Mutacytin-1, a New C-Type Lectin-Like Protein from the Venezuelan Cuaima (Lachesis muta muta Linnaeus, 1766) (Serpentes: Viperidae) Snake Venom Inducing Cardiotoxicity in Developing Zebrafish (Danio rerio) Embryos.

Envenomation by the Venezuelan bushmaster snake (Lachesis muta muta) (Serpentes: Viperidae) is characterized by local and cardiac alterations. This study investigates the in vivo cardiac dysfunction, tissue destruction, and cellular processes triggered by Lachesis muta muta snake crude venom and a C-type lectin (CTL)-like toxin named Mutacytin-1 (MC-1). The 28 kDa MC-1 was obtained by molecular exclusion, ion exchange, and C-18 (checking pureness) reverse-phase chromatographies. N-terminal sequencing of the first eight amino acids (NNCPQ LLM) revealed 100% identity with Mutina (CTL-like) isolated from Lachesis stenophrys, which is a Ca2+-dependent-type galactoside-binding lectin from Bothrops jararaca and CTL BpLec from Bothrops pauloensis. The cardiotoxicity in zebrafish of MC-1 was evaluated by means of specific phenotypic expressions and larvae behavior at 5, 15, 30, 40 and 60 min post-treatment. The L. muta muta venom and MC-1 also produced heart rate/rhythm alterations, circulation modifications, and the presence of thrombus and apoptotic phenomenon with pericardial damages. Acridine orange (100 µg/mL) was used to visualize apoptosis cellular process in control and treated whole embryos. The cardiotoxic alterations happened in more than 90% of all larvae under the action of L. muta muta venom and MC-1. The findings have demonstrated the potential cardiotoxicity by L. muta muta venom, suggesting the possibility of cardiovascular damages to patients after bushmaster envenoming.

Valoración de la capacidad de almacenamiento en la Empresa de Suministros Médicos (EMSUNE) en Holguín, Cuba / Storage capacity evaluation of Medical Supplies Enterprise (EMSUME) in Holguín, Cuba

Introducción: en la actualidad, la logística empresarial es de vital importancia para el éxito de toda empresa. No obstante, existen disímiles restricciones que entorpecen el logro de sus objetivos, entre ellas, las capacidades de almacenamiento. Objetivo: analizar la gestión de almacenamiento, en la Empresa de Suministros Médicos (EMSUME) de Holguín, como contribución al incremento de la disponibilidad y oportunidad del arribo de los recursos, insumos, útiles y equipamiento necesario. Métodos: se realizó un estudio de los procedimientos disponibles, evaluar las capacidades de almacenamiento, tomando como base la literatura científica actual. Como resultado, se propone establecer un procedimiento integrador coherente, para emplear métodos y técnicas como: la revisión de documentos, entrevistas a directivos, observación directa, métodos de series de tiempos, relaciones causales, metaheurísticos, revisión bibliográfica, entrevista, tormenta de ideas, encuestas, técnicas de consenso y matriz OVAR (matriz de relación entre objetivos, variables, acciones y responsables). Resultados: se detectaron violaciones en los principios de almacenamiento como: productos almacenados en lugares inadecuados, deficiente organización en la planta de las naves y, una inadecuada tecnología de almacenamiento; por lo que se propusieron soluciones encaminadas a erradicar sus efectos negativos. Conclusiones: como principal contribución, destaca la nueva organización en la planta propuesta, que garantiza una utilización efectiva de sus capacidades; aunque todavía no alcanzan las capacidades necesarias, para certificar la disponibilidad de los recursos, insumos, útiles y el equipamiento necesario.

Introduction: nowadays, business and logistics are extremely important for every enterprise success. Nevertheless, performance constraints become obstacles, in this case of storage capacities. Objective: to analyze storage management at EMSUME, from Holguín, Cuba, for resources availability, input materials, tools, and equipment arrival opportunities. Methods: a research about procedures to accomplish storage capacity balance, using scientific current literature. As a result, a procedure for methods and techniques, such as: documents review, manager's interviews, direct observation, forecast methods like: time series, causal relations and meta-heuristic, bibliographic review, interview, brainstorming, surveys, consent techniques and OVAR Matrix (the relation between objectives, variables, actions and responsible), was proposed. Results: storage principles violations were detected. Unappropriated placed products, deficient layout and old storage technology, were proposed to find solutions for the adverse effects in the storage management. Conclusions: new layout stands, as a principal contribution. An effective capacity use, guarantee resources availability, input materials, tools and necessary equipment.

Carbonated water and necro-apoptotic cell death in chicken embrio low limb / Agua carbonatada y la muerte celular por necro-apoptosis en miembro inferior de embrión de pollo

Carbonated water is a fundamental part of many drinks and its effects have been studied in many pathological situations. However, cells and tissue damage as a consequence of carbonated water has not been the subject of extensive research. We assessed the short-term effects of soda on in vitro Hanging-drop culture of myoblasts and ex vivo lower limb of 8-day-old chicken embryo skeletal muscle tissue. Several groups weren designed: a) Control (Con-tyr), b) Carbonated water (Car), c) Coffe (Caf), and d) Cola beverage (Glu). The samples were observed with light microscopy and digital imaging analysis was performed. The ultra-structure of control and treated tissue were observed with electron microscopy. Immunohistochemistry techniques, such as terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick- end labeling (TUNEL), TACTS Blue Label (TdT Kits) of R&D Systems were used. The myoblasts monolayers treated with soda showed plenty of eosinophilics elements. The eosinophily corresponds to higher percentage of cell death. The muscular tissue of the low limb treated with carbonated water (Car) showed calcium phosphate and collagen decreases, 53,86% and 82,95% respectively and enlarged nuclei of a higher size, with an evident loss of the parallel arrangement and fragmented nuclei. Compared to control samples, the muscular disorganization was accompanied by a positive reaction of the apoptotic bodies on TACS, also a positive reaction to ApopTacg and another positive reaction for the metalloproteases in the inter fibrillar cartilage matrix. These changes were not significant in Tyrode's solution controls, Coffee and Cola beverage groups. The morphological outcome can be apoptosis, necrosis or a mixed phenotype, suggesting that the carbonated water toxic effect might be related to these cell death processes. Further research, exploring biochemical factors will be required to elucidate necro-apoptotic cell death induced by carbonated water.

El agua carbonatada constituye una parte fundamental en muchas bebidas y su efecto ha sido estudiado en muchas situaciones patológicas. Sin embargo, el daño celular y de tejido como consecuencia del agua carbonatada no ha sido claramente investigado. El presente trabajo evalúa el efecto agudo in vitro de la soda sobre mioblastos obtenidos por cultivos en gota pendiente y el efecto sobre tejido muscular esquelético in vivo del miembro inferior de pollo de 8 días de desarrollo. Cuatro grupos de embriones fueron seleccionados al azar: a) Control (Con-tyr), b) Agua Carbonatada o Soda Club (Car), c) Café (Caf) y d) Bebida de cola (Glu). Las muestras fueron observadas por microscopía de luz. El análisis de imágenes digitales fue realizado. La ultraestructura del tejido control y tratado fue observada con Microscopía Electrónica de Transmisión (MET). La determinación de apoptosis fue realizada a través de TUNEL y l TACS Blue Label. La actividad de metaloproteasa MMP-1 fue ensayada. La población de mioblastos tratados con Soda Club mostró un elevado número de elementos eosinofílicos interpretado como un elevado número de células muertas, a diferencia del control y el grupo tratado con cafeína y bebida de Cola. En el tejido muscular se determinó una reducción de fosfatos de calcio y fibras de colágeno en una proporción de 53,86% y 82,95% respectivamente, acompañada por un desarreglo de las fibras y núcleos fragmentados, con reacción positiva para cuerpos apoptóticos y metaloproteasas en la matriz interfibrilar. Los resultados sugieren que el efecto tóxico del agua carbonatada sobre células y tejido pudiera estar vinculado con procesos combinados de muerte celular como necro-apoptosis. Se sugiere una mayor exploración de los eventos moleculares para dilucidar la combinación de los procesos de muerte celular sugerida en el presente trabajo.

Excretion Products of Shigella dysenteriae and Apoptotic Cell Death on Chick Embryo Muscle Tissue / Producto de Excreción de Shigella dysenteriae y la Muerte Celular por Apoptosis en Tejido Muscular de Embrión de Pollo

The aim of this study was to evaluate the acute cell injury of excretion products present in culture filtrate from Shigella dysenteriae in both whole lower limb of chick embryo ex vivo and myoblasts cells developed in hanging-drop cultures in vitro. Three controls were defined: a) Tyrode's solution b) brain-heart broth infusion (CCC) and c) supernatant not toxigenic of E.coli 0157:H7. Shigella dysenteriae were culture for 24 hours and the excretion products were obtained after centrifugation of the culture. After lh of treatment, the morphologic changes in limbs treated with raw filtrate were evaluated through histopathological examination of sections stained with hematoxylin-eosin (H&E-stain) and Gomori's trichrome by image analysis techniques. Quantification of apoptotic cells was measured by an enzyme-linked immunoassay TUNEL. The morphological feature of apoptosis were evaluated in culture myoblasts. In contrast with controls, the longitudinal section on treated thigh of chick embryo limb-buds show atrophy muscle tissue, detachment of few fibers, 57,14% decrease in the number of cells, and loss of collagen substrate. Apoptotic index percent increase and mitotic index decrease in response to excretion products were observed, but were not significant. Membrane blebbing, vacuolation, small aggregates of chromatin around the nucleus and loss of cell adhesion were observed. Culture filtrate from Shigella dysenteriae produced cytotoxic effect on cell of muscle fibers with acute cell injuries suspected to be related to the apoptotic cell death.

El objetivo del presente trabajo ha sido evaluar el daño celular agudo generado por el producto de excreción de Shigella dysentenae sobre el tejido muscular del miembro inferior de embrión de pollo, así como sobre los mioblastos obtenidos a partir del cultivo de explantes de tejido muscular desarrollado en gota pendiente. Tres controles fueron definidos: a) solución de tiroide b) caldo de infusión cerebro-corazón (CCC), c) producto de excreción bacteriano no toxigénico de E. coli 0157:H7. El producto de excreción fue obtenido a partir de la centrifugación y filtrado del medio de cultivo de Shigella dysentenae con 24 horas de crecimiento. Luego de una hora de tratamiento, los cambios morfológicos del tejido muscular fueron evaluados a través del examen histopatológico, con técnicas de análisis de imágenes sobre cortes teñidos con hematoxilina-eosina (H&E) y Tricrómico de Gomori. El ensayo enzimático TÚNEL fue utilizado para evaluar el índice de apoptosis. Señales morfológicas de muerte celular fueron evaluadas en mioblastos en cultivo En contraste con los controles, el tejido muscular presentó signos de atrofia, con fibras desconectadas y pérdida del 57,14% del número total de células así como pérdida de la matriz de colágeno. Un incremento en el índice apoptótico y una reducción de índice mitótico fueron registrados. Esto último fue no significativo. Los mioblastos en cultivo presentaron signos morfológicos de apoptosis tales como protuberancias en la membrana, vacuolización, agregación de cromatina alrededor del núcleo y pérdida de la adhesión celular. Se concluye que el producto de excreción afecta al tejido muscular esquelético del miembro inferior de embrión de pollo e induce lesiones de toxicidad relacionadas con la muerte celular por apoptosis.

El producto de excreción de Shigella Dysenteriae induce cariólisis y calcificación en el tejido hepático de embrión de pollo ex vivo e in vitro / Product of excretion of Shigella Dysenteriae induces cariolisis and calcification in the hepatic fabric of chicken embryo

El objetivo de éste estudio fue caracterizar histológica y morfométricamente alteraciones "ex vivo" e "en vitro" del tejido hepático de embrión de pollo causadas por el producto de excreción de Shigella dysenteriae. El tejido hepático de embrión de pollo de 8 días de desarrollo, "ex vivo", y las células hepáticas cultivadas por la técnica de gota pendiente, "in vitro", fueron utilizados. Ambos sistemas fueron sumergidos en el producto de excreción obtenido a partir del sobrenadante del cultivo de la cepa Shigella dysenteriae tipo I. Tres controles fueron definidos: a) solución Tyrode, b) caldo de infusión de cerebro-corazón (CCC), c) producto de excreción no toxigénico de la bacteria E. coli O157:H7. Después de una hora de tratamiento los tejidos y las células fueron fijadas en formol zinc. Los hallazgos histológicos fueron obtenidos en cortes teñidos con Hematoxilina Eosina y Von Koss . Para llevar a cabo el análisis morfométrico se hizo uso de técnicas de morfología microscópica de análisis de imágenes con el programa ImagenJ versión 1.36. El tejido hepático de embrión de pollo "ex vivo" tratado con el producto de excreción de Shigella dysenteriae mostró, respecto al control: la pérdida en el arreglo de las células endoteliales, núcleos con pérdida del contenido nuclear, espacios sinusoidales de mayor tamaño y presencia de fosfatos de calcio sobre la región de las células endoteliales que recubren a la vena central. Las células hepáticas tratadas "in vitro" mostraron: forma estrecha, abundancia de vesículas de lípidos de mayor tamaño, reducción significativa del número de pixels por área nuclear sobre la escala de grises entre 85 y 168 e incremento de la región de los blancos sobre las escala de grises 169-255, respecto al control CCC, evidenciado a través del histograma.