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2.
Nat Biotechnol ; 38(6): 715-721, 2020 06.
Artículo en Inglés | MEDLINE | ID: mdl-32231335

RESUMEN

Mining the antibody repertoire of plasma cells and plasmablasts could enable the discovery of useful antibodies for therapeutic or research purposes1. We present a method for high-throughput, single-cell screening of IgG-secreting primary cells to characterize antibody binding to soluble and membrane-bound antigens. CelliGO is a droplet microfluidics system that combines high-throughput screening for IgG activity, using fluorescence-based in-droplet single-cell bioassays2, with sequencing of paired antibody V genes, using in-droplet single-cell barcoded reverse transcription. We analyzed IgG repertoire diversity, clonal expansion and somatic hypermutation in cells from mice immunized with a vaccine target, a multifunctional enzyme or a membrane-bound cancer target. Immunization with these antigens yielded 100-1,000 IgG sequences per mouse. We generated 77 recombinant antibodies from the identified sequences and found that 93% recognized the soluble antigen and 14% the membrane antigen. The platform also allowed recovery of ~450-900 IgG sequences from ~2,200 IgG-secreting activated human memory B cells, activated ex vivo, demonstrating its versatility.


Asunto(s)
Anticuerpos/genética , Secuenciación de Nucleótidos de Alto Rendimiento , Técnicas Analíticas Microfluídicas/instrumentación , Análisis de la Célula Individual , Animales , Antígenos/inmunología , Linfocitos B/inmunología , Vacunas contra el Cáncer/inmunología , ADN/análisis , ADN/genética , Secuenciación de Nucleótidos de Alto Rendimiento/instrumentación , Secuenciación de Nucleótidos de Alto Rendimiento/métodos , Humanos , Inmunoglobulina G/genética , Ratones , Análisis de la Célula Individual/instrumentación , Análisis de la Célula Individual/métodos
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