Melaleuca quinquenervia (Cav.) S.T. Blake (Myrtales: Myrtaceae): Natural alternative for mosquito control.

OBJECTIVE: To evaluate an essential oil with larvicide, adulticide and growth inhibitory activity against Aedes aegypti, Aedes albopictus and Culex quinquefasciatus mosquitoes, of medical importance. METHODS: Standardized methodology by WHO was used to determine the levels of susceptibility of mosquito larvae exposed to the essential oil. To evaluate the adulticide activity with the essential oil at different doses, bottles were impregnated according to the methodology CDC. To determine the development inhibitory activity of Melaleuca quinquenervia (M. quinquenervia) oil in three mosquito species, third instar larvae were exposed to the LC50 and LC90 dose (calculated for each population) of M. quinquenervia oil in glass containers with a capacity of 500 mL. After 24 h exposure, the dead larvae were discarded. The mortality of larvae and pupae were recorded on a daily basis. RESULTS: The calculated LC50 indicates an order of effectiveness of preferential oil for Culex quinquefasciatus (LC50 = 0.0021%), Aedes aegypti (LC50 = 0.0047%) and Aedes albopictus (LC50 = 0.0049%). CONCLUSIONS: The adulticide activity was achieved with impregnated bottles at 40 and 50 mg/mL with the three mosquitoes species. In larvae, a growth inhibition was detected when exposed to sublethal doses. The results indicate that M. quinquenervia is a plant with promising environmentally sustainable source for vector control.

Estado de la resistencia a insecticidas en Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) del municipio Pinar del Río / Situation of resistance to insecticides in Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) from Pinar del Rio municipality

Introducción: el programa de control de Aedes aegypti (Linnaeus) (Diptera: Culicidae) en Cuba utiliza temefos como larvicida y piretroides como adulticidas, aunque el organofosforado clorpirifos ha sido utilizado esporádicamente. Conocer el nivel de resistencia a estos insecticidas es esencial para lograr un control efectivo de esta especie. Objetivo: determinar el nivel de resistencia a insecticidas en su grado técnico y en sus formulaciones comerciales en Ae. aegypti de Pinar del Río. Métodos: una cepa de Ae. aegypti del Área de Salud Raúl Sánchez, Pinar del Río, fue evaluada a través de los bioensayos de la Organización Mundial de la Salud para determinar la susceptibilidad en larvas al organofosforado temefos en su formulación técnica. Se evaluaron además tres formulaciones granuladas de temefos (Abatex-G1, Biolarv G-1 y Temefar G-1). En el estado adulto se determinó el nivel de susceptibilidad a los insecticidas piretroides: cipermetrina, deltametrina, lambdacialotrina y al organofosforado clorpirifos, en su formulación técnica. Además se evaluaron algunos en su formulación comercial: Galgotrin 25 EC (cipermetrina), Aqua K-Otrina 2 EW (deltametrina) y Clorcide 44 EC (clorpirifos). Resultados: en larvas, se encontró alta resistencia a temefos, en su formulación técnica, y con los productos en su formulación comercial, se observó una efectividad del 100 por ciento, con recambio diario de agua, de hasta 20 días para Temefar G1, 18 días para Biolarv G1 y 12 días para Abatex G1. En los ensayos de adultos, la cepa resultó susceptible a cipermetrina, deltametrina y clorpirifos, y resistente a lambdacialotrina. Con respecto a las tres formulaciones comerciales evaluadas, solo se observó resistencia a Aqua K-Otrina 2 EW. Conclusiones: el uso de estrategias de control integrado de Ae. aegypti se hace necesario para disminuir la frecuencia de uso de temefos, y así recuperar la efectividad de este insecticida. Además, se evitaría la aparición de resistencia a productos adulticidas que aun mantienen su efectividad para el control efectivo de esta especie en la zona de estudio(AU)

Introduction: the control program of Aedes aegypti (Linnaeus) (Diptera: Culicidae) in Cuba uses temephos as larvicide and pyrethroids as adulticide although the organophosphorate chlorpyrifos has been barely used. The level of knowledge about resistance to insecticides is essential to effectively control this species. Objective: to determine the level of resistance to insecticides of Ae. aegypti from Pinar del Rio in its technical aspect and in commercial formulations. Methods: one Ae. aegypti strain from the health area Raul Sánchez in Pinar del Rio province was evaluated through the World Health Organization bioassays to determine susceptibility of larvae to temephos in its technical formulation. Additionally, three granulated formulations of temephos were evaluated (Abatex-G1, Biolarv G-1 and Temefar G-1). In the adult state, the level of susceptibility to pyrethroids called cypermethrin, deltamethrin, lambda cyhalothrine and to organophosphate chlorpyrifos in its technical formulation. Some of them were evaluated in its commercial formulation (Galgotrin 25 EC (cypermethrin), Aqua K-Otrina 2 EW (deltamethrin) and Clorcide 44 EC (chlorpyrifos). Results: it was found in larvae that the resistance to temephos was high in the technical formulation, but the commercial formulation showed an effectiveness rate of 100 percent., with daily change of water, up to 20 days for Temefar G1, 18 days for Biolarv G1 and 12 for Abatex G1. In the assays with adult vectors, the strain turned to be susceptible to cypermethrin, deltamethrin and chlorpyrifos and resistant to lambda cyhalothrin. Regarding the three evaluated commercial formulations, resistance to Aqua K-Otrina 2 EW was proved. Conclusions: the use of integrated control strategies for Ae. aegypti makes it necessary to reduce the frequency of use of temephos and to recover the effectiveness of this insecticide. Moreover, it will avoid the occurrence of resistance to adulticide products that are still effective for the control of this species in the study area(AU)

Genetic variability of Triatoma flavida and Triatoma bruneri (Hemiptera: Reduviidae) by RAPD-PCR technique.

The Triatominae (Hemiptera:Reduviidae) contains the principal and potential Chagas disease vectors present in Mexico, Central America and South America. Triatoma flavida and T. bruneri are Cuban species. These species are closely related according to morphology and were considered synonyms until 1981, when they were separated on the grounds of external characters of the body and the morphology of male genitalia. The present study seeks to analyze genetic polymorphism of T. flavida and T. bruneri populations using RAPD techniques, and to assess the genetic relationship between these species. Ten random primers were used to evaluate the genetic variability among species using RAPD-PCR. The genetic flow among them was calculated. The dendrogram based on calculated Jaccard distances showed two clearly distinguishable clusters which coincided with the studied species. Within each species, moderate genetic differentiation (Fst 0.05-0.15) and migration rates (N > 1) were found among populations, that reveal gene flow and genetic homogeneity. Between species, the Fst value showed a high genetic differentiation and the migration rate was insufficient to maintain genetic homogeneity, and confirmed the absence of gene flow between them. Our results confirm the genetic variability among T. flavida and T. bruneri species.

Genetic variability of Triatoma flavida and Triatoma bruneri (Hemiptera: Reduviidae) by RAPD-PCR technique / Variabilidad genética de Triatoma flavida y Triatoma bruneri (Hemiptera: Reduviidae) mediante la técnica de RAPD-PCR

The Triatominae (Hemiptera:Reduviidae) contains the principal and potential Chagas disease vectors present in Mexico, Central America and South America. Triatoma flavida and T. bruneri are Cuban species. These species are closely related according to morphology and were considered synonyms until 1981, when they were separated on the grounds of external characters of the body and the morphology of male genitalia. The present study seeks to analyze genetic polymorphism of T. flavida and T. bruneri populations using RAPD techniques, and to assess the genetic relationship between these species. Ten random primers were used to evaluate the genetic variability among species using RAPD-PCR. The genetic flow among them was calculated. The dendrogram based on calculated Jaccard distances showed two clearly distinguishable clusters which coincided with the studied species. Within each species, moderate genetic differentiation (Fst 0.05-0.15) and migration rates (N > 1) were found among populations, that reveal gene flow and genetic homogeneity. Between species, the Fst value showed a high genetic differentiation and the migration rate was insufficient to maintain genetic homogeneity, and confirmed the absence of gene flow between them. Our results confirm the genetic variability among T. flavida and T. bruneri species.

La subfamilia Triatominae (Hemiptera: Reduviidae) agrupa a los vectores principales y potenciales de la Enfermedad de Chagas, presente en México, Centroamérica y Sudamérica, Triatoma flavida y T. bruneri son especies autóctonas cubanas. Estas especies están muy relacionadas desde el punto de vista morfológico y por ello fueron consideradas sinonimas hasta el 1981, cuando fueron separadas teniendo en cuenta los caracteres externos del cuerpo y la morfología de la genitalia del macho. El presente trabajo pretende confirmar el polimorfismo genético entre las poblaciones selváticas de T. flavida y domiciliadas de T. bruneri utilizando la técnica de RAPD-PCR. Un total de 10 cebadores al azar fueron usados para evaluar la variabilidad genética entre las especies usando la técnica de RAPD-PCR, calculándose el flujo genético entre las especies. El dendrograma obtenido, basado en la distancia genética de Jaccard, mostró dos grupos que coinciden con las especies estudiadas. Dentro de cada especie estudiada se encontró una moderada diferenciación genética (Fst 0.05-015) y tasas de migración (N > 1) que revelan flujo genético y homogeneidad genética. Entre las especies estudiadas los valores de Fst muestran una alta diferenciación genética y tasas de migración insuficientes para mantener homogeneidad genética y confirman la ausencia de flujo genético entre ellas. Estos resultados confirman la variabilidad genética entre ambas especies.

Efectividad del tratamiento perifocal con Ficam (Bendiocarb) 80 WP en el control de Aedes aegypti en Santa Clara. Cuba / Effectiveness of perifocal application of Ficam (Bendiocarb) 80 WP in Aedes aegypti control in Santa Clara, Cuba

Objetivo: evaluar el efecto residual del insecticida Ficam (bendiocarb) 80 WP para el control de Aedes aegypti en el tratamiento perifocal. Métodos: se aplicó a 95 manzanas del área de salud XX Aniversario A, en Santa Clara. Villa Clara. De un total de 5 188 viviendas, 5 070 fueron tratadas con el insecticida a la dosis de 3 g/L de agua. En esta intervención que se efectuó de enero a julio de 2007, se rociaron 7 125 tanques bajos, 1 722 tanques elevados y 9 802 depósitos de otros tipos como tragantes, desagües, cisternas, vertederos, etc.; de igual manera se aplicó el tratamiento al lugar donde se encontraban colocados los tanques (trampa) y áreas periféricas. Resultados: en los 2 meses posteriores al tratamiento, no se encontraron depósitos tratados positivos a larvas de Aedes aegypti y solo 2 en el tercer mes, en el cuarto mes (julio) se observó un aumento de la positividad en los depósitos tratados. Conclusiones: de acuerdo con los resultados el Ficam 80 WP es efectivo en el control del mosquito Aedes aegypti, hasta 3 meses después de su aplicación, porque a partir del cuarto mes comienza a incrementarse la positividad en los depósitos tratados.

Objective: To evaluate the residual effect of insecticide Ficam (bendiocarb) 80 WP for the control of Aedes aegypti in the perifocal application. Methods: this product was applied in 95 blocks located in a health area located in Santa Clara, Villa Clara province. Of a total number of 5 188 dwellings, the insecticide was used in 5 070 of them at a dose of 3 g per litre. During this intervention that was carried out from January to July, 2007, 7 125 water tanks on the floor, 1 722 water tanks placed on the roofs and 9 802 other sites such as drainages, cisterns, outlets, etc were sprayed. Also the product was used where the tanks were placed and in surrounding areas. Results: Two months after the intervention, no treated water tanks were found to be positive to Aedes aegypti larvae; just 2 were positive on the third month and on the fourth month (July), more positive signs of Aedes aegypti presence were detected in treated tanks. Conclusions: According to the results achieved with Ficam 80 WP, it proved to be effective for the control of Aedes aegypti mosquitoes up to three months after its application, but on the fourth month, greater positivity to Aedes aegypti larvae began to be detected in treated tanks and water containers.

Optimization of random amplified polymorphic DNA techniques for use in genetic studies of Cuban Triatominae.

Random amplified polymorphic DNA (RAPD) technique is a simple and reliable method to detect DNA polymorphism. Several factors can affect the amplification profiles, thereby causing false bands and non-reproducibility of assay. In this study, we analyzed the effect of changing the concentration of primer, magnesium chloride, template DNA and Taq DNA polymerase with the objective of determining their optimum concentration for the standardization of RAPD technique for genetic studies of Cuban Triatominae. Reproducible amplification patterns were obtained using 5 pmoL of primer, 2.5 mM of MgCl2, 25 ng of template DNA and 2 U of Taq DNA polymerase in 25 microL of the reaction. A panel of five random primers was used to evaluate the genetic variability of T. flavida. Three of these (OPA-1, OPA-2 and OPA-4) generated reproducible and distinguishable fingerprinting patterns of Triatominae. Numerical analysis of 52 RAPD amplified bands generated for all five primers was carried out with unweighted pair group method analysis (UPGMA). Jaccard's Similarity Coefficient data were used to construct a dendrogram. Two groups could be distinguished by RAPD data and these groups coincided with geographic origin, i.e. the populations captured in areas from east and west of Guanahacabibes, Pinar del Río. T. flavida present low interpopulation variability that could result in greater susceptibility to pesticides in control programs. The RAPD protocol and the selected primers are useful for molecular characterization of Cuban Triatominae.

Optimization of random amplified polymorphic DNA techniques for use in genetic studies of Cuban triatominae

La técnica de ADN polimórfico amplificado al azar (RAPD) es un método simple para detectar el polimorfismo genético del ADN. Diferentes factores afectan los perfiles de amplificación lo que se manifiesta en la presencia de bandas falsas y en la reproducibilidad del ensayo. En nuestro trabajo analizamos los cambios de la concentración de cebador, ADN molde, cloruro de magnesio y de Taq ADN polimerasa con el objetivo de determinar su concentración optima, quedando optimizada la técnica del RAPD para su utilización en estudios genéticos de Triatomíneos cubanos. Empleando una concentración de cebador de 5 pmol, 2.5 mM de MgCl2, 25 ng de ADN molde y 2 U de Taq ADN polimerasa en 25 µL de reacción, se obtuvieron patrones de amplificación reproducibles. Un total de cinco cebadores al azar fueron usados para evaluar la variabilidad genética de T. flavida. Tres de ellos (OPA-1, OPA-2 y OPA-4) produjeron patrones distinguibles y reproducibles de triatomineos. El análisis numérico según la técnica de UPGMA usando el coeficiente de similitud de Jaccard a partir de las 52 bandas de amplificación de RAPD generadas por los cinco cebadores, fue usado en la construcción del dendograma. Se obtuvieron 2 grupos bien definidos según el análisis del RAPD, mostrando concordancia con el origen geográfico, las poblaciones capturadas en áreas del occidente y el oriente de Guanahacabibes, Pinar del Río, respectivamente. T. flavida presentó una baja variabilidad genética inter-poblacional y esto puede resultar en una mayor susceptibilidad al uso de insecticidas en los programas de control. La técnica de RAPD optimizada y los cebadores seleccionados son útiles para la caracterización molecular de Triatomíneos cubanos.

Comparación entre 5 métodos para la extracción de ADN de Triatomíneos: su utilización en la técnica de ADN polimórfico amplificado al azar (RAPD) / Comparison among 5 methods for the extraction of Triatominae DNA: its use in the random amplified polymorphic DNA technique

Se evaluó la aplicabilidad de 5 protocolos útiles para la extracción del ADN genómico de Triatomíneos, y se describió el método del acetato de potasio modificado, como un método con el que se obtiene un alto rendimiento y pureza del ADN en el menor tiempo y costo, para su utilización como molde en la técnica de ADN polimórfico amplificado al azar (RAPD [la cual es un método simple para detectar el polimorfismo genético del ADN]) y probablemente en otras técnicas moleculares basadas en la amplificación por la reacción en cadena de la polimerasa. La calidad del ADN constituye un elemento crucial para esta técnica, la cual necesita un método de extracción de ADN lo más estandarizado posible con el que se obtenga un ADN puro, no degradado, libre de ARN y de inhibidores de la reacción en cadena de la polimerasa: porque cambios en la pureza afectan los perfiles de amplificación y esto se manifiesta en la presencia de bandas falsas y en la poca reproducibilidad del ensayo.

The applicability of 5 protocols useful for the extraction of genomic DNA of triatominae was evaluated and the modified potassium acetate method was described as a method with which a high yield and purity of DNA is obtained in the shortest time and at the lowest cost to be used as a mold in the random amplified polymorphic DNA technique (simple method to detect the DNA genetic polymorphism) and probably in other molecular techniqeus based in the PCR amplification. The DNA quality is a crucial element for this technique, which needs a DNA extraction method as standardized as possible to obtain a pure non degraded DNA free of RNA and of PCR inhibitors, because changes in the purity can affect the amplification profiles and this is manifested in the presence of false bands and in the little reproducibility of the assay.

Presencia de pediculosis en conviventes con niños positivos a Pediculus capitis (Anoplura: Pediculidae) / Presence of pediculosis in people living with children positive to Pediculus capitis (Anoplura: Pediculidae)

In order to determine the frequency of pediculosis in persons living with children diagnosed as positive to Pediculus capitis in educational institutions of the "Carmelo" People's Council, the houses of 58 children who repeatedly had pediculosis from May to September, 1997 were visited. 14.54 of the 237 examined persons were positive (40 individuals). 82.5 were females. The mother was the most affected relative (32.5). 30 positive children were matched by age, sex and grade with 30 negative children. People living together with the cases had a higher frequency of pediculosis (12.4) than those living with the controls (1.8) (t = 3.49; p < 0.001). The examination and treatment, if necessary, of those persons living together with the school children with pediculosis was recommended.

Efecto de la resistencia a los insecticidas sobre algunos parámetros demográficos de 3 cepas de Culex quinquefasciatus (Diptera:Culicidae), en condiciones de laboratorio

Se estudiaron las tablas de vida en condiciones de laboratorio de 3 cepas de Culex quinquefasciatus: Slab, susceptible de referencia; Habana Vieja, presionada con cipermetrina hasta su cuarta generación; y Cotorro, procedente del terreno. Se encontró que los diferentes niveles de resistencia a insecticidas organofosforados y piretroides presentes en las cepas Cotorro y Habana Vieja no influyeron en la duración del período de desarrollo de los estadios inmaduros ni en la proporción sexual de los adultos emergidos, y ejercieron un efecto favorable y directamente proporcional sobre la supervivencia y longevidad de los adultos. Sin embargo, influyó de manera negativa e inversamente proporcional sobre la reproducción y el crecimiento poblacional de estas cepas. Se proporcionan datos de utilidad para el uso y manejo de insecticidas dentro de las estrategias de control de Culex quinquefasciatus, importante vector de la filariasis linfática.

The life tables of 3 strains of Culex quinquefasciatus were studied under laboratory conditions: Slab, susceptible to reference; Old Havana, treated with cypermethrin until its fourth generation; and Cotorro, from the field. It was found that the different levels of resistance to organophosphate insecticides and pyrethroids present in the Cotorro and Old Havana strains did not influence either on the duration of the period of development of the inmature stages or in the sexual proportion of the emerged adults, but they had a favorable and directly porportional effect on the survival and longevity of the adults. However, they exerted a negative and inversely proportional influence on the reproduction and population growth of these strains. Useful data for the use and management of insecticides within the strategics of control of Culex quinquefasciatus, an important vector of lymphatic filariasis, are provided.

Identificación de una fuente humana de alimentación de mosquitos mediante la técnica de coaglutinación / Identification of a human source for feeding mosquitoes by the coagglutination technique

Se describe la utilización de la técnica de coaglutinación para la identificación de una fuente humana de alimentación de mosquitos. La dilución de las muestras de sangre ingeridas en papel de filtro se hizo en 2 mL de una solución de cloruro de sodio al 0,85 por ciento. Se utilizó una suspensión de estafilococos sensibilizados con un suero normal de conejo como control negativo. La suspensión de Staphylococcus aureus sensibilizados con suero de conejo anti-proteínas plasmáticas humanas y suero de conejo anti-IgG humana discriminó bien entre sangre humana y no humana. No se observó aglutinación con el control negativo. Esta técnica resultó se sensible para identificar el 100 por ciento de las muestras de sangre humana llevadas al papel 24 h después de que los moquitos completaron su alimentación a una temperatura de 26 a 28ºC. En mosquitos alimentados y conectados en el campo, la prueba se comportó de forma satisfactoria, en consecuencia puede ser utilizada en trabajos de rutina en el campo. Los resultados mostraron la sensibilidad y especificidad de este método para la identificación de sangre humana ingerida por mosquitos

Ritmo hematofágico de Simulium quadrivittum loew, 1862 (Diptera: Simuliidae) / Hematophagic rate of Simulium quadrivittum loew, 1862 (Diptera: Simuliidae)

Se detectó una relación de la actividad hematofágica de Siumuliium quedrivittatum con la variación de la posición solar el norte de la loma "La Cañada" (21- 43- N y 82- 54'0), la zona central de Isla de la Juventud; se obtuvieron 2 parábolas que responden a las ecuaciones y=11.61 + 0,137 S+ (4,727) S* y y=17,6 + 0,415 S + (-9,495)S*, para los valores de la mañana y la tarde respectivamente. Se encontró una mayor actividad hematofágica promedio durante la tarde (U=25, p<0,05)

Algunas observaciones sobre los sitios de cría del Simulium Quadrivittatum Loew, 1862 (Diptera: Simuliidae) en Isla de la Juventud / Some observations on the breeding places of Simulium quadrivittatum loew, 1862 (Diptera: Simuliidae) in the Isle of Youth

Se señala la distribución de los sitios de cria encontrados en el sector septentrional de Isla de la Juventud durante los años 1982-1985, los cuales se clasificaron de acuerdo con sus características físicas. Se hicieron observaciones sobre el PH del agua, temperatura, presencia de peces, velocidad de la corriente, profundidad, contaminación y vegetación circundante

Estudio del horario de actividad hematofagica del Simulium quadrivittatum Loew (1862) (Diptera: Simulidae) en la Isla de la Juventud / Schedule of hematophagic activity of Simulium quadrivittatum, Loew (1862). (Diptera: Simulidae) in the Isle of Youth

Se presenta el horario de actividad hematofágica de Simulium quadrivittatum (Loew) en la Isla de la Juventud. Se informa que este simúlido mostró una curva bimodal en su actividad hematofágica; con un máximo a las 07:00 y otro a las 17:00 horas. Se relaciona este parámetro con los factores temperatura y humedad relativa