Dinâmica e diversidade de Leptospira spp. de amostras ambientais e suas implicações na transmissão de leptospirose em humanos

INTRODUÇÃO: A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias do gênero Leptospira. Acomete mais de um milhão de pessoas anualmente no mundo, causando aproximadamente 60.000 óbitos. As populações urbanas vulneráveis e carentes de infraestrutura e saneamento básico são as principais afetadas por essa doença. Nestes ambientes, a transmissão ocorre a partir da exposição ao meio ambiente contaminado por Leptospira. Estudos prévios demonstraram a presença de espécies de Leptospira em fontes ambientais, como solo e água de esgoto. Entretanto, são limitadas as informações sobre a dinâmica e diversidade de Leptospira patogênica em diferentes fontes ambientais de áreas urbanas. Muitos estudos são voltados à análise de dados epidemiológicos e de soroprevalência em animais. Porém, a maioria desses estudos leva pouca consideração sobre os determinantes ambientais e co-circulação de diferentes sorogrupos/sorovares. OBJETIVOS: O presente estudo teve como objetivos avaliar a presença, diversidade e dinâmica de espécies de Leptospira em diferentes fontes ambientais, caracterizar os parâmetros físicos e químicos ambientais associados à Leptospira em matrizes aquáticas e caracterizar o perfil epidemiológico de indivíduos com presença de anticorpos anti-Leptospira em cinco comunidades urbanas carentes da cidade de Salvador-Ba, que apresentam o sanemaneto básico precário. MATERIAL E MÉTODO: As coletas ambientais de água de esgoto, empoçada e solo foram realizadas no Bairro de Pau da Lima. A partir das análises em ambiente, demonstramos que a água de esgoto, água empoçada e solo são reservatórios de Leptospira. RESULTADO: Encontramos 36% (121/335) e 34% (115/250) de amostras ambientais positivas para Leptospira por qPCR nas amostras de água de esgoto e empoçada, respectivamente. Encontramos uma maior presença e concentração de DNA de Leptospira no período de alta precipitação, indicando que a chuva tem pap papel importante na dispersão e manutenção da bactéria. Nossos resultados também mostraram que fatores físico-químicos como SDT (Sólidos Totais Dissolvidos), salinidade e pH estão associados à presença e concentração da bactéria no ambiente. Utilizando a técnica de isolamento identificamos uma diversidade de espécies de Leptospira, foram 52 isolados pertencentes a três clados: patogênica, intermediária e saprofíticas. Resultados do nosso inquerito sorológico com 3010 residentes das comunidades urbanas: Alto do Cabrito, Marechal Rondon, Nova Constituinte, Rio Sena e Pau da Lima evidenciamos padrões epidemiológicos específicos associados à transmissão dos sorovares Copenhageni e Cynopteri. A maior soroprevalência de Leptospira sorovar Cynopteri foi para os indivíduos >45 anos de ambos os sexos, que tem exposição ocupacional, anda descalço e apresenta gatos no peridomicílio. A transmissão de Copenhageni foi mais presentes em residentes do sexo masculino e nos indivíduos que vivem em domicilio próximo ao esgoto aberto, sendo que modificações na estrutura do domicílio como elevação no piso e material da parede (concreto e tijolo) são fatores de proteção para a transmissão. CONCLUSÃO: Nossos dados apontam a necessidade de estudos relacionados a outros reservatórios animais que podem estar associado ao sorovar Cynopteri. O estudo permitiu prover uma visão integrada do ciclo de transmissão de leptospirose, na perspectiva de saúde única (\2015one health\2016). Sendo assim, esses dados podem auxiliar no desenvolvimento de estratégias mais efetivas de prevenção da doença.

Leptospira em mama e leite de Rattus norvegicus de áreas urbanas: possível via de transmissão vertical?

A leptospirose é uma zoonose distribuída globalmente causada por bactérias do gênero Leptospira. Rattus norvegicus é o principal reservatório de Leptospira em comunidades urbanas do Brasil e em outros países. As vias de infecção por Leptospira nas populações de roedores são desconhecidas. O objetivo deste trabalho foi identificar a presença de Leptospira em mama e leite como indicadores da transmissão vertical em R. norvegicus. As capturas de roedores foram realizadas em 2013 e 2014 em uma comunidade urbana de Salvador, Brasil. Nós pesquisamos a presença de Leptospira na mama, leite e rins de fêmeas em lactação utilizando testes de Imunofluorescência (IFA), Imunohistoquímica (IHQ), qPCR e exame no microscópio eletrônico de varredura (MEV). Nós examinamos 24 ratas em lactação. Todas as fêmeas foram positivas no rim em pelo menos uma das técnicas utilizadas. 18/24 (75%) foram positivas no leite por IFA e 04/28 (17%) foram confirmadas por qPCR. Na mama 16/24 (67%) ratas foram positivas por IFA ou IHQ. Observamos a presença de Leptospira em 1/4 ratas no exame com MEV. Na mama foram encontradas Leptospira em áreas sem ou com alterações patológicas. A presença de Leptospira na mama (67%) e no leite (75%) sugere que ocorra transmissão vertical pela amamentação nas populações urbanas de R. norvegicus. Estes achados precisam ser confirmados por estudos experimentais. A caracterização das vias de transmissão e manutenção de Leptospira é fundamental para entender a dinâmica do patógeno nos reservatórios, permitindo o desenvolvimento de novos modelos preditivos de risco para leptospirose em roedores e em seres humanos

Avaliação da diversidade de Leptospira patogênica em solo e água de esgoto de uma área urbana de elevada transmissão de leptospirose

A leptospirose é uma zoonose relevante para a saúde pública, afetando mais de um milhão de casos a cada ano no mundo. As leptospiras colonizam os rins de animais reservatórios e são excretadas vivas no ambiente, principalmente pela urina. O ambiente é a principal forma de transmissão indireta. O objetivo deste trabalho foi isolar bactérias do gênero Leptospira em amostras ambientais (esgoto e solo) de uma área urbana endêmica, classificando o sorogrupo representante. Foram coletadas 10 amostras (6 de esgoto e 4 de solo) no bairro de Pau da Lima, Salvador-Ba, em abril de 2016. Em laboratório, as amostras foram filtradas com filtro de seringa de 0,22 µm e adicionadas em meio de cultura EMJH, contendo 100 µg/mL, 200 µg/mL e 700 µg/mL do antibiótico 5-Fluorouracil (5-FU). As amostras foram incubadas em estufa a 29°C durante dois meses. A observação das culturas foi feita através do microscópio de campo escuro, com objetiva de 20x. Foi realizado o isolamento das culturas de bactérias com morfologia helicoidal, compatíveis com o gênero Leptospira, em placa com meio EMJH sólido até obtenção de uma cultura pura. As culturas isoladas de Leptospira foram submetidas à extração de DNA e em seguida ao seqüenciamento genético, com base na análise filogenética de rRNA 16S. As sequências foram corrigidas usando BioEdit 7.2.5 (Ibis Biosciences) e comparadas utilizando BLAST com as sequências disponíveis no NCBI. Foram identificadas as bactérias L. kmetyi (patogênica) e L. idonii (saprofítica) nas amostras de solo. Já nas amostras de esgoto, foram encontradas L. idonii e L. yanagawae, ambas saprofíticas. As três concentrações do 5-FU foram semelhantemente eficazes na inibição dos contaminantes. As amostras ambientais do Bairro de Pau da Lima foram positivas para Leptospira saprofíticas e patogênicas, ressaltando a importância da caracterização ambiental das bactérias deste gênero para a compreensão dos riscos de transmissão aos humanos e animais.

Avaliação da atividade neutralizante do soro de indivíduos residentes em área endêmica para leptospirose

O ciclo de transmissão da leptospirose envolve a interação entre reservatórios animais, um ambiente favorável e grupos humanos suscetíveis. Dentro da resposta imune, a atividade dos anticorpos neutralizantes pode estar entre os fatores que contribuem com suscetibilidade individual. O Teste de Inibição do Crescimento de Leptospiras (TICL) in vitro detecta a presença de anticorpos neutralizantes que reagem contra antígenos de culturas vivas de leptospiras inibindo o crescimento da bactéria. O Teste de Microaglutinação Microscópica (MAT) detecta a presença de anticorpos aglutinantes e é o teste padrão ouro no diagnóstico da leptospirose. O objetivo deste trabalho foi avaliar se o soro de indivíduos residentes em área endêmica para leptospirose é capaz de inibir o crescimento de leptospiras in vitro e se existe relação com títulos da MAT. Foram utilizadas 21 amostras de soro coletadas de indivíduos residentes em área endêmica para leptospirose em Salvador-Ba. As amostras foram testadas para MAT e para o TICL, utilizando a cepa L1 130 sorogrupo Icterohaemorrhagiae. Para TICL foram selecionadas três amostras com títulos de MAT= 0, 100, 400, 1600 e 6400. Os soros em teste foram inoculados em meio com cultura de leptospiras vivas e soro de coelho; após cinco dias de incubação foi verificada inibição do crescimento. Entre as amostras de soro com MAT=0 nenhuma inibiu o crescimento das leptospiras; entre os soros com MAT=100, 66% inibiram o crescimento na diluição de 1:2, e 34% na diluição de 1:8; entre os soros com MAT=400, 66% inibiram o crescimento das leptospiras na diluição de 1:4, e 34% na diluição de 1:8; entre os soros com MAT=1600 e MAT=6400, 33% inibiram o crescimento na diluição 1:8, 33% inibiram o crescimento em 1:16, e 33% inibiram o crescimento em 1:32. Nossos achados indicam que há inibição do crescimento de leptospiras em soro de indivíduos residentes em área endêmica para leptospirose e que há relação entre os títulos da MAT e o potencial de inibição do soro.

Incidência de leptospirose em uma comunidade carente de Salvador, Bahia

A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira, divididas em 11 espécies e mais de 200 sorovares. A infecção causada por Leptospira varia de casos assintomáticos a uma doença febril aguda. O objetivo do estudo foi descrever a incidência de infecção por Leptospiras e a diversidade de sorovares envolvidas na transmissão desta zoonose em uma comunidade carente de Salvador. De janeiro de 2013 a abril de 2014, 03 inquéritos sorológicos foram realizados. As amostras de sangue coletadas foram encaminhadas para análise laboratorial utilizando o teste de microaglutinação (MAT), com uma bateria de 7 sorovares (IcterohaemorragiaeL1-130, Icterohaemorragiae M20, Canicola H Ultrecht, Patoc 1, Autumnalis Akiyami A, Ballum Mus 127 e Cynopteri 3522C). Foram considerados confirmados, os participantes que apresentaram soroconversão ou aumento de 4 vezes no título da MAT. Nós identificamos que n=258 (21%) dos 1.226 residentes inclusos que participaram de todos os seguimentos, apresentavam evidência sorológica para infecção prévia pela Leptospira. Nos inquéritos seguintes, a taxa de confirmação foi de 11% (n=138) e 15% (n=190). A incidência de leptospirose por soroconversão foi de 10% e pelo aumento de 4 vezes no título da MAT foi de 2%. A cepa predominante foi a L1-130 (65%), foram considerados positivos para mais de uma cepa (12%) e para a cepa 3522C (3%). Conclui-se que a incidência de leptospirose é considerada significativa na população estudada e que mesmo em casos assintomáticos há uma predominância para a cepa L1-130. Entretanto, chama a atenção a porcentagem de casos positivos pela cepa 3522C, um sorovar considerado não patogênico e para o qual não se conhece o reservatório em ambiente urbano. Estes achados indicam a necessidade do estudo da diversidade de sorovares circulantes no ambiente urbano assim como a necessidade de investigar se a cepa 3522C está envolvida na infecção de casos graves de leptospirose.

Curva da Incidência de Casos de Microcefalia durante a Epidemia do Vírus da Zika

No ano de 2015, uma epidemia do vírus Zika e posterior aumento na incidencia de microcefalia no Brasil, assumiu proporção mundial. Em dezembro de 2015, foi iniciada uma vigilância sentinela com a finalidade auxiliar a identificação e diagnóstico dos casos suspeitos de microcefalia na principal maternidade de Salvador, Bahia, o Hospital Geral Roberto Santos. O presente estudo teve como objetivo caracterizar o surto de microcefalia, avaliando o aumento na incidência dos casos. Durante a vigilância, foram coletados dados demográficos de todos os recém-nascidos no período julho de 2013 - março de 2016. Estes dados foram coletados retrospectivamente (período junho de 2013 - novembro de 2015) e prospectivamente (período dezembro de 15 - março de 2016), para geração da curva associada ao início do surto de microcefalia. Adicionalmente, os casos foram classificados seguindo as definições de casos suspeitos de microcefalia do Ministério da Saúde do Brasil (MS) e do Consórcio Internacional Fetal e Neonatal para o século 21 (INTERGROWTH-21st) para comparação. Foram registrados 6.433 nascimentos no período, dos quais 17% preencheram a definição de casos suspeito do MS comparado a 7% de acordo com o INTERGROWTH-21st. Observamos um aumento na proporção de nascimentos com microcefalia nos meses de outubro a dezembro de 2015 (29%, 17% e 23% pela definição do MS e 12%, 14% e 17% pela definição do INTERGROWTH-21st, respectivamente para os meses citados), quando comparado com a proporção antes do surto (6% MS e 2% INTERGROWTH-21st). O acompanhamento do histórico dos casos permitiu identificar que o ponto de aumento dos casos de microcefalia começou em abril de 2015, sugerindo que o vírus Zika foi introduzido anteriormente ao que foi previsto. Através dos dados prospectivos da vigilância, foi constatado que a definição do INTERGROWTH-21st é mais precisa, em comparação com a do MS.

Presença de Leptospira em Mama e Leite de Rattus Norvegicus Urbanos: Possível Via de Transmissão Vertical

Introdução: A Leptospira é o agente etiológico da leptospirose, uma zoonose que acomete anualmente mais de um milhão de pessoas no mundo. Modelos matemáticos, baseados no ciclo da transmissão de Leptospira nas populações de roedores reservatórios, têm sido recentemente desenvolvidos para predizer o risco em humanos. No entanto, as vias de infecção por Leptospira nas populações de roedores, requeridos por estes modelos, são desconhecidas.