Diagnóstico molecular e frequência de anticorpos anti-Leishmania infantum chagasi em cães do município de Belém, Pará / Molecular diagnosis and frequency of anti-Leishmania infantum chagasi antibodies in dogs in Belém/Pará, Brazil

Visceral leishmaniasis is a disease whose etiological agent in Brazil is Leishmania infantum chagasi. Dogs are considered urban reservoirs of the disease, being an indicator of the human cases occurrence. The present study aimed to diagnose L. infantum chagasi infection in stray and owned dogs in Belém, Pará State, by polymerase chain reaction (PCR) and indirect immunofluorescence assay (IFA) using two different antigens. [...] These animals were divided into two groups: stray dogs captured by the Center for Zoonosis Control (Group A) and owned dogs (Group B). Sera were analyzed by IFA testing for IgG using two different antigens: 1) Bio-Manguinhos/Fiocruz antigen kit (Ag-PRO) containing promastigotes of Leishmania sp. (Complex Major-Like), 2) Instituto Evandro Chagas Antigen (Ag-AMA) consisting of amastigotes of L. infantum chagasi. The evaluation of the two antigens was performed considering positive the reactions above the 1:80 dilution. Already PCR was performed with DNA isolated from whole blood of animals and amplified with the primers RV1 and RV2. Of the 335 samples analyzed, 10.4% (35/335) were positive by IFA (Ag-PRO) and 0.9% (3/335) with the Ag-AMA. The distribution of positive samples is given as follows: Group A 14.8% (25/169) with Ag-PRO and 1.2% (2/169) with Ag-AMA; Group B 6% (10/166) with Ag-PRO and 0.6% (1/166) with Ag-AMA, being that all samples positive by IFA with Ag-AMA also reacted with Ag-PRO, and none of the samples detected DNA of L. infantum chagasi. The findings of this study indicate that Belém can still be considered non-endemic area for canine visceral leishmaniasis and the nature of the antigen influences the result of the IFA for the detection of anti-L. infantum chagasi antibodies in dogs, and the IFA using promastigotes of Leishmania major-like antigen should be used with caution as a confirmatory diagnostic on epidemiological studies in non-endemic areas.

A leishmaniose visceral é uma enfermidade cujo agente etiológico no Brasil é o protozoário Leishmania infantum chagasi. Os cães são considerados reservatórios urbanos da doença, sendo indicadores da ocorrência de casos humanos. O presente trabalho teve como objetivo diagnosticar a infecção por L. infantum chagasi em cães domiciliados e errantes do município de Belém, estado do Pará, através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), empregando dois antígenos distintos. [...] A avaliação dos dois antígenos foi realizada com as amostras reagentes a partir da titulação 1:80. Já a PCR foi realizada a partir do DNA extraído do sangue total dos animais e amplificado utilizando-se os iniciadores RV1e RV2. Das 335 amostras analisadas, 10,4% (35/335) foram reagentes na RIFI (Ag-PRO) e 0,9% (3/335) reagiram com o Ag-AMA. A distribuição das amostras positivas se deu da seguinte forma: Grupo A 14,8% (25/169) com Ag-PRO e 1,2% (2/169) com Ag-AMA; Grupo B 6% (10/166) com Ag-PRO e 0,6% (1/166) com Ag-AMA; sendo que todas as amostras positivas pelo teste de RIFI com o Ag-AMA também reagiram com o Ag-PRO e em nenhuma das amostras foi detectado o DNA de L. infantum chagasi. Os achados do presente estudo indicam que Belém ainda pode ser considerada área não endêmica para leishmaniose visceral canina e que a natureza do antígeno influencia no resultado da RIFI para a pesquisa de anticorpos anti-L. infantum chagasi em cães, sendo que a RIFI que utiliza formas promastigotas de Leishmania major-like como antígeno deve ser utilizada com cautela como método diagnóstico confirmatório em estudos epidemiológicos em áreas não endêmicas para LVC.

Revisão sobre a patogenia da leishmaniose tegumentar americana na Amazônia, com ênfase à doença causada por Leishmania (V. ) braziliensis e Leishmania (L. ) amazonensis / Revisiting the pathogenesis of the american tegumentary leishmaniasis in Amazonian, with emphasis to the disease due to Leishmania (V. ) braziliensis and Leishmania (L.) amazonensis

A patogenia da leishmaniose tegumentar americana (LTA) na Amazônia foi revisada à luz dos mais recentes aspectos associados ao espectro clínico, histopatológico e imunopatológico da doença causada por Leishmania (V.) braziliensis e Leishmania (L.) amazonensis. Esta revisão mostrou a existência de uma dicotomia entre as duas espécies de Leishmania e a resposta imune celular; enquanto a L. (V.) braziliensis mostra forte tendência em dirigir a infecção, a partir da forma central do espectro clínico-imunológico, a leishmaniose cutânea localizada (LCL), para o pólo imunológico hiperreativo, representado pela leishmaniose cutâneo-mucosa (LCM), com exacerbação da hipersensibilidade e perfil da resposta CD4 tipo-Thl, a L. (L.) amazonensis mostra o oposto, dirige a infecção para o pólo imunológico hiporreativo, representado pela leishmaniose cutânea anérgica difusa (LCAD), com forte inibição da hipersensibilidade e perfil da resposta CD4 tipo- Th2. Entre a forma central LCL e as formas polares LCM e LCAD a infecção passa por uma fase intermediária, a leishmaniose cutânea disseminada borderline (LCDB), com inibição parcial da hipersensibilidade e peifil da resposta CD4 Thl + Th2. Estes são, provavelmente, os principais mecanismos imunológicos que modulam a patogenia da LTA causada por L. (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis.

The pathogenesis of American tegumentary leishmaniasis (ATL) was reviewed ifl the light of more recent features of clinical, histopathological and immunopathological spectrum of disease caused by Leishmania (V.) braziliensis and Leishmania (L.) amazonensis. This review has shown a dichotomy in the interaction between these two species of Leishmania with the human .cellular immune response; while L. (V.) braziliensis shows a clear tendency to direct infection, from the localized cutaneous leishmaniasis (LCL) in the center of the clinical-immunological spectrum of disease, to the hyperactive immunologic pole represented by mucocutaneous leishmaniasis (MCL), which shows exacerbated hypersensitivity reaction and CD4 Thl-type immune response, L. (L.) amazonensis shows the opposite,. directing infection to the hypoactive immunologic pole consisted by anergic diffuse cutaneous leishmaniasis (ADCL), associated with a marked inhibition of hypersensitivity reaction and CD4 Th2type immune response. Between the central LCL and thetwo polar MCL and ADCL forms the infection may present an intermediary phase, borderline disseminated cutaneous leishmaniasis (BDCL), which shows partial inhibition of hypersensitivity reaction and a mixed CD4 Thl plus Th2 immune response. These are probably the main immunological mechanisms regarding the immune response dichotomy that modulates the pathogenesis of ATL caused by these Leishmania parasites.

Observations on Eimeria species of Dasyprocta leporina (Linnaeus, 1758)(Rodentia: Dasyproctidae) from the state of Pará, North Brazil

Redescriptions are given of the mature oocysts of Eimeria aguti Carini 1935, E. cotiae Carini, 1935 and E. paraensis Carini, 1935, in the faeces of five specimens of the rodent Dasyprocta leporina (Rodentia: Dasyproctidae) from the state of Pará, North Brazil. New information is provided on the sporulation time of these parasites and the prepatent period in experimentally infected D. leporina. Some endogenous stages of E. cotiae are described in the epithelial cells of the ileum, and the absence of any oocysts in the gall-bladder contents of the infected animals indicates that the intestine is also the site of development of E. aguti and E. paraensis. Difficulties in separating E. cotiae and E. paraensis on morphology of the oocysts are discussed. The oocysts of both parasites share many structural features and have a wide size range. It is concluded that although it is at present best to maintain these names, the possibility exists that they were separately given to oocysts of smaller dimensions (E. cotiae) and larger dimensions (E. paraensis) of a single parasite. Location of an endogenous site of development for E. paraensis that is distinctly separate from that of E. cotiae might establish more definitely the separate specific status of the two parasites.

Further observations on clinical, histopathological, and immunological features of borderline disseminated cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania (Leishmania) amazonensis

Leishmania (Leishmania) amazonensis has for some time been considered as the causative agent of two distinct forms of American cutaneous leishmaniasis (ACL): localized cutaneous leishmaniasis (LCL), and anergic diffuse cutaneous leishmaniasis (ADCL). Recently, a new intermediate form of disease, borderline disseminated cutaneous leishmaniasis (BDCL), was introduced into the clinical spectrum of ACL caused by this parasite, and in this paper we record the clinical, histopathological, and immunological features of eight more BDCL patients from Brazilian Amazonia, who acquired the disease in the Pará state, North Brazil. Seven of them had infections of one to two years' evolution and presented with primary skin lesions and the occurrence of metastases at periods varying from six to 12 months following appearance of the first lesion. Primary skin lesions ranged from 1-3 in number, and all had the aspect of an erythematous, infiltrated plaque, variously located on the head, arms or legs. There was lymphatic dissemination of infection, with lymph node enlargement in seven of the cases, and the delayed hypersensitivity skin-test (DTH) was negative in all eight patients prior to their treatment. After that, there was a conversion of DTH to positive in five cases re-examined. The major histopathological feature was a dermal mononuclear infiltration, with a predominance of heavily parasitized and vacuolated macrophages, together with lymphocytes and plasma cells. In one case, with similar histopathology, the patient had acquired his infection seven years previously and he presented with the largest number of disseminated cutaneous lesions. BDCL shows clinical and histopathological features which are different from those of both LCL and ADCL, and there is a good prognosis of cure which is generally not so in the case of frank ADCL.

Clinical and immunopathological spectrum of American cutaneous leishmaniasis with special reference to the disease in Amazonian Brazil: a review

The wide variety of Leishmania species responsible for human American cutaneous leishmaniasis combined with the immune mechanisms of the host results in a large spectrum of clinical, histopathological, and immunopathological manifestations. At the middle of this spectrum are the most frequent cases of localized cutaneous leishmaniasis (LCL) caused by members of the subgenera Leishmania and Viannia, which respond well to conventional therapy. The two pathogenicity extremes of the spectrum generally recognized are represented at the hypersensitivity pole by mucocutaneous leishmaniasis (MCL) and at the hyposensitivity pole by anergic diffuse cutaneous leishmaniasis (ADCL). Following the present study on the clinical, histopathological and immunopathological features of cutaneous leishmaniasis in Amazonian Brazil, we propose the use of the term "borderline disseminated cutaneous leishmaniasis" for the disseminated form of the disease, due to parasites of the subgenera Leishmania and Viannia, which might be regarded as intermediate between LCL and the extreme pathogenicity poles MCL and ADCL.

Ensaio clínico aberto comparando a mefloquina e o antimoniato de meglumina no tratamento da leishmaniose tegumentar americana na Amazônia / Clinical study comparing mefloquina and antimony meglumina in the treatment of leishmaniose american tegumentar in Amazônia

Introdução: A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença responsável por considerável morbidade em áreas tropicais do mundo, cuja melhor forma de tratamento encontra-se indefinida. A resposta terapêutica à mefloquina foi avaliada comparando-se com o antimoniato de meglumina. Método: Dois grupos de tratamento com 30 pacientes cada, com diagnóstico parasitológico de LTA, foram constituídos: o primeiro tratado com mefloquina na dose de 4,2 mg/kg/dia, via oral, até uma dose acumulada de 4 g, divididos em 2 etapas, com intervalos de 20 dias e o segundo grupo recebeu antimoniato de meglumina 20 mg/kg/dia, intravenoso, por 20 dias consecutivos, repetidos com intervalo de 10 dias. A resposta terapêutica avaliada com base na intenção de tratamento. Resultados: A proporção de cura clínica e o índice global de resposta (completa e parcial) foram respectivamente de 46,7 por cento (IC 95 por cento:28,8-65,3) e 60,0 por cento (IC 95 por cento:40,7-76,7) no grupo tratado com mefloquina, e de 60,0 por cento (IC 95 por cento:40,7-76,7) e 63,3 por cento (IC 95 por cento:43,9-79,5) no outro grupo. Náuseas e vômitos, em geral de intensidade leve, foram os efeitos colaterais mais comuns no grupo tratado com mefloquina. No outro predominaram episódios de artralgia de leve intensidade. Conclusão: Se estudos posteriores confirmarem a equivalência em termos de resposta, pela facilidade de administração, maior aderência ao tratamento e toxicidade aceitável, a mefloquina poderá se constituir em uma alternativa aos antimoniais pentavalentes no tratamento da LTA

Teste de aglutinaçäo directa no sorodiagnóstico da leishmaniose visceral no estado do Pará / Direct agglutination test in the serodiagnosis of human visceral leishmaniases in the State of Pará, Brazil

The direct agglutination test (DAT) was evaluated for serodiagnosis of visceral leishmaniasis (VL) in human and canids (dogs and foxes Cerdocyon thous). The results were compared with those of the immunofluorescent antibody assay (IFAT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The sera used were from: humans (303): confirmed VL (16), suspected VL (65), other conditions (102), negative controls (15) and individuals from an endemic area (105); dogs (82): from an endemic area (68), Salvaterra/Marajó/Pará (21 of which were parasitologically positive), and negative controls (14), from Belém; foxes (9): caught on Marajó Island. Antigens for DAT were prepared from promastigots of L. (L.) donovani, L. (L.) chagasi. Antigens used in ELISA and IFAT were prepared from promastigotes (soluble antigen) and amastigotes respectively of L. (L.) chagasi. In humans, the specificity and sensitivity of DAT using L. (L.) donovani were high (98.4 per cent and 100 per cent respectively) and comparable to that of IFAT (97.5 per cent and 100 per cent). ELISA was less specific (84.8 per cent) although similarly sensitive (100 per cent). In dogs, DAT was more specific using L. (L.) donovani as antigen than using L. (L.) chagasi. However, both DAT and ELISA were less sensitive (both 71.4 per cent) than IFAT (100 per cent). This difference was reflected in the results from endemic dogs, 87 per centof which were positive by IFAT but only 54 per cent by ELISA and 49 per cent by DAT. Similarly, all 9 fox sera were positive by IFAT, 7 of 9 (78 per cent) by ELISA but none by DAT. In conclusion, DAT using L. (L.) donovani antigen can provide a useful test for human VL; utilization on a large scale would be possible with a suitable reference laboratory to monitor antigen quality. However, DAT appears less useful for canine studies, as it was less sensitive than ELISA and especially IFAT in detecting canine infection.

Histopatologia da forma localizada de leishmaniose cutanea por Leishmania (Leishmania) amazonensis / Histopathology of the localized form of cutaneous leishmaniosis due to Leishmania (Leishmania) amazonensis

Sao descritas as alteracoes microscopicas presentes na forma localizada (ulcerada) da Leishmaniose cutanea produzida por Leishmania (Leishmania) amazonensis. Nesse tipo de manifestacao, menos conhecido do que a forma anergica ou difusa devida ao mesmo agente, as lesoes sao clinicamente identicas as de leishmaniose cutanea causada por especies outras de Leishmania, pertencentes ao subgenero Viannia. Na infeccao localizada por L. (L.) amazonensis, entretanto, ha um aspecto peculiar, so recentemente conhecido, ou seja, cerca de 50 por cento dos individuos atingidos nao reagem ao teste de Montenegro. A principal caracteristica histologica observada foi a acumulacao na derme, quase sempre focal, de numerosos macrofagos contendo no citoplasma um grande vacuolo cheio de amastigotas....

Zigomicose nasofacial: relato de um caso do estado do Para, Brasil / Nasofacial zygomycosis: case report from Para, Brazil

Um caso de zigomicose nasofacial, causado por Conidiobolus coronatus, e descrito em paciente de 64 anos, do sexo feminino, procedente de Barcarena, Estado do Para. Trata-se de doenca rara na Regiao Norte do pais - a maioria dos casos brasileiros tem sido registrada em Estados da Regiao Nordeste -, e o achado confirma a ocorrencia do agente no Estado do Para. A resposta ao iodeto de potassio, droga administrada a paciente, logo apos a comprovacao do diagnostico pelo isolamento do fungo, foi boa, com resolucao parcial das lesoes em algumas semanas. A paciente continua ainda em tratamento, tendo-se associado o itraconazol ao iodeto.

Avaliação de três esquemas terapêuticos com o antimoniato de N-metil-glucamina no tratamento da leishmaniose visceral no estado do Pará, Brasil / Evaluation of 3 therapeutic schedules with N-methyl-glucamine antimonate in the treatment of visceral leishmaniasis in the state of Para, Brazil

We have evaluated, in a retrospective manner, three chemotherapeutic schemes with meglumine antomoniate (Glucantime) use in the treatment of 43 autochthonous cases of visceral leishmaniasis in children in the age-group of 1-12 years old, during the period 1985-1990. Of the 43 cases, 28 (group A) were treated with 40mg/SbV/kg given IV at intervals of 48 hours, in courses of 15 applications (scheme I); 8 (group B) were treated with 40 mg/SbV/kg given IV daily during 15 days (scheme II), and 7 (group C) were treated with 20 mg/SbV/kg given IV daily during 15 days (scheme III). With the criteria for cure based essentially on clinical examination, we admitted that the scheme III would be the preferred for these reasons: a) it produces the same cure-rate as those schemes which use double this dosage, b) in relation to positive results it is less expensive, c) the scheme can be used for more extended periods, with less risk of toxic effects, and d) there has till now been no evidence of the development of resistance to treatment using this scheme, at least in our particular area of study (Pará).

Leishmaniose cutânea experimental: III. Aspectos histopatológicos do comportamento evolutivo da lesäo cutânea produzida em Cebus apella (Primates: Cebidae) por Leishmania (Viannia) lainsoni, L. (V.) brasiliensis e L. (Leishmania) amazonensis / Experimental cutaneous leishmaniasis: III. Histophatological aspects of the evolutive behavior of the cutaneous lesion induced in Cebus apella (Primates: Cebidae) by Leishmania (Viannia) lainsoni, L. (V.) braziliensis and L. (Leishmania) amazonensis

Estudaram-se os aspectos histopatológicos relativos à evoluçäo da infecçäo experimental produzida em Cebus apella (Primates: Cebidae) por Leishmania (V.) lainsoni, L. (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis. O exame microscópico de biópsias seqüênciais, obtidas dos animais a intervalos definidos d etempo (a primeira, âs 48 ou 72 horas após a inoculaçäo, e as seguintes, a cada 30 dias), mostrou que o desenvolvimento das lesöes, independente da espécie de Leishmania inoculada, pass por uma seqüência de etapas a nível tecidual - 1) infiltrado inespecífico crônico; 2) nódulo macrofágico (com numerosos parasitas); 3) necrose das células parasitadas; 4) granuloma epitelióide; 5) absorçäo da área necrosada (às vezes formando granuloma de corpo estranho); 6) infiltrado inespecífico crônico residual); e 7) cicatrizaçäo - que representaria a formaçäo e a resoluçäo das lesöes. Discutiram-se também os prováveis mecanismso imunopatológicos que determinaram esta seqüência de eventos e sua possível semelhança com a evoluçäo das lesöes na leishmaniose tegumentar humana

Leishmaniose cutânea experimental: II. Aspectos evolutivos da infecçäo no primata Cebus apella (Cebidae) pela Leishmania (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis / Experimental skin leishmaniasis: II. Course of the infection in the Cebus apella primate (Cebidae) caused by Leishmania (V.) braziliensis and L. (L.) amazonensis

Objetivando avaliar o potencial do primata C. apella como modelo experimental da leishmaniose cutânea produzida pela L. (V.) brasiliensis e L. (L.) amazonensis, inocularam-se, via intradérmica, 3 X10**6 de promastigotas dessas leishmanias, em 8 sítios da cauda de 10 espécimens desse desse primata, 5 deles com a L. (V.) braziliensis e outros 5 com a L. (L.) amazonensis. Posteriormente, às inoculaçöes, o exame semanal dos animais e biópsias mensais, revelaram os seguintes resultados relativos a cada parasita: a) L. (V.) brasiliensis: o periodo de incubaçäo foi d e15-20 dias; aos 30 dias evidenciaram-se lesöes pápulo-eritematosas, que evoluiram para nódulo ao fim de 60 dias; no 3§ mês, notou-se espontânea destas lesöes e, no 4§ mês, deu-se o inicio da reparaçäo das lesöes ulceradas, culminando com a cura em um dos animais após 5 meses, em dois após 6 meses, noutro após 7 meses e, no ultimo, após 10 meses. Quanto ao parasitismo nas lesöes, foi demonstrado nos 5 animais, até 90 dias; depois disto, somente em 2 até 120 dias e, por fim, até 180 dias apenas naquele que curou depois de 10 meses. b) L. (L.) amazonensis: o período de incubaçäo foi de 20 dias; aos 30 dias notou-se lesöes pápulo-eritematosas, que também evoluiram para nódulos ao fim de 60 dias, porém, a partir do 3§ mês, estas lesöes regrediram rapidamente ao fim de 90 dias, quando näo mais detectou-se o parasita na pele dos animais. Em relaçäo aos testes de Montenegro, somente 2 dos 5 animais infectados com a L. (V.) braziliensis reagiram ao teste, 6 e 90 dias após as inoculaçöes. Os resultados observados permitiram confirmar a infectividade do C. apella a estas leishmanias e, também, reforçar a indicaçäo desse primata como modelo experimental da leishmaniose cutânea por estes parasitas

Leishmaniose cutanea experimental: I-sobre a susceptibilidade do primata cebus apella (Cebidae) a infecçäo pela Leishmania (Viannia) Lainsoni Silveira, Shaw, Braga e Ishikawa, 1987 / Experimental cutaneous leishmaniasis: I-on the susceptibility of the primate cebus apella (Cebidae) to the infection caused by Leishmania (Viannia) Lainsoni Silveira, Shaw, Braga and Ishikawa, 1987

Foi investigada a susceptibilidade do primata Cebus apella (Cebidae) à infecçäo experimentada pela Leishmania (Viannia) lainsoni, com o objetivo de estudar a patogenia desse parasita, ainda pouco conhecido para o homem. Desse forma, cinco espécimes jovens daquele primata, 2 machos e 3 fêmeas, foram inoculados, itraderme, em oito sítios diferentes da regiäo dorsal da cauda com 3 x 10***6 de promastigotas do parasita (MHOM/BR/81/M6426, Benevides, Pará), obtidas de cultura da fase estacionária. Em seguida às inoculaçöes, a infecçäo experimental no animais foi comprovada, näo só pela presença de amastigotas do parasita na pele dos animais inoculados, mas, também, pela concomitância desse achado associado ao desenvolvimento de lesäo cutânea nos pontos da pele onde o parasita foi inoculado. Diante desses resultados, ficou demonstrada a susceptibilidade do primata Cebus apella à infecçäo experimental pela leishmania lainsoni, cujo período de infecçäo durou quese quatro meses, suficiente para testar drogas antileishmanióticas e estudar a patogênese da doença causada por este parasita

Sobre a sensibilidade da cultura de leucócitos circulantes na detecçäo de Leishmania no sangue periférico de pacientes com leishmaniose tegumentar / Sensitivity of the culture of circulating leucocytes in the detection of Leishmania in the peripheral blood of patients with tegumentary leishmaniasis

Foi investigada a presença de Leishmani, através da cultura de leucócitos circulantes, no sangue periférico de 60 pacientes portadores de leishmaniose tegumentar americana, nas suas diferentes formas clínicas, assim como nas principais fases evolutivas da doença. Biópsias de lesöes cutâneas e/ou de mucosa desses pacientes foram obtidas com a finalidade de isolar e caracterizar os parasitas, através da técnica de anticorpos monoclonais. Dos 60 pacientes examinados, foram isoladas 40 amostras de Leishmania das lesöes biopsiadas, sendo 5 de Leishmania (V.) brasiliensis, 3 de L. (V.) guyanensis, 1 de L. (V.) lainsoni, 13 de L. (L.) amazonensis e 18 näo puderam ser caracterizados a nível específico, porém, reagiram com anticorpos monoclonais do grupo brazilensis. Quanto à pesquisa através das culturas de leucócitos circulantes, esta revelou resultados completamente negativos. Com base nesses achados, os autores concluíram ser pouco consciente atribuir valor à cultura de leucócitos para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar