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Purificación del fibrinógeno gamma A/gamma prima (үA/ү') por cromatografía líquida rápida de proteínas / Purification of fibrinogen gamma A/gamma prima (үA/ү') by fast protein liquid chromatography / Purificação do fibrinogênio gamma A/gamma prima (үA/ү') por cromatografía liquida rápida de proteínas
Cantero Guevara, Miriam Elena; Cardinali, Bárbara; Marchi, Rita.
Afiliación
  • Cantero Guevara, Miriam Elena; Universidad de Córdoba. Montería. CO
  • Cardinali, Bárbara; Hospital Policlinico San Martino. Genova. IT
  • Marchi, Rita; Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas. Caracas. VE
Rev. colomb. quím. (Bogotá) ; 47(3): 24-30, sep.-dic. 2018. tab, graf
Artículo en Español | LILACS | ID: biblio-978334
Biblioteca responsable: CO332
RESUMEN
Resumen Una fracción del fibrinógeno circulante contiene una variante de la cadena ү que se origina por empalme alternativo del ARNm, denominada ү' cuya concentración en plasma se ha relacionado con un incremento en el riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares. Por tanto, el objetivo de este trabajo fue diseñar un método de purificación del fibrinógeno үA/ү' más eficiente en relación a los descritos en la literatura, a partir de plasma humano. Se purificó el fibrinógeno үA/ү' a partir del fibrinógeno total obtenido por precipitación con β-alanina, mediante la separación por cromatografía líquida rápida de proteínas. Se confirmó la presencia de fibrinógeno үA/ү' mediante Western blot; su concentración fue determinada por ELISA. El método mostró ventajas en comparación con los métodos clásicos de separación, por ejemplo, que cantidades menores de muestra pudieron ser fraccionadas cuantitativamente en componentes puros en menor tiempo (30 min). Por tanto, se puede concluir que la técnica utilizada para la purificación de las variantes del fibrinógeno, correspondiente al Fg үA/үA y Fg үA/ү', es un método de separación eficiente que permite purificar el Fg үA/ү' libre de contaminantes principales, como lo confirma la inmunoelectroforesis.
ABSTRACT
Abstract A fraction of the circulating fibrinogen contains a variant of the y chain that is originated by mRNA alternative splicing denominated ү' whose concentration in plasma has been related to an increase in the risk of cardiovascular diseases. Thus, the objective of this work was to design a more efficient үA/ү' fibrinogen purification method in relation to those described in the literature from human plasma. The үA/ү' fibrinogen was purified from the total fibrinogen obtained by precipitation with β-alanine, using separation by fast protein liquid chromatography. Fibrinogen үA/ү', was confirmed by Western blot and its concentration was determined by ELISA. The method showed advantages compared to classical separation methods, for example, smaller amounts of sample could be fractionated quantitatively into pure components in less time (30 min). Therefore, it can be concluded that the technique used for the purification of fibrinogen variants, corresponding to Fg үA/үA and Fg үA/ү', is an efficient separation method that allows purifying the Fg үA/ү' free of main contaminants, as confirmed by immunoelectrophoresis.
RESUMO
Resumo Uma fracção do fibrinogênio circulante contém uma variante da cadeia y que origina-se por junção alternativa do ARNm, chamada ү' cuja concentração em plasma está asociada com um incremento no resgo de sofrer doenças cardiovasculares. Asim, o objetivo em este trabalho foi desenhar um método de purificação do fibrinogênio үA/ү' mais eficiente em relação aos que estão descritos na literatura, a partir do plasma humano. Purificou-se o fibrinogênio үA/ү' a partir do fibrinogênio total conseguido pela precipitação com β-alanina, através da separação por cromatografia líquida rápida de proteínas. Se confirmou por Western blot o fibrinogênio үA/ү'. A sua concentração foi determinada por ELISA. O método apresenta vantagens em comparação com os métodos clássicos de separação, por exemplo, quantidades menores de mostra podem ser fraccionadas quantitativamente em componentes puros, em tempos mais curtos (30 min). Entao, pode-se concluir que a técnica utilizada, para a purificação das variantes do fibrinogênio correspondente ao Fg үA/үA e Fg үA/ү', é um método de separação eficiente que permite purificar o Fg үA/ү' livre de contaminantes principais, como o confirma a imunoeletroforese.


Texto completo: Disponible Colección: Bases de datos internacionales Base de datos: LILACS Idioma: Español Revista: Rev. colomb. quím. (Bogotá) Asunto de la revista: Química Año: 2018 Tipo del documento: Artículo País de afiliación: Colombia / Italia / Venezuela Institución/País de afiliación: Hospital Policlinico San Martino/IT / Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas/VE / Universidad de Córdoba/CO

Texto completo: Disponible Colección: Bases de datos internacionales Base de datos: LILACS Idioma: Español Revista: Rev. colomb. quím. (Bogotá) Asunto de la revista: Química Año: 2018 Tipo del documento: Artículo País de afiliación: Colombia / Italia / Venezuela Institución/País de afiliación: Hospital Policlinico San Martino/IT / Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas/VE / Universidad de Córdoba/CO
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