Primer estudio piloto en España sobre el cribado neonatal de las inmunodeficiencias primarias: TRECS y KRECS identifican linfopenias T y B graves / A first pilot study on the neonatal screening of primary immunodeficiencies in Spain: TRECS and KRECS identify severe T- and B-cell lymphopenia

RESUMEN

INTRODUCCIÓN: El diagnóstico precoz de inmunodeficiencias primarias, como la inmunodeficiencia combinada grave (IDCG) y la agammaglobulinemia ligada al cromosoma X (ALX), mejora el pronóstico de los ni˜nos afectados. La medida de los T-cell receptor excision circles (TRECS) y kappa-deleting recombination excision circles (KRECS) puede identificar neonatos con linfopenias T y/o B graves. OBJETIVO: Cuantificar los niveles de TRECS y de KRECS de manera prospectiva a partir de muestras de sangre seca de talón para identificar de manera correcta linfopenias T y/o B. MATERIALES Y MÉTODOS: Determinación de TRECS y de KRECS mediante reacción en cadena de polimerasa multiplex en neonatos nacidos entre febrero y mayo del 2014. Los puntos de corte empleados fueron TRECS < 15 copias/_l, KRECS < 10 copias/_l, ACTB (_-actina) > 1.000 copias/_l. Se incluyeron controles internos (ALX, ataxia) y externos (IDCG). RESULTADOS: Fueron analizadas 1.068 muestras de las 1.088 recogidas (edad gestacional media 39 semanas [38-40]; peso al nacer medio 3.238 g [2.930-3.520]). La media (mediana, min/máx) copias/_l obtenidas fueron las siguientes; TRECS 145 (132, 8/503), KRECS 82 (71, 7/381) y ACTB 2838 (2763, 284/7710). Veinte muestras (1,87%) fueron insuficientes para el análisis. El retest fue necesario en un neonato (0,09%), confirmándose resultados normales posteriormente. Empleando puntos de corte inferiores (TREC < 8 y KREC < 4 copias/_l), todas las muestras resultaron normales y se identificaron los controles internos y externos correctamente. CONCLUSIÓN: Es el primer estudio prospectivo realizado en Espa˜na usando el ensayo TREC/KREC/ACTB para identificar linfopenias graves. Es necesario establecer puntos de corte adecuados para nuestra población, mejorar la toma de muestras, su almacenamiento y la preparación de las mismas

ABSTRACT

INTRODUCTION: Early diagnosis of primary immunodeficiency such as severe combined immunodeficiency (SCID) and X-linked agammaglobulinemia (XLA) improves outcome of affected infants/children. The measurement of T-cell receptor excision circles (TRECS) and kappadeleting recombination excision circles (KRECS) can identify neonates with severe T or B-cell lymphopenia. OBJECTIVES: To determine TRECS and KRECS levels from prospectively collected dried blood spot samples (DBS) and to correctly identify severe T and B-cell lymphopenia. MATERIAL AND METHODS: Determination of TRECS and KRECS by multiplex PCR from neonates born in two tertiary hospitals in Seville between February 2014 and May 2014. PCR cut-off levels TRECS<15 copies/_l, KRECS<10copies/_l, ACTB (_-actin)>1000 copies/_l. Internal (XLA, ataxia telangiectasia) and external (SCID) controls were included. RESULTS: A total of 1068 out of 1088 neonates (mean GA 39 weeks (38-40) and BW 3238 g (2930-3520) were enrolled in the study. Mean (median, min/max) copies/_l, were as follows TRECS 145 (132, 8/503), KRECS 82 (71, 7/381), and ACTB 2838 (2763, 284/7710). Twenty samples (1.87%) were insufficient. Resampling was needed in one neonate (0.09%), subsequently giving a normal result. When using lower cut-offs (TRECS<8 and KRECS<4 copies/_l), all the samples tested were normal and the internal and external controls were correctly identified. CONCLUSION: This is the first prospective pilot study in Spain using TRECS/KRECS/ACTB-assay, describing the experience and applicability of this method to identify severe lymphopenias. The ideal cut-off remains to be established in our population. Quality of sampling, storage and preparation need to be further improved