Dogs Harbor Leishmania braziliensis and Participate in the Transmission Cycle of Human Tegumentary Leishmaniasis.

Dogs play an important role in transmission of Leishmania infantum, but epidemiologic and clinical studies of canine tegumentary leishmaniasis (CTL) are scarce. In an endemic area of human American tegumentary leishmaniasis (ATL) caused by Leishmania braziliensis, we determine the prevalence and incidence of both CTL and subclinical (SC) L. braziliensis infection in dogs and evaluated if the presence of dogs with CTL or SC L. braziliensis infection is associated with the occurrence of human ATL. SC infection in healthy animals and CTL in animals with ulcers were determined by PCR on biopsied healthy skin or on ulcers or by detecting antibodies against soluble leishmania antigen. We compared the occurrence of human ATL in homes with dogs with CTL or SC infection with control homes without dogs or with dogs without CTL or SC infection. The prevalence of SC infection was 35% and of CTL 31%. The incidence of SC infection in dogs was 4.6% and of CTL 9.3%. The frequency of ATL in humans was 50% in homes with infected dogs and 13% in homes without L. braziliensis infection in dogs. CTL and SC infection is highly prevalent, and dogs may participate in the transmission chain of L. braziliensis.

High accuracy of an ELISA test based in a flagella antigen of Leishmania in serodiagnosis of canine visceral leishmaniasis with potential to improve the control measures in Brazil - A Phase II study.

BACKGROUND: Canine Visceral leishmaniasis (CVL) is a serious public health problem, thus for its control, the Ministry of Health in Brazil recommends the rapid diagnosis and euthanasia of seropositive dogs in endemic areas. Therefore, our group had previously selected six recombinant proteins (rLci1, rLci2, rLci4, rLci5, rLci8, and rLci12) due to their high potential for CVL diagnostic testing. The present study aims to produce an immunodiagnostic test using the aforementioned antigens, to improve the performance of the diagnosis of CVL recommended by Brazilian Ministry of Health. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: To evaluate the recombinant proteins in the serological assays, positive and negative samples were selected based on parasitological test (culture) and molecular test (qPCR) of splenic aspirate. Initially, we selected 135 dog serum samples, 73 positives (symptomatic and asymptomatic) and 62 negatives to screen recombinant proteins on ELISA platform. Then, for rLci5 ELISA validation, 361 serum samples collected in a cross-sectional study were selected, being 183 positives (symptomatic and asymptomatic) and 178 negatives. In the screening of the recombinant proteins, rLci5 was the only protein to present a performance statistically higher than the performance presented by EIE-LVC test, presenting 96% (IC 95%; 85-99%) vs. 83% (IC 95%; 69-92%) of sensitivity for symptomatic dogs, 71% (IC 95%; 49-97%) vs. 54% (IC 95%; 33-74%) for asymptomatic dogs and 94% (IC 95%; 83-99%) vs, 88% (IC 95%; 76-95% of specificity. Thus, the rLci5 protein was selected to compose a final ELISA test. Validation of rLci5 ELISA showed 87% (IC 81-91%) of sensitivity, 94% (IC 95%; 90-97%) of specificity and 90% accuracy. Testing the EIE-LVC with the same validation panel, we observed a lower performance when compared to ELISA rLci5 (sensitivity of 67% (IC 95%; 59-74%), specificity of 87% (IC 95%; 81-92%), and accuracy of 77%). Finally, the performance of current CVL diagnostic protocol recommended by Brazilian Ministry of Health, using DPP-LVC as screening test and EIE-LVC as confirmatory test, was compared with a modified protocol, replacing EIE-LVC by rLci5 ELISA. The current protocol presented a sensitivity of 59% (IC 95%; 52-66%), specificity of 98% (IC 95%; 95-99%) and accuracy of 80% (IC 95%; 76-84%), while the modified protocol presented a sensitivity of 71% (IC 95%; 63-77%), specificity of 99% (IC 95%; 97-100%) and accuracy of 86% (IC 95%; 83-89%). CONCLUSION: Thus, we concluded that rLci5 ELISA is a promising test to replace EIE-LVC test and increase the diagnostic performance of CVL in Brazil.

Detecção precoce e persistência de resultados positivos de um Elisa utilizando a proteína RLCI5 no diagnóstico da Leishmaniose Visceral em uma coorte de cães infectados

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral (LV) é uma doença zoonótica, causada por protozoários, na qual os cães são os principais reservatórios urbanos. Medidas de controle e tratamento de animais infectados são essenciais para reduzir os casos de LV. A detecção precoce e acurada de cães infectados com Leishmania infantum pode estar limitando o sucesso do controle da LV. Com o objetivo de aprimorar o sorodiagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC), objetivamos avaliar a precocidade de uma proteína recombinante (rLci5) em um ensaio imunoabsorvente (ELISA) na detecção de cães infectados. Adicionalmente, avaliamos a persistência dos resultados positivos obtidos pelo ELISA rLci5 em cães acompanhados quando comparados a outros testes diagnósticos usuais de LVC, sorológicos (DPP-LVC, EIE-LVC), cultura e teste molecular (qPCR) ao longo do tempo de infecção desses animais. MÉTODOS: Amostras de soro de 48 cães infectados com L. infantum provenientes de uma coorte foram avaliadas para LVC usando diferentes testes diagnósticos (qPCR, EIE-LVC, DPP-LVC e cultura), seus resultados foram comparados com a detecção do ELISA rLci5 para determinar qual desses testes foi capaz de diagnosticar a infecção por L. infantum precocemente. Além disso, ao longo do tempo comparamos os resultados para LVC de cada cão, usando os mesmos testes diagnósticos durante a coorte para avaliar a persistência dos resultados positivos. RESULTADOS: O ELISA rLci5 apresentou taxas mais altas de resultados positivos em pontos temporais iniciais em comparação com os outros testes diagnósticos empregados no estudo de coorte, até 24 meses antes da detecção por outros testes. A positividade para o ELISA rLci5 foi de 52,1% (25/48) no início do estudo, enquanto qPCR foi de 35,4% (17/48), DPP-LVC 27,1% (13/48), EIE-LVC 22,9% (11/48) e cultura apenas 4,2 % (2/48). Em pelo menos um dos pontos de tempo do estudo de coorte de 24 meses, o ELISA rLci5 foi positivo em 100% (48/48) dos cães, contra 83% (40/48) para qPCR, 75% (36/48) para DPP-LVC, 65% (31/48) para EIE-LVC e 31% (15/48) para cultura. Investigando sinais clínicos em associação com positividade de teste diagnóstico, o ELISA rLci5 detectou LVC em 62,9% (95/151) das avaliações clínicas com uma escores de 0\20133, 64,3% (45/70) com escores entre 4 e 7, e 73,7% (14/19) com escores > 7, proporcionando maiores taxas de positividade do que todos os outros métodos avaliados. Além disso, o rLci5 ELISA apresentou a maior persistência com relação à positividade do teste: 45,8% dos cães avaliados. CONCLUSÃO: Quatro testes diagnósticos para LVC foram comparados ao ELISA rLci5, que apresentou diagnóstico de infecção mais precoce e maior persistência de resultados positivos. Portanto, o uso de rLci5 em ensaios ELISA pode melhorar o desempenho do diagnóstico da LVC, diagnosticando cães infectados mais cedo que outros testes diagnósticos e tendo detecção persistente ao longo do curso da infecção.

Produção de anticorpos anti-LJM11/LJM17 como biomarcadores de exposição ao vetor em cães acompanhados em uma área endêmica para leishmaniose visceral

A leishmaniose visceral é transmitida pela picada do Lutzomyia longipalpis . A saliva do vetor é inoculada no momento da picada, tendo papel importante na transmissão da Leishmania devido a presença de proteínas com propriedades farmacológicas que favorecem a infecção. Ainda não existem dados correlacionando o desenvolvimento de anticorpos contra as proteínas da saliva do vetor com o perfil de resistência e susceptibilidade na Leishmaniose Visceral canina (LVC).