Cytogenetic and molecular abnormalities in Waldenström's macroglobulinemia patients: Correlations and prognostic impact.

While Waldenström macroglobulinemia (WM) is characterized by an almost unifying mutation in MYD88, clinical presentation at diagnosis and response to therapy can be widely different among WM patients. Current prognostic tools only partially address this clinical heterogeneity. Limited data compiling both molecular and cytogenetic information have been used in risk prognostication in WM. To investigate the clinical impact of genetic alterations in WM, we evaluated cytogenetic and molecular abnormalities by chromosome banding analyses, FISH and targeted NGS in a retrospective cohort of 239 WM patients, including 187 patients treated by first-line chemotherapy or immunochemotherapy. Most frequent mutations were identified in MYD88 (93%), CXCR4 (29%), MLL2 (11%), ARID1A (8%), TP53 (8%), CD79A/B (6%), TBL1XR1 (4%) and SPI1 (4%). The median number of cytogenetic abnormalities was two (range, 0-22). Main cytogenetic abnormalities were 6q deletion (del6q) (27%), trisomy 4 (tri4) (12%), tri18 (11%), del13q (11%), tri12 (7.5%) and del17p (7%). Complex karyotype (CK) was observed in 15% (n = 31) of cases, including 5% (n = 12) of highly CK (high-CK). TP53 abnormalities (TP53abn) were present in 15% of evaluable patients. TP53abn and del6q were associated with CK/high-CK (p < .05). Fifty-three percent of patients with hyperviscosity harbored CXCR4 mutations. Cytogenetic and molecular abnormalities did not significantly impact time to first treatment and response to therapy. Prognostic factors associated with shorter PFS were del6q (p = .01), TP53abn (p = .002) and high-CK (p = .01). These same factors as well as IPSSWM, tri4, CXCR4 frameshift and SPI1 mutations were significantly associated with lower OS (p < .05). These results argue for integration of both cytogenetic and molecular screening in evaluation of first-line WM patients.

Assessing Amphotericin B polymeric nanoparticles' toxicity through Zebrafish FET test (OECD Test Guideline 236) / Avaliação da toxicidade de nanopartículas poliméricas seguindo as diretrizes do OECD TG 236 - teste de toxicidade aguda em embrião de peixe

As nanopartículas poliméricas (NPPs) têm atraído a atenção da indústria farmacêutica devido a características como a construção de modelos de liberação controlada, melhoria da biodisponibilidade e redução de efeitos adversos. A utilização do zebrafish (Danio rerio) como modelo animal para estudos toxicológicos tem aumentado nos últimos anos, e o teste de toxicidade aguda em embriões de peixes (FET), tem sido amplamente difundido, devido à rapidez na obtenção de dados e à possibilidade de estimar a DL50 para futuros testes em mamíferos. Objetivo: Investigar a toxicidade de NPPs de policaprolactona (PCL) e poli (ácido lático) (PLA). Metodologia: O teste FET foi realizado seguindo as diretrizes estabelecidas no OECD TG 236. As suspensões de NPPs foram diluídas nas concentrações desejadas com solução de meio embriônico E3. Foram utilizados 20 embriões fertilizados para cada concentração testada e também para o controle negativo. As concentrações testadas foram 4 µg/mL; 8 µg/mL; 16 µg/ml; 32 µg/ml; e 64 µg/ml. Ao final de 120 horas, os animais foram contidos em uma gota de carboximetilcelulose (CMC) a 6%, em lâmina para microscopia, com a finalidade de serem fotografados e filmados por 10 segundos. Foi construída uma escala de pontuação de 0 a 4, onde zero significa nenhuma alteração morfológica aparente; 1 representa uma alteração morfológica não letal; 2 simboliza duas alterações morfológicas não letais; 3 corresponde a mais de duas alterações morfológicas não letais; e 4 significa morte ou presença de alterações incompatíveis com a vida determinadas no guia 236. Adicionalmente, também foram realizadas medidas de tamanho corporal, diâmetro dos olhos e batimentos cardíacos por minuto (bpm). Resultados: Os grupos expostos às NPPs apresentaram óbito e/ou malformações como ausência de somitos, edema pericárdico, atraso no desenvolvimento e ausência de insuflação da bexiga natatória, porém, sem diferir estatisticamente do controle negativo. Nas análises de bpm, tamanho corporal e diâmetro ocular, as larvas também não apresentaram diferenças estatísticas em relação ao controle negativo. Conclusão: Em relação à segurança das NPPs testadas, pode-se concluir que eles se mostraram seguros, pois não apresentaram diferenças estatísticas em relação ao grupo controle em nenhuma das concentrações testadas e em nenhum dos parâmetros avaliados.

Avaliação toxicológica de nanopartículas de prata através do teste de toxicidade aguda em embriões de zebrafish (Danio rerio)

Nos últimos anos, as nanopartículas de prata (AgNP) vêm sendo altamente utilizadas devido às suas ações desinfetantes e antissépticas. Possuem dimensões extremamente pequenas, da ordem de 1 a 100 nanômetros, contendo cerca de 15 a 20 mil átomos de prata. Elas chamaram atenção de maneira especial durante a pandemia de COVID-19, pois várias empresas desenvolveram máscaras de proteção com AgNP inseridas no tecido, alegando total defesa contra o vírus. Foram feitos, no Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS), experimentos de avaliação da concentração de AgNP nesses produtos. Concomitantemente, iniciou-se o projeto de avaliação de toxicidade delas, utilizando o teste de Toxicidade Aguda de Embrião de Peixe (FET, do inglês Fish Embryo Acute Toxicity). Objetivo: Averiguar a ocorrência de malformações, alterações morfológicas e de cardiotoxicidade em embriões de zebrafish (Danio rerio) expostos à AgNP comerciais (padrão) e amostras de AgNP sintetizadas no Instituto Nacional de Metrologia, Qualidade e Tecnologia (Inmetro). Metodologia: O trabalho foi realizado seguindo as diretrizes do guia 236 da OECD. Resumidamente, os embriões expostos às AgNP foram avaliados durante 96 horas, a cada 24 horas, juntamente de um grupo controle negativo. No término das 96h, foram realizadas imagens para avaliação morfológica e vídeos de 10 segundos, utilizados para contagem dos batimentos cardíacos de cada peixe, com auxílio de um contador. Utilizando as imagens, foram medidos o comprimento, da cabeça até a cauda, de cada animal, e o diâmetro dos olhos. Resultados: Não foram observadas alterações morfológicas significativas quando comparados os grupos expostos e controle. Os batimentos por minuto apresentados nas amostras foram considerados similares em comparação ao grupo não exposto às nanopartículas. Não foram observadas diferenças entre o tamanho corporal das larvas de 96 h frente ao controle. As medidas de diâmetro dos olhos também não apresentaram diferenças. Conclusão: Baseando-se apenas neste resultado, as AgNP testadas demonstraram baixa toxicidade, nas concentrações testadas. Entretanto, mais testes de toxicidade destas nanopartículas serão realizados, como testes comportamentais para investigação de possível toxicidade no sistema nervoso.