Reposicionamento de fármacos e estudo de novas combinações terapêuticas no tratamento etiológico da doença de Chagas / Repositioning of drugs and study of new therapeutic combinations in the etiological treatment of Chagas disease

RESUMO

Dentre as doenças parasitárias tropicais, as causadas por protozoários se apresentam como um grande desafio para a saúde pública. Conhecida também como tripanossomíase americana, a doença de Chagas é encontrada principalmente em áreas endêmicas de 21 países da América Latina, com cerca de 8-10 milhões de pessoas infectadas. A quimioterapia utiliza medicamentos de elevada toxicidade, e no Brasil, restringe-se a um único fármaco, o benznidazol. Na busca por terapias alternativas, o reposicionamento de fármacos representa uma forma promissora para introdução de novos medicamentos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o potencial terapêutico contra T. cruzi de fármacos aprovados clinicamente, utilizando modelos in vitro e experimentais. Dentre os 54 fármacos testados, 17 apresentaram atividade contra formas tripomastigotas, com CE50 variando entre 1,8 a 81 µM, destacando-se a sertralina como o mais efetivo e o cloxazolam como o menos efetivo. Dentre 6 fármacos escolhidos, 5 demonstraram atividade contra os amastigotas intracelulares, com CE50 entre 1,4 a 32 µM, destacando-se a sertralina como o mais efetivo e o saquinavir como o menos efetivo. Realizou-se ainda um estudo de citotoxicidade, e o índice de seletividade dos fármacos variou entre 1,2 a 17. Por meio da construção de isobologramas, realizou-se um estudo in vitro de associação terapêutica contra formas tripomastigotas entre a nitazoxanida e a sertralina, resultando em uma combinação indiferente. A efetividade in vivo da sertralina e da nitazoxanida foi verificada em modelo de camundongos Swiss; apenas a nitazoxanida reduziu em 29% a parasitemia após 5 dias consecutivos de tratamento a 50 mg/kg. Finalmente, um estudo comparativo foi desenvolvido entre a técnica de qPCR e o método de Brener por contagem em microscopia óptica. Foi observada similaridade entre ambas as técnicas para avaliação da parasitemia no modelo murino...

ABSTRACT

Among tropical parasitic diseases, those caused by protozoans represent as a major challenge to public health. Also known as American trypanosomiasis, Chagas´s disease is found mainly in endemic areas of 21 countries of Latin America, with approximately 8-10 million people infected. The chemotherapy is based in highly toxic drugs with high toxicity and, in Brazil, it is restricted to a single drug, the benznidazole. In the search for alternative therapies, the repositioning of drugs represents a promising approch for the introduction of new medicines. This study aimed the evaluation of the therapeutic potential against T. cruzi of clinically approved drugs using in vitro and experimental models. Among the 54 tested drugs, 17 showed activity against trypomastigotes, with EC50 ranging from 1.8 to 81 µM; sertraline was the most effective drug and cloxazolam the least effective. Among 6 chosen drugs, 5 demonstrated activity against intracellular amastigotes with EC50 between 1.4 to 32 µM; sertraline as the most effective and saquinavir the least one. The mammalian cytotoxicity was also evaluated and selectivity index of drugs ranged from 1.2 to 17 µM. Through the construction of isobolograms, an in vitro study of combined therapy against trypomastigotes was performed with nitazoxanide and sertraline, resulting in an indifferent combination. The in vivo efficacy of nitazoxanide and sertraline was observed in Swiss mice model; nitazoxanide reduced by 29% the parasitemia after 5 consecutive days of treatment at 50 mg/kg. Finally, a comparative study was conducted between the qPCR technique and the method of Brener by light microscopy counting. A similar result was found for both techniques when evaluating the animals parasitemia in the murine model. The repositioning of approved drugs and their therapeutic associations could contribute to more effective and less toxic treatments for neglected diseases as Chagas disease...