Subdoses of 17DD yellow fever vaccine elicit equivalent virological/immunological kinetics timeline.

BACKGROUND: The live attenuated 17DD Yellow Fever vaccine is one of the most successful prophylactic interventions for controlling disease expansion ever designed and utilized in larger scale. However, increase on worldwide vaccine demands and manufacturing restrictions urge for more detailed dose sparing studies. The establishment of complementary biomarkers in addition to PRNT and Viremia could support a secure decision-making regarding the use of 17DD YF vaccine subdoses. The present work aimed at comparing the serum chemokine and cytokine kinetics triggered by five subdoses of 17DD YF Vaccine. METHODS: Neutralizing antibody titers, viremia, cytokines and chemokines were tested on blood samples obtained from eligible primary vaccinees. RESULTS AND DISCUSSION: The results demonstrated that a fifty-fold lower dose of 17DD-YF vaccine (587 IU) is able to trigger similar immunogenicity, as evidenced by significant titers of anti-YF PRNT. However, only subdoses as low as 3,013 IU elicit viremia kinetics with an early peak at five days after primary vaccination equivalent to the current dose (27,476 IU), while other subdoses show a distinct, lower in magnitude and later peak at day 6 post-vaccination. Although the subdose of 587 IU is able to trigger equivalent kinetics of IL-8/CXCL-8 and MCP-1/CCL-2, only the subdose of 3,013 IU is able to trigger similar kinetics of MIG/CXCL-9, pro-inflammatory (TNF, IFN-γ and IL-2) and modulatory cytokines (IL-5 and IL-10). CONCLUSIONS: The analysis of serum biomarkers IFN-γ and IL-10, in association to PRNT and viremia, support the recommendation of use of a ten-fold lower subdose (3,013 IU) of 17DD-YF vaccine.

Validation of PCR method for mycoplasma detection in the Yellow Fever-vaccine quality control / Validação de método de PCR para detecção de micoplasmas no controle de qualidade da vacina de Febre Amarela

Among the vaccines produced by Bio-Manguinhos, a major centre for manufacturing the immunobiological products in Latin America, stands out the yellow fever (YF) vaccine. To guarantee the excellence and safety of the YF vaccine, the quality control tests has to be performed throughout its production. The World Health Organization (WHO) demands the producers to guarantee the absence of Mycoplasma orale, M. pneumoniae, M. gallisepticum and M. synoviae in the biological products. Mycoplasma is a fastidious microorganism, requiring about 35 days for attaining the conclusive culturing test. In this study PCR methods were selected for amplifying 16S rRNA gene fragments for detecting mycoplasma in the intermediate products of YF vaccine. This standardized methodology was specific and sensitive to detect the low concentrations of mycoplasma in spiked intermediary vaccine products; and the absence of unspecific amplification was also demonstrated. The detection rates ranged from 3.1 to 12.5 colony forming units and showed 100 % of sensitivity and specificity in the tested samples. The PCR protocol for detecting mycoplasmal DNA in YF vaccine was validated by analysing 286 samples. Bio-Manguinhos produces annually 10,000,000 YF vaccine doses, and this method has been successfully employed, complementing the traditional approach in the mycoplasma detection since 2008.

Dentre as vacinas produzidas por Bio-Manguinhos, um importante centro de produção de imunobiológicos da América Latina, destaca-se a vacina de febre amarela (FA) que é produzida em ovos embrionados. Para garantir a excelência e a segurança da vacina, testes de controle de qualidade são realizados durante a produção. A Organização Mundial de Saúde (OMS) exige dos produtores a ausência de Mycoplasma orale, M. pneumoniae, M. gallisepticum e M. synoviae em produtos biológicos. Micoplasmas são micro-organismos fastidiosos, sendo necessários 35 dias para que os testes de cultura sejam conclusivos. Neste estudo foram selecionados métodos de amplificação de fragmentos do gene 16S rRNA para detecção de micoplasmas em produtos intermediários da vacina de FA. Esta metodologia padronizada foi capaz de detectar baixas concentrações de micoplasmas nos produtos intermediários e a ausência de amplificação inespecífica foi demonstrada. O limite de detecção variou entre 3,1 e 12,5 unidades formadoras de colônia; e nas amostras testadas a sensibilidade e a especificidade foram de 100 %. O protocolo de PCR para detecção de micoplasmas na vacina foi validado pela análise de 286 amostras. Bio-Manguinhos produz 10.000.000 doses de vacina de febre amarela por ano e, desde 2008, este método tem sido empregado com sucesso, complementando-se a abordagem tradicional.

Validation of PCR method for mycoplasma detection in the Yellow Fever-vaccine quality control / Validação de método de PCR para detecção de micoplasmasno controle de qualidade da vacina de Febre Amarela

Among the vaccines produced by Bio-Manguinhos, a major centre for manufacturingthe immunobiological products in Latin America, stands out the yellow fever (YF) vaccine.To guarantee the excellence and safety of the YF vaccine, the quality control tests has to be performedthroughout its production. The World Health Organization (WHO) demands the producersto guarantee the absence of Mycoplasma orale, M. pneumoniae, M. gallisepticum and M. synoviaein the biological products. Mycoplasma is a fastidious microorganism, requiring about 35 daysfor attaining the conclusive culturing test. In this study PCR methods were selected for amplifying16S rRNA gene fragments for detecting mycoplasma in the intermediate products of YF vaccine.This standardized methodology was specific and sensitive to detect the low concentrations of mycoplasma in spiked intermediary vaccine products; and the absence of unspecific amplification was also demonstrated. The detection rates ranged from 3.1 to 12.5 colony formingunits and showed 100 % of sensitivity and specificity in the tested samples. The PCR protocol for detecting mycoplasmal DNA in YF vaccine was validated by analysing 286 samples. Bio-Manguinhos produces annually 10,000,000 YF vaccine doses, and this method has been successfully employed, complementing the traditional approach in the mycoplasma detection since 2008.

Dentre as vacinas produzidas por Bio-Manguinhos, um importante centro de produção deimunobiológicos da América Latina, destaca-se a vacina de febre amarela (FA) que é produzidaem ovos embrionados. Para garantir a excelência e a segurança da vacina, testes de controlede qualidade são realizados durante a produção. A Organização Mundial de Saúde (OMS) exigedos produtores a ausência de Mycoplasma orale, M. pneumoniae, M. gallisepticum e M. synoviaeem produtos biológicos. Micoplasmas são micro-organismos fastidiosos, sendo necessários35 dias para que os testes de cultura sejam conclusivos. Neste estudo foram selecionadosmétodos de amplificação de fragmentos do gene 16S rRNA para detecção de micoplasmas emprodutos intermediários da vacina de FA. Esta metodologia padronizada foi capaz de detectarbaixas concentrações de micoplasmas nos produtos intermediários e a ausência de amplificaçãoinespecífica foi demonstrada. O limite de detecção variou entre 3,1 e 12,5 unidades formadorasde colônia; e nas amostras testadas a sensibilidade e a especificidade foram de 100 %. O protocolode PCR para detecção de micoplasmas na vacina foi validado pela análise de 286 amostras.Bio-Manguinhos produz 10.000.000 doses de vacina de febre amarela por ano e, desde 2008,este método tem sido empregado com sucesso, complementando-se a abordagem tradicional.

Estudo colaborativo nacional para o estabelecimento do material de referência de trabalho da vacina contra sarampo/caxumba e rubéola: evolução para a autossuficência na produção nacional da vacina tríplice viral / National collaborative study for establishing the working reference material of the vaccine against measles/mumps and rubella: evolution to the self-sufficiency in the national production of triple viral vaccine

A monografia farmacopeica da vacina tríplice viral (sarampo/caxumba/rubéola) exige a validação de desempenho do ensaio de potência utilizando-se apropriado material de referência (MR). Com o intuito de estabelecer o primeiro MR de trabalho (MRT) nacional para a vacina tríplice viral, foi realizado o estudo colaborativo nacional com a participação de duas únicas instituições que executam o ensaio de potência desta vacina, o Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos, produtor nacional) e o Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. O material candidato (cMRTBio), preparado pelo produtor, foi avaliado pelos laboratórios participantes utilizando-se as respectivas metodologias in-house de determinação de potência. O cMRTBio foi considerado apropriado como MR in-house por estar em concordância com as especificações recomendadas nas normativas de compêndios, a saber: variações intra- (< 5 %), inter-ensaios (< 10%) e entre laboratórios (< 10 %) abaixo dos limites aceitáveis; e potência estimada (log10 CCID50/DH) em 3,72 para sarampo, 4,80 para caxumba e 3,70 para rubéola. Este trabalho reflete o compromisso do único produtor nacional da vacina tríplice viral com a saúde pública, descrevendo-se a expansão da tecnologia, o cumprimento às diretrizes internacionais, o cuidado com o controle da qualidade e culminância para a autossuficiência nacional na produção de vacinas.

Estudo colaborativo nacional para o estabelecimento do material de referência de trabalho da vacina contra sarampo, caxumba e rubéola: evolução para a autossuficência na produção nacional da vacina tríplice viral / National collaborative study for establishing the working reference material of the vaccine against measles/mumps and rubella: evolution to the self-sufficiency in the national production of triple viral vaccine

A monografia farmacopeica da vacina tríplice viral (sarampo/caxumba/rubéola) exige a validação de desempenho do ensaio de potência utilizando-se apropriado material de referência (MR). Com o intuito de estabelecer o primeiro MR de trabalho (MRT) nacional para a vacina tríplice viral, foi realizado o estudo colaborativo nacional com a participação de duas únicas instituições que executam o ensaio de potência desta vacina, o Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos, produtor nacional) e o Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde.O material candidato (cMRTBio), preparado pelo produtor, foi avaliado pelos laboratórios participantes utilizando-se as respectivas metodologias in-house de determinação de potência. O cMRTBio foi considerado apropriado como MR in-house por estar em concordância com as especificações recomendadas nas normativas de compêndios, a saber: variações intra- (< 5 %), inter-ensaios (< 10 %) e entre laboratórios (< 10 %) abaixo dos limites aceitáveis; e potência estimada (log10 CCID50/DH) em 3,72 para sarampo, 4,80 para caxumba e 3,70 para rubéola. Este trabalho reflete o compromisso do único produtor nacional da vacina tríplice viral com a saúde pública, descrevendo-se a expansão da tecnologia, o cumprimento às diretrizes internacionais, o cuidado com o controle da qualidade e culminância para a autossuficiência nacional na produção de vacinas.

The pharmacopoeia monograph for the measles/mumps and rubella (MMR) triple vaccine demands to perform the validation of the potency assay by using the suitable reference material (MR). Aiming at establishing the firstwork MR (MRT) for the MMR triple vaccine, a national collaborative study was performed with the participation of the two unique national institutions working on the vaccine potency evaluation test, the Imunobiological Technology Institute (Bio-Manguinhos, national manufacturer) and the National Institute for Quality Control in Health. The candidate product (cMRTBio) prepared by the manufacturer was evaluated by the participant laboratories by employing the respective in-house methodologies for determining the potency. The cMRTBio was considered suitable as in-house MR, according to the specifications based on the normative compendia, being the intra-assay (< 5 %), inter-assay(< 10 %) and between laboratories variations (< 10 %) below the acceptable limits, and the estimate potency(log10 CCID50/DH) in 3.72 for measles, 4.80 for mumps and 3.70 for rubella. This study reflects the commitment of the unique national MMR vaccine producer to the public health, describing the expansion of technology,the compliance with international guidelines and the careful quality control, leading to the national self-sufficiency in the vaccine production.

Avaliação das melhorias no sistema de controle de qualidade de vacinas em Bio-Manguinhos. Período 1999-2004

O objetivo deste trabalho foi a avaliação das melhorias alcançadas no Sistema de Controle de Qualidade de Vacinas produzidas em Bio-Manguinhos, abrangendo o período de 1999 a 2004. Analisamos que uma transferência de tecnologia bem sucedida, como a da vacina contra Haemophilus influenzae(Hib) produzida pela GlaxoSmith-Kline, Bélgica, proporcionou avanços significativos em qualidade. Vários fatoresestudados, como: melhoria no cumprimento às normas de Boas Práticas de Produção e Controle vigentes; o papel do Controle de Qualidade na absorção de tecnologia; investimento em equipamentos analíticos de última geração; captação, capacitação e treinamento de recursos humanos. Os resultados mostraram os altos índices de reprovação no processo produtivo de vacinas durante o ano de 1997, período em que as perdas chegaram a atingir até 23%. As melhorias implementadas nas áreas produtivas e de controle de qualidade, implicaram no aumento significativo do rendimento na produção das vacinas, evidenciado pelas perdas estimadas em apenas 1-3%, durante o período de 1999 a 2004 (exceto em 2000). Avaliamos também que os incrementos no sistema da qualidade não podem ser sustentados, caso não sejam adotadas outras ações essenciais, como a qualificação de fornecedores, uma dificuldade relacionada à complexidade para se adquirir produtos de qualidade, os quais podem estar envolvidos direta ou indiretamente na produção de vacinas. Desta forma, propomos a implementação de um Programa de Qualificação de Fornecedores para Bio-Manguinhos, com o objetivo de se minimizar um fator intrincado na aquisição de materiais e serviços confiáveis e, sobretudo, que garantam a qualidade no processo de fabricação de seus produtos (Vacinas, Biofármacos e Reativos para Diagnóstico).