Detection of dengue NS1 and NS3 proteins in placenta and umbilical cord in fetal and maternal death.

In Brazil, dengue is a public health problem with the occurrence of explosive epidemics. This study reports maternal and fetal deaths due to dengue and which tissues of placenta and umbilical cord were analyzed by molecular methods and immunohistochemistry. The dengue NS3 and NS1 detection revealed the viral presence in different cells from placenta and umbilical cord. In the latter, DENV-2 was detected at a viral titer of 1,02 × 10(4) amounts of viral RNA. It was shown that the DENV markers analyzed here may be an alternative approach for dengue fatal cases investigation, especially involving maternal and fetal death. J. Med. Virol. 88:1448-1452, 2016. © 2016 Wiley Periodicals, Inc.

Renal Injury in DENV-4 Fatal Cases: Viremia, Immune Response and Cytokine Profile.

Dengue virus (DENV) infections may result in asymptomatic cases or evolve into a severe disease, which involves multiple organ failure. Renal involvement in dengue can be potentially related to an increased mortality. Aiming to better understand the role of DENV in renal injury observed in human fatal cases, post-mortem investigations were performed in four DENV-4 renal autopsies during dengue epidemics in Brazil. Tissues were submitted to histopathology, immunohistochemistry, viral quantification, and characterization of cytokines and inflammatory mediators. Probably due the high viral load, several lesions were observed in the renal tissue, such as diffuse mononuclear infiltration around the glomerulus in the cortical region and in the medullary vessels, hyalinosis arteriolar, lymphocytic infiltrate, increased capsular fibrosis, proximal convoluted tubule (PCT) damage, edema, PCT debris formation, and thickening of the basal vessel membrane. These changes were associated with DENV-4 infection, as confirmed by the presence of DENV-specific NS3 protein, indicative of viral replication. The exacerbated presence of mononuclear cells at several renal tissue sites culminated in the secretion of proinflammatory cytokines and chemokines. Moreover, it can be suggested that the renal tissue injury observed here may have been due to the combination of both high viral load and exacerbated host immune response.

Detection of Latino virus (Arenaviridae: Mammarenavirus) naturally infecting Calomys callidus.

Mammarenavirus species are associated with a specific rodent host species, although an increasing number of virus has been associated to more than one host, suggesting that co-evolution is less robust than initially thought. There are few eco-epidemiological studies of South America mammarenaviruses in non-endemic areas of Arenavirus Hemorrhagic Fever, affecting specially our current knowledge about animal reservoirs and virus range and host-virus relations. In Brazil, seven arenavirus species were described in seven different rodent species. Here in we describe a new rodent reservoir species in Brazil related to the previously described Latino mammarenavirus (LATV) MARU strain. Samples of 148 rodents from Mato Grosso state, Brazil were analyzed. Amplification of the glycoprotein precursor gene (GPC) was observed in six Calomys callidus rodents. According to phylogenetic inferences, is observed a well-supported monophyletic clade of LATV from C. callidus and other Clade C mammarenavirus. In addition, the phylogenetic relations of both genes showed a close relation between LATV MARU and Capão Seco strains, two distinct lineages. Additionally, the results obtained in this study point out to a change of scenario and in previously stabilized patterns in the dynamics of South American mammarenaviruses, showing that with more studies in AHF non-endemic or silent areas, more potential hosts for this virus will be discovered.

Review of 21 cases of mycetoma from 1991 to 2014 in Rio de Janeiro, Brazil.

Mycetoma is caused by the subcutaneous inoculation of filamentous fungi or aerobic filamentous bacteria that form grains in the tissue. The purpose of this study is to describe the epidemiologic, clinic, laboratory, and therapeutic characteristics of patients with mycetoma at the Oswaldo Cruz Foundation in Rio de Janeiro, Brazil, between 1991 and 2014. Twenty-one cases of mycetoma were included in the study. There was a predominance of male patients (1.3:1) and the average patient age was 46 years. The majority of the cases were from the Southeast region of Brazil and the feet were the most affected anatomical region (80.95%). Eumycetoma prevailed over actinomycetoma (61.9% and 38.1% respectively). Eumycetoma patients had positive cultures in 8 of 13 cases, with isolation of Scedosporium apiospermum species complex (n = 3), Madurella mycetomatis (n = 2) and Acremonium spp. (n = 1). Two cases presented sterile mycelium and five were negative. Six of 8 actinomycetoma cases had cultures that were identified as Nocardia spp. (n = 3), Nocardia brasiliensis (n = 2), and Nocardia asteroides (n = 1). Imaging tests were performed on all but one patients, and bone destruction was identified in 9 cases (42.68%). All eumycetoma cases were treated with itraconazole monotherapy or combined with fluconazole, terbinafine, or amphotericin B. Actinomycetoma cases were treated with sulfamethoxazole plus trimethoprim or combined with cycles of amikacin sulphate. Surgical procedures were performed in 9 (69.2%) eumycetoma and in 3 (37.5%) actinomycetoma cases, with one amputation case in each group. Clinical cure occurred in 11 cases (7 for eumycetoma and 4 for actinomycetoma), and recurrence was documented in 4 of 21 cases. No deaths were recorded during the study. Despite of the scarcity of mycetoma in our institution the cases presented reflect the wide clinical spectrum and difficulties to take care of this neglected disease.

Inducible nitric oxide synthase in heart tissue and nitric oxide in serum of Trypanosoma cruzi-infected rhesus monkeys: association with heart injury.

BACKGROUND: The factors contributing to chronic Chagas' heart disease remain unknown. High nitric oxide (NO) levels have been shown to be associated with cardiomyopathy severity in patients. Further, NO produced via inducible nitric oxide synthase (iNOS/NOS2) is proposed to play a role in Trypanosoma cruzi control. However, the participation of iNOS/NOS2 and NO in T. cruzi control and heart injury has been questioned. Here, using chronically infected rhesus monkeys and iNOS/NOS2-deficient (Nos2(-/-)) mice we explored the participation of iNOS/NOS2-derived NO in heart injury in T. cruzi infection. METHODOLOGY: Rhesus monkeys and C57BL/6 and Nos2(-/-) mice were infected with the Colombian T. cruzi strain. Parasite DNA was detected by polymerase chain reaction, T. cruzi antigens and iNOS/NOS2(+) cells were immunohistochemically detected in heart sections and NO levels in serum were determined by Griess reagent. Heart injury was assessed by electrocardiogram (ECG), echocardiogram (ECHO), creatine kinase heart isoenzyme (CK-MB) activity levels in serum and connexin 43 (Cx43) expression in the cardiac tissue. RESULTS: Chronically infected monkeys presented conduction abnormalities, cardiac inflammation and fibrosis, which resembled the spectrum of human chronic chagasic cardiomyopathy (CCC). Importantly, chronic myocarditis was associated with parasite persistence. Moreover, Cx43 loss and increased CK-MB activity levels were primarily correlated with iNOS/NOS2(+) cells infiltrating the cardiac tissue and NO levels in serum. Studies in Nos2(-/-) mice reinforced that the iNOS/NOS2-NO pathway plays a pivotal role in T. cruzi-elicited cardiomyocyte injury and in conduction abnormalities that were associated with Cx43 loss in the cardiac tissue. CONCLUSION: T. cruzi-infected rhesus monkeys reproduce features of CCC. Moreover, our data support that in T. cruzi infection persistent parasite-triggered iNOS/NOS2 in the cardiac tissue and NO overproduction might contribute to CCC severity, mainly disturbing of the molecular pathway involved in electrical synchrony. These findings open a new avenue for therapeutic tools in Chagas' heart disease.

Estudo histopatológico, imuno-histoquímico e imunopatológico dos micetomas em amostras de lesões cutâneas humanas

Os micetomas constituem doenças infecciosas crônicas, endêmicas nas regiões tropicais e subtropicais, podendo ser vistos na Ásia e alguns países do norte da África e nas Américas. No Brasil a prevalência permanece desconhecida. No mundo, cerca de 60% dos casos de micetomas são actinomicetomas e os 40 % restantes são eumicetomas; ocorrem principalmente no sexo masculino entre 20 e 25 anos. Os principais responsáveis pelos actinomicetomas são espécies do gênero Nocardia, Streptomyces e Actinomadura e pelos eumicetomas são Acremonium sp. e Madurella mycetomatis os mais frequentemente encontrados. A infecção caracteriza-se clinicamente por nódulos cutâneos e subcutâneos acompanhados de abscessos, fistulização e extrusão dos grãos. O diagnóstico baseia-se principalmente na apresentação clínica, análise histopatológica e em exames microbiológicos. Os micetomas são doenças negligenciadas, com poucos casos relatados em nosso país, cujos aspectos histopatológicos e imunopatológicos não se encontram totalmente esclarecidos, justificando o presente estudo. O objetivo do estudo foi descrever os achados histopatológicos e realizar estudos imuno-histoquímicos para identificação e quantificação de células T CD4+, T CD8+ e CD68+, e pesquisar a expressão de TNFa, TGF-b1, perforina, NOS 2, IL-10, IL-12 e IL-17 em 22 amostras de lesões cutâneas de micetomas do INI/Fiocruz colhidas entre janeiro de 1998 a julho de 2015; compreendendo 4 amostras de actinomicetomas e 18 de eumicetomas A análise histopatológica revelou um processo inflamatório crônico granulomatoso com a presença de linfócitos, histiócitos, plasmócitos, eosinófilos, neutrófilos e células gigantes do tipo corpo estranho e do tipo Langhans. Granulomas com padrões supurativo, corpo estranho, epitelióide e intersticial ou necrobiótico foram observados, associados à necrose dos tipos fibrinóide e liquefativa. Grãos de elementos fúngicos apresentaram afinidade tintorial para o ácido periódico de Schiff (PAS) e prata metenamina de Grocott, enquanto grãos de bactérias filamentosas foram refratários ao PAS e positivos pelo Gram Brown-Brenn, Grocott e Wade nos casos de Nocardia. Fenômeno de Splendore- Hoeppli e fibrose também foram observados. O estudo imuno-histoquímico detectou a presença de células T CD4+, T CD8+ e células CD68+ com predomínio das últimas nos actinomicetomas e eumicetomas. Foram detectados antígenos para IL-10, IL-12, IL-17, TNF-a, TGF-b1, perforina e NOS2, indicativos da participação destas interleucinas e mediadores inflamatórios nas respostas inflamatórias dos actinomicetomas e eumicetomas. Tais achados apontam para resposta inflamatória tipo Th1, Th2 e Th17 nos dois grupos de micetomas.

Histopatologia e imuno-histoquímica de camundongos C57BL/6 infectados por Toxoplasma gondii cepa ME-49 e alimentados com micotoxinas / Histopatology and immunohistochemistry of C57BL/6 mice infected with Toxoplasma gondii ME-49 strain and fed with mycotoxins

A avaliação do curso da infecção por Toxoplasma gondii em camundongos alimentados com micotoxinas, utilizando a histopatologia e imuno-histoquímica, demonstrou a ocorrência de lesões mais acentuadas nos animais infectados e expostos às toxinas. Diferentes quadros de inflamação e necrose encefálica e hepática mostraram que a associação entre parasitismo e a ingestão das micotoxinas causou agravamento nas lesões. A fumonisina B1(FB1, isolada ou associada a outras micotoxinas) foi responsável por alterações celulares como gigantismo nuclear, hipertrofia celular e células atípicas em tecido hepático. A FB1 foi também relacionada com quadros de desmielinização em tecido cerebral. A presença de cistos ou formas livres da cepa ME-49 de T. gondii foi constatada tanto em animais controle quanto nos alimentados com micotoxinas, mostrando que a cepa do parasita, nesta linhagem C57BL/6 de camundongos, apresenta formas características de fase aguda e crônica da infecção.

The course of toxoplasmosis in mice fed with mycotoxins was evaluated by histopatology and immunohistochemistry. The most severe lesions was seen in animals infected by T. gondii and fed on mycotoxins, when they were compered with control animals. Encephalitis, hepatitis, necrosis foci in the brain and liver showed that the association parasite infection and micotoxicosis aggravated the lesions. The fumonisin B1(isolated or in adiccion to others mycotoxins) was responsable for cellular alteration like nuclear enlargement, cellular hypertrophy, and atypical cells in hepatic tissue. This mycotoxin was also related to brain desmyelinization. The presence of cysts or free parasites was observed in control and intoxicated animals. This result showed that ME49 strain of T. gondii, in C57BL/6 mice, can display typical forms of acute and chronic infection.

Toxoplasmosis in squirrel monkeys: histological and immunohistochemical analysis

Necropsy findings in three cases of naturally occurring toxoplasmosis in squirrel monkeys (Saimiri sciureus) obtained as wild catches from the Amazon region were described. Histopathological evaluation of the liver, spleen, kidneys and mesenteric lymph nodes showed multiple foci of inflammation and necrosis. Typical, well-defined morphologic Toxoplasma gondii cysts and free forms of the parasite were found by immunoperoxidase staining within inflammatory infiltrates. The presence of T. gondii in the studied colony could severely influence the results of experiments performed in the animals.

Achados de necropsia em três casos de toxoplasmose ocorridos naturalmente em macacos-de-cheiro (Saimiri sciureus) obtidos de capturas na região Amazônica foram descritos. A avaliação histopatológica do fígado, baço, rins e linfonodos mesentéricos mostrou múltiplos focos de inflamação e necrose. Cistos morfológicos típicos e bem definidos de Toxoplasma gondii e formas livres foram detectados pelo método da imunoperoxidase com infiltrados inflamatórios. A presença de T. gondii na colônia de primatas estudada pode influenciar severamente os resultados de experimentos realizados nos animais.

Toxoplasmosis in squirrel monkeys: histological and immunohistochemical analysis / Toxoplasmose em macacos-de-cheiro: análise histológica e imunoistoquímica

Achados de necropsia em três casos de toxoplasmose ocorridos naturalmente em macacos-de-cheiro (Saimiri sciureus) obtidos de capturas na região Amazônica foram descritos. A avaliação histopatológica do fígado, baço, rins e linfonodos mesentéricos mostrou múltiplos focos de inflamação e necrose. Cistos morfológicos típicos e bem definidos de Toxoplasma gondii e formas livres foram detectados pelo método da imunoperoxidase com infiltrados inflamatórios. A presença de T. gondii na colônia de primatas estudada pode influenciar severamente os resultados de experimentos realizados nos animais.

Seminário Oficina Conjunta UNASUR/CPLP de atualização científica e tecnológica sobre febre amarela e outras arboviroses emergentes e re-emergentes

Organizado pela Fiocruz, através da Coordenação de Vigilância e Laboratórios de Referência e do Centro de Relações internacionais em Saúde, tem o objetivo de fortalecer a capacidade dos Institutos Nacionais de Saúde da UNASUR e da CPLP e dos Ministérios da Saúde, para prestação de serviços e geração de conhecimentos e formação de recursos humanos necessários à prevenção e o controle de emergências sanitárias, com particular referência à febre amarela e outras arboviroses, emergente e reemergentes.

Morfologia e função fagocitária de implante esplênico autógeno regenerado em ratos / Morphology and phagocytic function of regenerated autogenous splenic implant in rats

Objetivo: O objetivo deste trabalho é analisar a regeneração morfológica de tecido esplênico auto-implantado em ratos Wistar, verificando a função fagocitária bacteriana de seus macrófagos. Métodos: Utilizou-se um modelo experimental com ratos jovens e adultos, de ambos os sexos, submetidos a esplenectomia total combinada com auto-implante de fatias de toda a massa esplênica no omento maior. Dezesseis semanas após, os animais foram inoculados por via intravenosa com suspensão de Escherichia coli AB1157 e, após 20 minutos, foram mortos por dose letal de halotano, sendo submetidos a laparotomia para retirada dos auto-implantes esplênicos. A análise estatística foi realizada com o teste t de Student, com ênfase na comparação da massa de auto-implante esplênico regenerada entre animais jovens e adultos de ambos os sexos. Resultados: Ocorreu regeneração do auto-implante esplênico em todos os animais. Machos jovens e fêmeas adultas apresentaram maior percentual de regeneração. Observou-se aspecto morfológico microscópico semelhante em todos os animais. O tecido esplênico regenerado mostrou as polpas vermelha e branca, com desarranjo arquitetural moderado, bem como folículos linfóides. Os vasos sangüíneos mostravam paredes preservadas, sem sinais de vasculite ou trombose. Foram encontrados macrófagos contendo grumos de bactérias, bem como macrófagos contendo pigmento de hemossiderina intracitoplasmáticos. Conclusão: O auto-implante esplênico, no omento maior, em ratos, adquire a arquitetura macro e microscópica de um baço normal, de dimensão menor e preserva a função fagocitária bacteriana.

Reativação da infecção por Trypanosoma cruzi em paciente com síndrome de imunodeficiência adquirida / Reactivation of Trypanosoma cruzi infection in a patient with acquired immunodeficiency syndrome

Uma paciente com síndrome de imunodeficiência adquirida (SIDA) e doença de Chagas, com xenodiagnóstico positivo, estava em uso prolongado de cetoconazol com o objetivo de suprimir a parasitemia e prevenir a reativação da doença de Chagas. O cetoconazol foi suspenso inadvertidamente após 6 meses de uso. Um mês após, a paciente foi internada com febre, cefaléia, vômitos, taquicardia e hepatoesplenomegalia. Tanto o xenodiagnóstico como o exame de sangue a fresco demonstraram a presença de Trypanosoma cruzi. O tratamento com benzonidazol foi instituído, com supressão da parasitemia. A paciente desenvolveu concomitantemente uma provável neurotoxoplasmose, evoluindo para o óbito em septicemia. À necropsia, não foram encontrados parasitas.