermedad y la respuesta al tratamiento en pacientes con hepatitis B crónica; de ahí que se comercialicen estuches diagnósticos para esta función, con la desventaja de ser costosos.

Objetivos:

desarrollar y evaluar el desempeño analítico de un sistema de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B.

Métodos:

se utilizaron cebadores que amplifican un fragmento del gen C y sonda de hidrólisis en el equipo LightCycler 1.5. Se construyó una curva estándar y se evaluó su eficiencia. Se utilizaron 272 muestras de suero para ensayos de especificidad analítica y clínica, especificidad y exactitud genotípica, coeficientes de variación intraensayo e interensayo, comparación con un estuche comercial y con la reacción en cadena de la polimerasa cualitativa para el virus de la hepatitis B.

Resultados:

la curva estándar mostró excelente correlación lineal (r= -1) y valores muy bajos de error a lo largo de varias magnitudes de concentración de ADN diana. La especificidad analítica y clínica fue de 100 %, en tanto que al evaluar la especificidad y exactitud genotípica, se obtuvo que las diferencias entre los Log10 del valor obtenido y el de referencia eran inferiores a 0,5 Log10. El límite de detección por análisis de Probit se estimó en 16,41 UI/µL con un rango dinámico de cuantificación de hasta 10(8) UI/mL. El sistema mostró bajos coeficientes de variación intraensayo (0,16 a 1,45 %) e interensayo (0,9 a 2,62 %). La comparación con el estuche comercial artus HBV LC PCR kit mostró una correlación de r= 0,964 y r²= 0,929; con la reacción en cadena de la polimerasa cualitativa se confirmó la mayor sensibilidad y ventajas de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real.

Conclusiones:

el ensayo cumple con los requisitos para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B, que demuestra ser específico, sensible y reproducible. Su aplicación permitirá un mejor diagnóstico y seguimiento de los pacientes con hepatitis B crónica en Cuba.
ABSTRACT

Introduction:

viral DNA levels in serum samples are a useful marker to monitor the disease progression and the treatment response in patients with chronic hepatitis B. Commercial kits for this purpose are available, but they are considerably expensive.

Objectives:

to evaluate the analytical performance of a real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) assay for Hepatitis B virus DNA quantification.

Methods:

specific primers to the gene C and TaqMan chemistry in a LightCycler 1.5 equipment was used. A standard curve was made and evaluated. Two hundred and seventy-two serum samples were used to assess the clinical and analytical specificity, the genotypic accuracy and specificity, the intra-assay and interassay coefficients of variation and the comparison with a commercial assay and with the qualitative PCR.

Results:

the standard curve showed a strong linear correlation (r= -1) and low error values in the tested target DNA concentration. Analytical and clinical specificities were 100 %. Genotype accuracy and specificity showed that the differences between the results obtained by RT-PCR assay and those of the reference assay were less than 0.5 Log10. The 95% HBV DNA detection end-point assessed by Probit analysis was 16.41 IU/µL with a dynamic range of quantification of 10(8) IU/mL. Intra-assay and interassay coefficients of variation ranged from 0.16 to 1.45 % and 0.9 to 2.62 % respectively. The RT-PCR assay correlated well with those from a commercial assay (r= 0.964 and r²= 0.929) and with the HBV qualitative PCR, thus confirming its better sensitivity and advantages.

Conclusions:

the RT-PCR assay is well suited to monitoring HBV DNA levels showing to be sensitive, specific and reproducible. Its application in the clinical practice ensures a better diagnosis and management of patients with chronic hepatitis B in Cuba.
Subject(s)

Full text: Available Collection: International databases Health context: SDG3 - Health and Well-Being Health problem: Target 3.3: End transmission of communicable diseases Database: LILACS Main subject: DNA, Viral / Hepatitis B virus / Real-Time Polymerase Chain Reaction Type of study: Qualitative research Limits: Humans Language: Spanish Journal: Rev. cuba. med. trop Journal subject: Tropical Medicine Year: 2012 Document type: Article Affiliation country: Cuba Institution/Affiliation country: Centro Provincial de Higiene, Epidemiología y Microbiología/CU / Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí/CU
Full text: Available Collection: International databases Health context: SDG3 - Health and Well-Being Health problem: Target 3.3: End transmission of communicable diseases Database: LILACS Main subject: DNA, Viral / Hepatitis B virus / Real-Time Polymerase Chain Reaction Type of study: Qualitative research Limits: Humans Language: Spanish Journal: Rev. cuba. med. trop Journal subject: Tropical Medicine Year: 2012 Document type: Article Affiliation country: Cuba Institution/Affiliation country: Centro Provincial de Higiene, Epidemiología y Microbiología/CU / Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí/CU
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