Análise imuno-histoquímica das proteínas RANK, RANKL e OPG em dentes de ratos reimplantados / Immunohistochemical analysis of the RANK protein, RANKL and OPG teeth reimplanted in rats

RESUMO

O sistema RANK/RANKL/OPG contribui para a compreensão do processo e regulação da formação e reabsorção do osso, tendo sido o maior avanço na biologia óssea com relação a osteoclastogênese. RANKL e OPG inibem RANK regulando a formação, ativação e sobrevivência de osteoclastos na remodelação óssea. O objetivo desse estudo foi investigar a expressão dos marcadores RANKL/RANK/OPG em dentes de ratos reimplantados, bem como observar a relação entre a expressão desses marcadores com o processo de reabsorção dentária e óssea. Foram utilizados 30 incisivos superiores direitos de 30 ratos machos, adultos, da linhagem Wistar (Rattus norvegicus albinus). Os dentes foram avulsionados e divididos em dois grupos que permaneceram extra-alveolar em ar seco G1 (n=15) - 5 minutos e G2 (n=15) - 60 minutos, e em seguida foram reimplantados e analisados nos intervalos de 1, 3 e 7 dias. Finalizado os períodos experimentais, ocorreu a eutanásia dos animais. Cortes longitudinais com 5μm de espessura foram obtidos e corados pela técnica H/E para a análise histológica e cortes com 3μm de espessura foram submetidos à reação imuno-histoquímica mediante a utilização de anticorpos primários para ratos como OPG, RANK e RANKL. Os resultados demonstraram que o sistema RANK/RANKL/OPG participa ativamente, tanto do processo de reparo de dentes de ratos reimplantados, quanto das reabsorções dentárias e ósseas; que RANKL apresentou maior imunomarcação em ambos os grupos, participando em todas as fases da reabsorção óssea e dentária; e o aumento da expressão de RANKL foi observada em ambos os grupos em todos os intervalos de tempo, comprovando que a resposta inflamatória no ligamento periodontal ocorre no início do processo de reparo; e que a fraca expressão de RANK e OPG e o aumento da expressão de RANKL sugere uma diminuição da reabsorção ativa e aumento da reabsorção reparada no osso e no cemento, sendo maior no osso.

ABSTRACT

The RANK / RANKL / OPG sy stem plays an important role in bone formation and resorption . This finding has been regarded as one of the m ost important advances in the understanding of bone biology with respect to osteoclastogenesis. The aim of this study was to investigate the expression of RANKL / RANK / OPG markers in reimplanted teeth of rats, and to observe the relationship between the expression of these markers and tooth and bone resorption. Thirty male Wistar rats (Rattus norvegicus albinos) had their maxillary right incisors extrac ted, and were divided into 2 groups acted teeth were kept y air before reimplantation G1 (n = 15) - 5 minutes, and G2 (n = 15) - 60 minutes . After reimplantation, teeth were analyzed at intervals of 1, 3 and 7 da ys. After these experimental periods, the animals were euthanized. Longitudinal sections with 5μm thick were obtained and stained with Hematoxylin and Eosin for histological analysis, while 3μm thick sections were subjected to immunohistochemical analysis of OPG, RANK and RANKL. The results showed that the RANK / RANKL / OPG system actively participates in both the repair process, as well as tooth and bone resorption . Extra - alveolar time of 60 minutes before replantation caused minor expressions of RANKL and OPG, not influencing the expression of RANK; RANKL immunostaining showed higher in both groups when compared to other biomarkers, participating in all phases of bone and tooth resorption; RANKL was associated to both osteoclastogenesi and cellular proliferation, and was expressed in both groups.