RESUMEN
OBJECTIVE: To investigate the functions of Fibroblast Growth Factor Receptor-2 (FGFR2) at different stages of cell differentiation. The engineered murine embryonic stem (ES) cells with conditional knockout of FGFR2 were developed depending on Cre-loxP. METHODS: Cre-loxP system was used in a conditional targeting vector. The competent AM-1 bacteria, which expressed Cre-recombinase, was used to confirm the Cre-mediated deletion of the floxed exons 7 and 8 of FGFR2. The targeting vector was electroporated into the ES cells, and the transfected ES cells were screened with G418 and Ganciclovir. Finally, the ES clones with correct targeting events were identified by Southern Blot and PCR. RESULTS: The targeting vector with conditional knockout of murine FGFR2 was successfully constructed andconfirmed by PCR and digesti on analysis in bacteria. 86 ES clones were collected by selective culture with G418 and Ganciclovir. Four of the 86 ES clones were found containing the targeting gene sequence in genomic DNA proved by Southern Blot with a 5-end flank probe. Two of the four ES clones had the correct targeting events that included the insertion of the targeting gene sequence in genomic DNA and were checked by Southern Blot with a 3-end flanking probe. Finally, the insertion of loxP (loxP3) between exons 8 and 9 in genomic DNA was identified in one of the two ES clones by Southern Blot and PCR.CONCLUSION: FGFR2 conditional knockout depending on Cre-loxP can be successfully used in ES cells.(AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Estructuras Embrionarias/citología , Células Madre Embrionarias/metabolismo , Marcación de Gen , Genoma/genética , Vectores Genéticos/genética , Secuencia de Bases , Integrasas/genética , Integrasas/metabolismo , Datos de Secuencia Molecular , Recombinación Genética , Mapeo Restrictivo , Análisis de Secuencia de ADNRESUMEN
En este trabajo se describe la realización de un mapeo del genoma del parásito causal de la enfermedad de Chagas, el Trypanosoma cruzi, hibridando una genoteca construída en cósmidos y grillada en filtros de alta densidad, utilizando como sondas clones de AND copia provenientes de una genoteca de expresión en epimastigotes. Se muestra además la correlación de secuencias superpuestas de cósmidos (contigs) con bandas cromosomales del parásito. Utilizando estas mismas genotecas generadas por el Proyecto Genoma de T. cruzi, se caracterizó un nuevo miembro de la familia Tc 13 de la superfamilia de antígenos de superficie de tripomastigotes. A partir de un clon de la cepa Tulahuén stock. Tul2, con homología con estos antígenos, se secuenció y caracterizó el gen completo en la cepa de referencia CL clon CL Brener, encontrándose además homología con diferentes ESTs, lo cual posibilitaria conocer en su totalidad a esta familia de antígenos. (AU)
Asunto(s)
Animales , Estudio Comparativo , Trypanosoma cruzi/genética , Genoma , Antígenos de Superficie/genética , Antígenos de Protozoos/genética , Cariotipificación , Mapeo Cromosómico , Sondas de ADN , Secuencia de BasesRESUMEN
Se discute el potencial, las ventajas y las diferentes áreas de aplicaciones diagnósticas para varias categorías de secuencias repetitivas de ADN. Dado que todos los eucariotas se caracterizan por la redundancia genómica, estas técnicas sensibles, rápidas y comparativamente simples han revolucionado el campo del diagnóstico clínico experimental (AU)