Epoxi-α-lapachona : uma nova perspectiva para quimioterapia das leishmanioses

O foco deste projeto é analisar os efeitos do epoxi-α-lapachona sobre Leishmania (Viannia) braziliensis e Leishmania (Leishmania) amazonensis. Inicialmente é proposto que promastigotas e amastigotas de ambas as espécies são afetadas pelo composto. A incubação com epoxi-α-lapachona levou a uma diminuição significativa no número de promastigotas de ambas as espécies em culturas, de forma dose e tempo dependente. A sobrevivência de amastigotas que habitam macrófagos humanos, também foi afetada pelo composto, tal como mostrado pelas variações do índice de endocitose. Na segunda fase deste trabalho, foi oportuno obter mais dados sobre a ação epoxi-α-lapachona em L. (L.) amazonensis. Este composto causa um drástico efeito interno em promastigotas e formas amastigotas após o contato na cultura, e em seguida, levando a morte de parasita com comprometimento da membrana plasmática como um evento tardio. Os ensaios realizados in vivo com infecção de camundongos BALB/c causada por L. (L) amazonensis mostram que 0,44 mM deste composto é capaz de causar diminuição da lesão de pata de 30,8 ± 2,6 mm2 para 24,9 ± 2,0 mm2, em comparação ao tratamento controle (glucantime = 28,3 ± 1,5 mm2 ). Na terceira fase deste trabalho foi avaliado um possível alvo molecular do epoxi-α-lapachona. Os ensaios enzimáticos realizados mostram que este composto pode agir como um inibidor de uma serino proteinase de 68 kDa da L. (L) amazonensis. Em concordância com os ensaios enzimáticos, as análises teóricas realizadas mostram que o epoxi-α-lapachona pode ligar no centro ativo de oligopeptidase B da L. (L) amazonensis. O conjunto dos resultados aqui apresentados indica que o epoxi-α-lapachona tem uma ação leishmanicida sobre as Leishmania spp em ambas as fases morfológicas dos parasitos. Os dados obtidos neste projeto agregam informações relevantes sobre o potencial de epoxi-α-lapachona para o tratamento das leishmanioses

Epítopos de linfócitos T CD8+ contidos na região COOH-terminal de cisteína proteinase B de Leishmania (Leishmania) amazonensis

Leishmania spp são modelos de parasitas intracelulares de macrófagos que apresentam uma série de peculiaridades adaptativas nesta fase do seu ciclo biológico. A nossa hipótese é que fragmentos peptídicos da região COOH-terminal das cisteínas proteinases B de Leishmania (Leishmania) amazonensis atuem como uma dessas peculiaridades, modulando a resposta imune do hospedeiro vertebrado. Nesse trabalho, propomos definir a região bioativa (fragmento peptídico indutor da resposta imune) de dois peptídeos descritos como imunomoduladores durante a infecção experimental por L. (L.) amazonensis. Utilizando o servidor online SYFPEITHI, a partir dos peptídeos P1 (VMVEQVICFD) e P6 (EFCLGGGLCL) foi possível triar sequências peptídicas (P6.1 FCLGGGLCL, P6.2 EFCLGGGLCL, P6.3 EFCLGGGL, P6.4 CLGGGLCL, P6.5 EFCLGGGLC, P6.6 FCLGGGLC, P1.7 VMVEQVICF, P1.8 VMVEQVICFD, P1.9 MVEQVICFD, P1.10 VEQVICFD) que apresentaram um potencial de ligação favorável (escore > 8) aos dímeros de H-2 (H-2Db, H-2Kd, H-2Kk e H-2Ld). Os epítopos preditos foram sintetizados quimicamente e utilizados em ensaios ex vivo e in vitro com as linhagens de camundongos C57BL/6 (H-2Db) e BALB/c (H-2Ld). Os ensaios de quantificação dos linfócitos T CD8+ com o dimeric, H2-Db:Ig e H2-Ld:Ig complexadas aos peptídeos previstos, indicaram a presença de clones deste tipo celular para todos os peptídeos previstos, exceto para o P6.5 na linhagem C57BL/6, nos linfonodos drenantes da infecção. A propriedade de induzir proliferação de linfócitos T CD8+ in vitro foi observada apenas para sete peptídeos previstos (P6.1, P6.3, P6.4, P6.5, P6.6 P1.8 e P1.10) nos ensaios com BALB/c e apenas dois epítopos (P1.7 e P1.10) nos ensaios com C57BL/6. Adicionalmente foram realizados ensaios de interação entre o H2-Db:Ig e H2-Ld:Ig e os peptídeos sintéticos, em tempo real, pela técnica de ressonância plasmônica de superfície. Os peptídeos testados com H-2Db (P6.1, P6.3, P6.4, P6.5, P6.6, P1.7, P1.8 e P1.10) e H-2Lb (P6.2, P6.3, P6.4, P6.5, P6.6 e P1.8 e P1.9) indicaram valores de Ka (~ 10+1-10+3 M-1 s-1) e de Kd ( ∼ 10-4 s-1 - 10-6 s-1) favoráveis para formar complexos com os dímeros H-2Db e H-2Lb em pH neutro. Os valores de G < 0 destes complexos (em ambos os haplotipos), sugeriram que os mesmos existam durante a resposta imune acarretada pela infecção por L. (L.) amazonensis em camundongos.