Bacillus subtilis BSA 170 trp-ura-:Un nuevo mutante nutricional con requerimientos absolutos de triptofano y uracilo exogenos para su crecimiento. / Bacillus subtilis BSA 170 trp-ura-:a new nutritional mutant with absolute requirements of exogen trypthophan and uracil for its growth

Se construyo un mutante nutricional de Bacillus subtilis que requiere triptofano y uracilo exogenos para su crecimiento.Dicho mutante, denominado Bacillus subtilis BSA 170 trp-ura-, fue obtenido por transformante extraido de B. subtilis PB "3308 ura" y seleccionado por replicas en medios nutricionalmente selectivos. Ademas, una poblacion de Bacillus subtilis BSA 170 trp -ura- es capaz de desarrollar competencia para transformacion cuando es tratada de acuerdo a la metodologia propuesta por Young y Spizizen. Los estudios de transformabilidad de los marcadores trp (triptofano) y ura (uracilo) demostraron que cada uno de ellos transforma eficientemente en presencia de ADN transformante extraido de B. subtilis PB 19, prototrofo, posibilitando su empleo como celulas receptoras en estudios posteriores

Influencia de diferentes derivados lácteos sobre el crecimiento de Listeria monocytogenes en medios selectivos / Influence of different dairy products on the growth kinetic of Listeria monocytogenes

Se estudió la influencia del añadido de crema de leche y leche parcialmente descremada sobre la cinética de crecimiento de Listeria monocytogenes en caldos de enriquecimiento para listerias, conteniendo diferentes concentraciones de acriflavina (15 y 7,5 mg/l). El crecimiento de Listeria monocytogenes en los caldos de enriquecimiento sufrió un retardo atribuible, al menos parcialmente, a la presencia de acriflavina. El añadido de crema de leche o leche parcialmente descremada al caldo de enriquecimiento que contiene 7,5 mg/l de acriflavina produjo un alargamiento de la fase de adaptación, pero las cosechas máximas alcanzadas a las 48 h no mostraron diferencias significativas. En presencia de 15 mg/l de acriflavina, se observó una pérdida inicial de la viabilidad de los cultivos, que fue potenciada por el agregado de crema de leche o leche parcialmente descremada al caldo de enriquecimiento. Además, la leche descremada produjo una disminución de la velocidad máxima de crecimiento que impidió alcanzar la cosecha máxima dentro de las 48 h. Los resultados obtenidos sugieren la necesidad de validar la metodología de recuperación de L. monocytogenes para cada producto, pues la eficiencia de recuperación podría ser afectada por la composición del mismo, sobre todo cuando la carga microbiana es baja (AU)

Biotipificación y caracterización fenotípica molecular de Bordetella bronchiseptica / [Biotyping and molecular phenotypic characterization of Bordetella bronchiseptica]

In the present study biochemical tests and outer membrane protein profile (OMP) capacity for typing Bordetella bronchiseptica field isolates were evaluated. The biochemical tests were performed by API 20NE system. OMP enriched fractions were obtained from cultures under virulent and modulated conditions and were analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). We have identified five patterns by differences in the bands in the 85-95 kDa region (alpha, beta, gamma, delta and epsilon) from virulent cultures; and three different patterns by the flagellin expressed isotype from modulated cultures (A: 40 kDa, B: 45 kDa, and C: 40 and 45 kD simultaneously). Isotypes alpha, beta and gamma were linked to isotpye A, isotype delta to B and C, and isotypes epsilon to B. There is no evident correlation between characterized isotypes and the origin of the isolate. Nitrate reduction was the unique variable biochemical characteristic, only observed in rabbit isolates. It was possible to differentiate seven groups with the traits included in the study. The capacity of discrimination of the traits analyzed using the Hunter and Gaston index was 0.829.

Bacillus subtilis BSA 170 trp- ura-: un nuevo mutante nutricional con requerimientos absolutos de triptofano y uracilo exógenos para su crecimiento. / [Bacillus subtilis BSA 170 trp- ura-: a new nutritional mutant with absolute requirements for exogenous tryptophan and uracil for its growth]

A new Bacillus subtilis mutant was prepared, with a double nutritional requirement for uracil and tryptophan. The mutant, designed Bacillus subtilis BSA 170 trp- ura-, was constructed by transformation method, acting B. subtilis strain PB 168 trp- as recipient and B. subtilis strain PB 3308 ura- as transforming DNA donor cells. The BSA 170 trp- ura- strain was selected by replication of transformed population on nutritionally selective media. Competence development induction and genetic markers transformability were tested. The new mutant was competent by Young and Spizizens methodology. Furthermore, both markers, uracil and tryptophan, may be transformed when B. subtilis BSA 170 trp- ura- competent cells are treated with transforming DNA isolated from B. subtilis PB 19, prototroph. Transformation frequency rate for each marker alone was far larger than that reached for both taken together.

Biotipificación y caracterización fenotípica molecular de Bordetella bronchiseptica. / [Biotyping and molecular phenotypic characterization of Bordetella bronchiseptica]

In the present study biochemical tests and outer membrane protein profile (OMP) capacity for typing Bordetella bronchiseptica field isolates were evaluated. The biochemical tests were performed by API 20NE system. OMP enriched fractions were obtained from cultures under virulent and modulated conditions and were analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). We have identified five patterns by differences in the bands in the 85-95 kDa region (alpha, beta, gamma, delta and epsilon) from virulent cultures; and three different patterns by the flagellin expressed isotype from modulated cultures (A: 40 kDa, B: 45 kDa, and C: 40 and 45 kD simultaneously). Isotypes alpha, beta and gamma were linked to isotpye A, isotype delta to B and C, and isotypes epsilon to B. There is no evident correlation between characterized isotypes and the origin of the isolate. Nitrate reduction was the unique variable biochemical characteristic, only observed in rabbit isolates. It was possible to differentiate seven groups with the traits included in the study. The capacity of discrimination of the traits analyzed using the Hunter and Gaston index was 0.829.

Profilaxis antimicrobiana sistemica y oral en cirugia colorrectal electiva.Comparacion. / Antimicrobial systemic and oral prophylaxis in elective colorectal surgery

En el presente estudio se ha evaluado la incidencia de infeccion postoperatoria en 68 pacientes sometidos a cirugia colorrectal electiva, comparando en forma prospectiva y al azar dos tipos diferentes de antibioticos profilacticos. Un regimen incluia neomicina-eritromicina por via oral y el otro clindamicina fosfato-lobramicina por via parenteral.Los 2 grupos de pacientes fueron similares en terminos de sexo, edad, enfermedad y tipos de operaciones.Se realizaron cultivos de la flora colonica o de los sitios de infeccion postoperatoria. Los niveles sericos de clindamicina fosfato y tobramicina fueron determinados por metodos microbiologicos. La incidencia de infeccion postoperatoria significativas entre los 2 regimenes con respecto a la frecuencia e importancia de infecciones parietales, peritoneales, septicemia y mortalidad y promedio de dias de internacion. Complicaciones toxicas significativas no se observaron. Se concluye que cualquiera de estas dos preparaciones pueden ser recomendadas indistintamente para la prevencion de infecciones post-operatorias en la cirugia colorrectal electiva

Viabilidad de Bacillus subtilis auxotrofos en ausencia de sus metabolitos esenciales. / [Viability of Bacillus subtilis auxotrophs in the absence of their essential metabolites]

The effect of tryptophan and uracil starvation on the viability of the transformant B. subtilis BSA 170 trp- ura- and its parent strains Bacillus subtilis PB 168 trp -C and Bacillus subtilis PB 3308 ura- was examined. These studies were performed at the conditions for competence development, during 16 hours. Our results showed that B. subtilis BSA 170 was resistant to tryptophan-less death during all the assay and was also resistant to uracil-less death during three hours. After this time, viability measurements revealed less colony forming units per milliliter, and decrease of the culture absorbances. The uracil-less death required the presence of tryptophan suggesting that protein synthesis is needed. The parental strains exhibit similar behavior. Bacillus subtilis PB 168 was resistant to tryptophan-less death and B. subtilis PB 3308 showed decrease of the viability after uracil starvation comparable to that of the transformant strain.

Selección de variantes Bvg- de Bordetella pertussis / Selection of Bordetella pertussis Bvg- variants

Las cepas virulentas (Bvg+) de Bordetella pertussis expresan numerosos factores de virulencia. Estos factores están regulados por el locus bvg en respuesta a estímulos ambientales, a través del proceso reversible de modulación antigénica. A su vez, mutaciones en el locus bvg originan variantes avirulentas (Bvg-) que no expresan factores de virulencia en ninguna condición de cultivo. En este trabajo hemos seleccionado variantes espontáneas Bvg- de B. pertussis Tohama I y 10536, potencialmente útiles para el estudio de marcadores de virulencia, utilizando como medios selectivos Stainer-Scholte agarizado suplementado con 1 o/o de Casamino-acids (SSA-CAS) y Jones-Kendrick con 0,20 microgramos/ml de eritromicina (JK-Ery). Paralelamente hemos estudiado la eficiencia de recuperación de células de B. pertussis Tohama 1, 10536 y 40103 (cepas Bvg+) y de la cepa Bvg- 347 (control del fenotipo avirulento) en SSA-CAS y en Steiner-Scholte agarizado (SSA), y analizado el fenotipo de las células recuperadas a partir de ellos. Para la caracterización fenotípica se utilizaron los siguientes marcadores de fase virulenta: producción de hemólisis, producción de hemaglutininas y perfiles de proteínas de fracciones enriquecidas en membrana externa. Las tres cepas Bvg+ ensayadas mostraron diferente comportamiento en estos medios. B. pertussis Tohama 1 y 10646 no crecieron en SSA, mientras que la eficiencia de recuperación en el medio SSA-CAS fue inferior al 0,001 o/o, obteniéndose variantes Bvg- estables de la cepa Tohama 1, en cambio la cepa 10536 sufrió el fenómeno de modulación, ya que recuperó el fenotipo virulento al ser subcultivada en Bordel-Gengou. El medio JK-Ery permitió seleccionar variantes Bvg- estables de B. pertussis Tohama 1 y 10536. B. pertussis 40103 mostró alta eficiencia de recuperación en SSA y SSA-CAS y retuvo el fenotipo virulento en todos los medios ensayados. Por otra parte, B. pertussis 347, a pesar de ser avirulenta, presento una eficiencia de recuperación pobre en SSA y un crecimiento escaso en JK-Ery, corroborando que no todas las cepas Bv- adquieren la capacidad de crecer en medios que resultan inhibitorios para muchas cepas virulentas (AU)