Variabilidade genética de marcadores RAPD-PCR e caracterização in silico de etiquetas de genes expressos (ESTs) de Lutzomyia longipalpis (diptera: psychodidae) / Genetic variability of RAPD-PCR markers and characterization in silico of express gene markers (EST) of Lutzomyia longipaipis (diptera: psychodidae)

ABSTRACT

A leishmaniose visceral é uma endemia de regiões de clima tropical e sub-tropical do mundo, acometendo milhares de pessoas a cada ano. Apresenta como agente etiológico a Leishmania chagasi, protozoário da familia Trypanosomatidade transmitido os seres humanos pela picada das fêmeas do flebotomíneo LUtzomyia longipalpis. A despeito de sua reconhecida importância epidemiológica, o número de trabalhos envolvendo a aplicação de técnicas de biologia molecular na análise deste inseto ainda é bastante reduzido. Neste trabalho, descreve-se a utilização das técnicas do RAPD-PCR e do seqüenciamento de genes expressos (ESTs) com o objetivo de identificar marcadores moleculares que possam ser utilizados tanto em estudos de genética de populações de L. longipalpis, quanto na identificação de genes que possam estar envolvidos nos processos que determinam a relaçãoi destes insetos com os agentes etiológicos que eles transmitem. Foram investigados os polimorfismos de 17 locos RAPD-PCR em 7 populações de L. longipalpis do Nordeste brasileiro. O grau de diferenciação genética entre as populações foi determinado a partir da estimativa dos índices de fixação Fst e 0 que evidenciaram a existência de um grau moderado de estruturação genética, decorrente do ioslamento geográfico entre elas, Paralelamente ao estudo da estrutura genètica das pouplações de L. longipalpis, também foram analisadas 116 etiquetas de digestivos de espécimes de L. longipalpis artificialmente infectados com L. chagasi. Do total de seqüências de insetos já descritas na literatura, com a maioria apresentando similaridade com genes de Drosophila melanogaster. O nível de redundância das ESTs foi relativamente baixo, com a maior parte das seqüências (87,67 por cento) sendo encontrada uma única vez, indicando um bom nível de representatividade da biblioteca estudada. Dentre os supostos produtos gênicos identificados, os relacionados com a síntese de proteínas apseguidos das proteínas ribossomais e enzimas digestivas, com ambas representando 8,57 por cento do total de seqüências analisadas. As informações produzidas neste trabalho demonstraram a viabilidade da utilização do seqüenciamento de genes expressos na identificação de genes da L. longipalpis, servindo como referencial para o estabelecimento de experimentos voltados para a caracterização in vivo dos produtos gênicos encontrados, a exemplo do que já vem sendo em outras espécies de insetos vetores.(AU)