Análise do processo de diferenciação celular de Trypanosoma cruzi através de hibridação em microarranjos de DNA: comparação de resultados obtidos com diferentes frações de RNA do parasita / Analysis of the process of cellular differentiation of Trypanosoma cruzi through hibridization in microarrangements of DNA: comparison of results gotten with different fractions of RNA of the parasite

ABSTRACT

O protozoário flagelado Trypanosoma cruzi, agente causador da doença de Chagas, é um parasita eucariótico notavelmente bem-sucedido, que infecta o homem em diversas áreas da América do Sul e Central. O ciclo de vida do T. cruzi é extremamente complexo e envolve a transformação, no intestino médio do inseto, de uma forma replicativa, não infectiva (epimastigota) em uma forma não replicativa, infectiva (tripomastigota metacíclico). As mudanças morfológicas e funcionais que ocorrem durante este processo (metaciclogênese) resultam de importantes mudanças na programação gênica do parasita. Para aperfeiçoar o conhecimento sobre a diferenciação do parasita e, particularmente, sobre o processo de metaciclogênese, nós temos feito uma análise sistemática dos genes diferencialmente expressos usando a tecnologia de microarranjos de DNA (DNA microarrays). Um biochip representativo de T. cruzi foi construído com seqüências de EST, obtidas dos bancos de dados públicos. Análises de agrupamento e buscas de BLAST para os 9919 ESTs de T. cruzi presentes no EMBL (Release 62.0) foram feitas utilizando o programa cap 3 (Huang & Madan 1999) resultando em 1.655 clusteres e 2.924 seqüências únicas. Estas seqüências foram amplificadas diretamente do genoma de T. cruzi Dm28c e distribuídas na superfície de lâminas de vidro, criando microarranjos que foram utilizados para avaliação do controle da expressão gênica neste parasita. A comparação de resultados de experimentos de hibridação competitiva entre amostras de RNA total e polissomal de T. cruzi Dm28c, extraídos de células epimastigotas (referência) e epimastigotas em diferenciação por 24 horas (teste) fortemente sugerem que uma mobilização polissomal específica desempenha importante papel na regulação da expressão gênica do parasita.(AU)