Overexpression of TcNTPDase-1 Gene Increases Infectivity in Mice Infected with Trypanosoma cruzi.

Ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (NTPDases) are enzymes located on the surface of the T. cruzi plasma membrane, which hydrolyze a wide range of tri-/-diphosphate nucleosides. In this work, we used previously developed genetically modified strains of Trypanosoma cruzi (T. cruzi), hemi-knockout (KO +/−) and overexpressing (OE) the TcNTPDase-1 gene to evaluate the parasite infectivity profile in a mouse model of acute infection (n = 6 mice per group). Our results showed significantly higher parasitemia and mortality, and lower weight in animals infected with parasites OE TcNTPDase-1, as compared to the infection with the wild type (WT) parasites. On the other hand, animals infected with (KO +/−) parasites showed no mortality during the 30-day trial and mouse weight was more similar to the non-infected (NI) animals. In addition, they had low parasitemia (45.7 times lower) when compared with parasites overexpressing TcNTPDase-1 from the hemi-knockout (OE KO +/−) group. The hearts of animals infected with the OE KO +/− and OE parasites showed significantly larger regions of cardiac inflammation than those infected with the WT parasites (p < 0.001). Only animals infected with KO +/− did not show individual electrocardiographic changes during the period of experimentation. Together, our results expand the knowledge on the role of NTPDases in T. cruzi infectivity, reenforcing the potential of this enzyme as a chemotherapy target to treat Chagas disease (CD).

Acute experimental Trypanosoma cruzi infection: establishing a murine model that utilises non-invasive measurements of disease parameters.

Trypanosoma cruzi infection has a large public health impact in Latin American countries. Although the transmission rates via blood transfusions and insect vectors have declined sharply in the past 20 years due to policies of the Southern Cone countries, a large number of people are still at risk for infection. Currently, no accepted experimental model or descriptions of the clinical signs that occur during the course of acute murine infection are available. The aim of this work was to use non-invasive methods to evaluate the clinical signs of Balb/c mice infected with the Y strain of T. cruzi. The infected mice displayed evident clinical changes beginning in the third week of infection. The mice were evaluated based on physical characteristics, spontaneous activity, exploratory behaviour and physiological alterations. We hope that the results presented in this report provide parameters that complement the effective monitoring of trypanocidal treatment and other interventions used to treat experimental Chagas disease.

Absence of Fas-L aggravates renal injury in acute Trypanosoma cruzi infection.

Trypanosoma cruzi infection induces diverse alterations in immunocompetent cells and organs, myocarditis and congestive heart failure. However, the physiological network of disturbances imposed by the infection has not been addressed thoroughly. Regarding myocarditis induced by the infection, we observed in our previous work that Fas-L-/- mice (gld/gld) have very mild inflammatory infiltration when compared to BALB/c mice. However, all mice from both lineages die in the early acute phase. Therefore, in this work we studied the physiological connection relating arterial pressure, renal function/damage and cardiac insufficiency as causes of death. Our results show that a broader set of dysfunctions that could be classified as a cardio/anaemic/renal syndrome is more likely responsible for cardiac failure and death in both lineages. However, gld/gld mice had very early glomerular deposition of IgM and a more intense renal inflammatory response with reduced renal filtration, which is probably responsible for the premature death in the absence of significant myocarditis in gld/gld.

Impact of autologous whole blood administration upon experimental mouse models of acute Trypanosoma cruzi infection

Background: Autologous whole blood (AWB) administration is described as alternative/complementary medical practice widely employed in medical and veterinary therapy against infections, chronic pathologies and neoplasias. Our aim is to investigate in vivo biological effect of AWB using healthy murine models under the course of Trypanosoma cruzi acute infection. Methods: The first set of studies consisted of injecting different volumes of AWB and saline (SAL) into the posterior region of quadriceps muscle of healthy male Swiss mice under distinct therapeutic schemes evaluating: animal behavior, body and organ weight, hemogram, plasmatic biochemical markers for tissue damage and inflammatory cytokine levels and profile. To assess the impact on the experimental T. cruzi infection, different schemes (prior and post infection) and periods of AWB administration (from one up to 10 days) were conducted, also employing heterologous whole blood (HWB) and evaluating plasma cytokine profile. Results: No major adverse events were observed in healthy AWB-treated mice, except gait impairment in animals that received three doses of 20 L AWB in the same hind limb. AWB and SAL triggered an immediate polymorphonuclear response followed by mononuclear infiltrate. Although SAL triggered an inflammatory response, the kinetics and intensity of the histological profile and humoral mediator levels were different from AWB, the latter occurring earlier and more intensely with concomitant elevation of plasma IL-6. Inflammatory peak response of SAL, mainly composed of mononuclear cells with IL-10, was increased at 24 h. According to the mouse model of acute T. cruzi infection, only minor decreases ( 30%) in the parasitemia levels were produced by AWB and HWB given before and after infection, without protecting against mortality. Rises in IFN-gamma, TNF-alpha and...

Impact of autologous whole blood administration upon experimental mouse models of acute Trypanosoma cruzi infection

Autologous whole blood (AWB) administration is described as alternative/complementary medical practice widely employed in medical and veterinary therapy against infections, chronic pathologies and neoplasias. Our aim is to investigate in vivo biological effect of AWB using healthy murine models under the course of Trypanosoma cruzi acute infection. Methods: The first set of studies consisted of injecting different volumes of AWB and saline (SAL) into the posterior region of quadriceps muscle of healthy male Swiss mice under distinct therapeutic schemes evaluating: animal behavior, body and organ weight, hemogram, plasmatic biochemical markers for tissue damage and inflammatory cytokine levels and profile. To assess the impact on the experimental T. cruzi infection, different schemes (prior and post infection) and periods of AWB administration (from one up to 10 days) were conducted, also employing heterologous whole blood (HWB) and evaluating plasma cytokine profile. Results: No major adverse events were observed in healthy AWB-treated mice, except gait impairment in animals that received three doses of 20 µL AWB in the same hind limb. AWB and SAL triggered an immediate polymorphonuclear response followed by mononuclear infiltrate. Although SAL triggered an inflammatory response, the kinetics and intensity of the histological profile and humoral mediator levels were different from AWB, the latter occurring earlier and more intensely with concomitant elevation of plasma IL-6. Inflammatory peak response of SAL, mainly composed of mononuclear cells with IL-10, was increased at 24 h. According to the mouse model of acute T. cruzi infection, only minor decreases (< 30%) in the parasitemia levels were produced by AWB and HWB given before and after infection, without protecting against mortality. Rises in IFN-gamma, TNF-alpha and IL-6 were detected at 9 dpi in all infected animals as compared to uninfected mice but only Bz displayed a statistically significant diminution (p= 0.02) in TNF-alpha levels than infected and untreated mice. Conclusions: This study revealed that the use of autologous whole blood (AWB) in the acute model employed was unable to reduce the parasitic load of infected mice, providing only a minor decrease in parasitemia levels (up to 30%) but without protecting against animal mortality. Further in vivo studies will be necessary to elucidate the effective impact of this procedure.(AU)

Influência da agressividade paterna no desenvolvimento físico/emocional de camundongos Swis Webster em biotério

O comportamento de camundongos em biotério é um tema extenso com diversas abordagens a serem estudadas. Este animal apresenta um acelerado metabolismo e uma complexa rede de interações sociais que iniciam-se desde seu nascimento até a idade adulta. Os cuidados maternais são imprescindíveis para o desenvolvimento físico/ emocional entre os indivíduos desta espécie. Em nosso trabalho objetivamos avaliar a influência da agressividade paterna nos filhotes em sua infância, puberdade e possíveis consequências na idade adulta. Nossos resultados demonstram que ao desmame os filhotes que sofreram agressão (VF) apresentam peso menor que os indivíduos não agredidos (Har) e a média geral dos filhotes (MG). Na puberdade, apresentam um ganho de peso maior, equivalendo o peso corporal com as outras categorias, porém apresenta valores do Teste da Suspensão da Cauda (TSC) com maior imobilidade, quadro similar a depressão. Além disso, a cauda desses animais é menor e mais fina do que os demais animais. Na idade adulta, todos os grupos compostos pelos animais VF apresentam Padrão de Comportamento Agressivo (PCA) e estes animais estão caracterizados como subordinados-alvo na hierarquia. Desta maneira, a agressão paterna demonstra evidentes sinais de influência negativa no desenvolvimento físico/ emocional dos animais até a idade adulta. CEUA/FIOCRUZ: LW05/12.

Descrição por CLAE (HPLC) da concentração de norepinefrina, dopa mina e serotonina em diferentes regiões cerebrais de camundongos Swiss Webster altamente agressivos

O camundongo da linhagem Swiss Webster demonstra um variado e complexo comportamento individual e social. Na idade adulta, tendem a estabelecer a hierarquia de dominância (com presença de agressividade com intensidade variável) e buscam o territorialismo e a exclusividade para reprodução. Em 30% dos reagrupamentos de machos na idade adulta observamos a presença de indivíduos dominantes altamente agressivos. Nosso objetivo nesse trabalho e descrever a concentração de neurotransmissores como: a) Norepinefrina (NE); b) Dopamina (DA) e c) Serotonina (5-HT) nas respectivas regiões cerebrais: a) Amígdala; b) Corpo estriado, c) Hipocampo e d) Córtex pré-frontal. Realizamos essa dosagem por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em diferentes categorias como: AgR, altamente agressivos; AgD, agredidos e Har, harmônicos. Nossos resultados demonstram que no grupo AgR a concentração de DA está 85% mais elevada do que no grupo Har e que foi maior a diferença na relação 5-HT/DA na maioria das áreas estudadas. Em conclusão, o comportamento altamente agressivo dos camundongos Swiss Webster, machos e reagrupados na idade adulta está relacionado ao desequilíbrio dos neuro transmissores, principalmente da DA no córtex pré-frontal. CEUA/FIOCRUZ LW-5/12.

SBCAL/COBEA: 30 anos na defesa dos animais de laboratório

Os 30 anos de existência do Colégio Brasileiro de Experimentação Animal, atualmente chamada de Sociedade Brasileira de Ciência em Animais de Laboratório (SBCAL/ COBEA) estão retratados neste artigo. Lutando contra as adversidades físicas das instituições e a falta de conscientização da comunidade científica sobre a necessidade de modelos biológicos adequados para o ensino e a pesquisa, o fundador, Prof. Dr. Fernando Sogorb Sanchis, e os 12 presidentes da Sociedade que o seguiram, conseguiram implantar uma dinâmica sempre atualizada de capacitação profissional, conceitos de bem estar animal através de cursos, congressos e seminários.

Estudo da hierarquia de camundongos Swiss Webster através do uso de sistemas com gaiolas interligadas (SGI)

O camundongo em biotério é um animal social, agressivo e extremamente territorialista. As relações entre o indivíduo e o grupo assim como sua busca em acesso a reprodução e alimento promove a estruturação de uma ordem hierárquica. Esta hierarquia é classicamente associada a quem agride (dominante) e quem é agredido (subordinado). Através do uso do sistema de gaiolas interligadas (SGI), buscamos esclarecer a dinâmica desta estrutura e a posição do indivíduo dependendo do momento. Além disso, também podemos verificar as relações de afinidade entre os indivíduos e a caracterização do indivíduo em relação ao perfil de dominância/subordinação. Nossos resultados demonstram que os camundongos da linhagem Swiss Webster em biotério são capazes de formar relações de afinidade (fraternais) quando agrupados jovens e preferindo ficar entre seus semelhantes quando reagrupados na idade adulta. A dominância é realizada por apenas um indivíduo e sugerimos que o objetivo desta atitude seja o acesso exclusivo a uma determinada área e possivelmente ao alimento e acasalamento. Quando dividimos em duas categorias, o dominante protege seus semelhantes e agride prevalentemente os indivíduos da categoria contrária. Os subordinados podem variar entre os que buscam a dominância (disputantes) e os indivíduos que buscam não se envolver nos episódios agressivos (neutros). Há um indivíduo que sofre até 90% das atitudes agressivas do dominante, chamamos esta categoria como "subordinado alvo".

Redução do número de camundongos utilizados na obtenção de formas infectantes de Trypanosoma Cruzi através de imunossupressão com ciclofosfamida

A infecção experimental pelo Trypanosoma cruzi no Laboratório de Biologia Celular/ IOC é realizada através da obtenção da forma infectante (tripomastigotas sanguíneas) em camundongos. Em 2005, foram utilizados cerca de 250 animais por semana para alcançar o volume de 70x106 parasitas/ml. De acordo com os princípios éticos descritos para reduzir o número de animais utilizados em ensaios científicos, elaboramos um protocolo de imunossupressão com ciclofosfamida. Nosso objetivo foi estabelecer um protocolo para redução do número de camundongos utilizados, mantendo a quantidade de parasitas obtidos. A aplicação de 200 mg/kg de ciclofosfamida dois dias após a infecção reduziu o número de animais por semana em até 76%, mantendo o pico de parasitemia e a quantidade de parasitas. Assim, este estudo comprova a possibilidade e a eficácia da aplicação de novos protocolos que visem o bem-estar animal e principalmente a redução do número de animais. Nossos resultados demonstram a redução de até 3.317 camundongos por ano e a manutenção da quantidade das formas tripomastigotas infectantes em 25 parasitas x 106/ ml por semana. Certificado CEAU nº 20/08 FIOCRUZ