Discrimination of Microplastics and Phytoplankton Using Impedance Cytometry.

Both microplastics and phytoplankton are found together in the ocean as suspended microparticles. There is a need for deployable technologies that can identify, size, and count these particles at high throughput to monitor plankton community structure and microplastic pollution levels. In situ analysis is particularly desirable as it avoids the problems associated with sample storage, processing, and degradation. Current technologies for phytoplankton and microplastic analysis are limited in their capability by specificity, throughput, or lack of deployability. Little attention has been paid to the smallest size fraction of microplastics and phytoplankton below 10 µm in diameter, which are in high abundance. Impedance cytometry is a technique that uses microfluidic chips with integrated microelectrodes to measure the electrical impedance of individual particles. Here, we present an impedance cytometer that can discriminate and count microplastics sampled directly from a mixture of phytoplankton in a seawater-like medium in the 1.5-10 µm size range. A simple machine learning algorithm was used to classify microplastic particles based on dual-frequency impedance measurements of particle size (at 1 MHz) and cell internal electrical composition (at 500 MHz). The technique shows promise for marine deployment, as the chip is sensitive, rugged, and mass producible.

Protocols for isolation and characterization of nanoparticle biomolecular corona complexes.

Engineered nanoparticles (NPs) pose a broad spectrum of interesting properties that make them useful for many applications. However, continuous exposure to NPs requires the need to deeply understand the outcomes when these NPs interact with different biological environments. After exposure within (to) these environments, the pristine surfaces of NPs strongly interact with the molecules from the surrounding medium, including metabolites, lipids, glycan, and proteins, forming the so-called protein corona (PC). It is well established that the NP-PC strongly influences the biological fate of various NPs types, including cellular uptake, toxicity, and biodistribution. Thus, for a proper assessment of potential hazards associated with engineered NPs, it is mandatory to study and evaluate the PC that forms around NPs. Herein, we describe protocols in detail for the isolation and characterization of NP-PC complexes and cover the following aspects: 1) isolation protocols for different nanomaterials in a range of exposing media, including magnetic isolation methods for superparamagnetic NPs, 2) NP physico-chemical characterization using advanced and standard techniques available in regular laboratories, and 3) NP- PC characterization of the protein and glycan components.

IgE glycosylation and impact on structure and function: A systematic review.

The impact of human IgE glycosylation on structure, function and disease mechanisms is not fully elucidated, and heterogeneity in different studies renders drawing conclusions challenging. Previous reviews discussed IgE glycosylation focusing on specific topics such as health versus disease, FcεR binding or impact on function. We present the first systematic review of human IgE glycosylation conducted utilizing the PRISMA guidelines. We sought to define the current consensus concerning the roles of glycosylation on structure, biology and disease. Despite diverse analytical methodologies, source, expression systems and the sparsity of data on IgE antibodies from non-allergic individuals, collectively evidence suggests differential glycosylation profiles, particularly in allergic diseases compared with healthy states, and indicates functional impact, and contributions to IgE-mediated hypersensitivities and atopic diseases. Beyond allergic diseases, dysregulated terminal glycan structures, including sialic acid, may regulate IgE metabolism. Glycan sites such as N394 may contribute to stabilizing IgE structure, with alterations in these glycans likely influencing both structure and IgE-FcεR interactions. This systematic review therefore highlights critical IgE glycosylation attributes in health and disease that may be exploitable for therapeutic intervention, and the need for novel analytics to explore pertinent research avenues.

Exploring the sequence-function space of microbial fucosidases.

Microbial α-L-fucosidases catalyse the hydrolysis of terminal α-L-fucosidic linkages and can perform transglycosylation reactions. Based on sequence identity, α-L-fucosidases are classified in glycoside hydrolases (GHs) families of the carbohydrate-active enzyme database. Here we explored the sequence-function space of GH29 fucosidases. Based on sequence similarity network (SSN) analyses, 15 GH29 α-L-fucosidases were selected for functional characterisation. HPAEC-PAD and LC-FD-MS/MS analyses revealed substrate and linkage specificities for α1,2, α1,3, α1,4 and α1,6 linked fucosylated oligosaccharides and glycoconjugates, consistent with their SSN clustering. The structural basis for the substrate specificity of GH29 fucosidase from Bifidobacterium asteroides towards α1,6 linkages and FA2G2 N-glycan was determined by X-ray crystallography and STD NMR. The capacity of GH29 fucosidases to carry out transfucosylation reactions with GlcNAc and 3FN as acceptors was evaluated by TLC combined with ESI-MS and NMR. These experimental data supported the use of SSN to further explore the GH29 sequence-function space through machine-learning models. Our lightweight protein language models could accurately allocate test sequences in their respective SSN clusters and assign 34,258 non-redundant GH29 sequences into SSN clusters. It is expected that the combination of these computational approaches will be used in the future for the identification of novel GHs with desired specificities.

Erythropoietin N-glycosylation of Therapeutic Formulations Quantified and Characterized: An Interlab Comparability Study of High-Throughput Methods.

Recombinant human erythropoietin (EPO) is a biopharmaceutical frequently used in the treatment of anemia. It is a heavily glycosylated protein with a diverse and complex glycome. EPO N-glycosylation influences important pharmacological parameters, prominently serum half-life. Therefore, EPO N-glycosylation analysis is of the utmost importance in terms of controlling critical quality attributes. In this work, we performed an interlaboratory study of glycoanalytical techniques for profiling and in-depth characterization, namely (1) hydrophilic interaction liquid chromatography with fluorescence detection after 2-aminobenzamide labeling (HILIC-FLD(2AB)) and optional weak anion exchange chromatography (WAX) fractionation and exoglycosidase digestion, (2) HILIC-FLD after procainamide labeling (PROC) optionally coupled to electrospray ionization-MS and (3) matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-MS). All techniques showed good precision and were able to differentiate the unique N-glycosylation profiles of the various EPO preparations. HILIC-FLD showed higher precision, while MALDI-TOF-MS covered the most analytes. However, HILIC-FLD differentiated isomeric N-glycans, i.e., N-acetyllactosamine repeats and O-acetylation regioisomers. For routine profiling, HILIC-FLD methods are more accessible and cover isomerism in major structures, while MALDI-MS covers more minor analytes with an attractively high throughput. For in-depth characterization, MALDI-MS and HILIC-FLD(2AB)/WAX give a similar amount of orthogonal information. HILIC-FLD(PROC)-MS is attractive for covering isomerism of major structures with a significantly less extensive workflow compared to HILIC-FLD(2AB)/WAX.

Utilidad de la radiografía simple de senos paranasales y la tomografía axial computada en el diagnóstico de sinusitis crónica / Diagnosis of chronic sinustis by TAC or radiographic

Objetivo: informar los resultados de un estudio clínico prospectivo y observacional para precisar la frecuencia con la que la tomografía axial computada de senos paranasales establece el diagnóstico de sinusitis crónica en pacientes con síntomas de sinusitis pero sin alteracione en la radiografía simple. Material y método: se incluyeron 113 pacientes, 64 del sexo femenino y 49 del masculino, con el diagnóstico clínico de sinusitis crónica. A todos se les realizó una radiografía simple de senos paranasales. A los pacientes cuya radiografía se reportó normal, se les efectuó TAC de senos paranasales. Resultados: de los 113 pacientes, 68 (60 por ciento) tuvieron sinusitis crónica en la radiografía simple. Los 45 pacientes restantes (40 por ciento) se reportaron como normales en la radiografía simple y se les practicó TAC de senos paranasales, demostrándose la existencia de sinusitis etmoidal en 100 por ciento de ellos. Conclusión: la radiografía simple es de poco valor diagnóstico para evaluar la anatomía etmoidal debido a la sobreposición de imágenes que ocurren con este tipo de técnica. La TAC es más sensible para establecer el diagnóstico de sinusitis etmoidal que la radiografía simple de senos paranasales debido a que delinea mejor la anatomía de éstos

Asma asociada a reflujo gastroesofágico / Asthma and gastroesophageal reflux

Antecedentes: el asma resulta de la interacción de tres factores: obstrucción de las vías aéreas inferiores, hiperreactividad, inflamación de las vías aéreas. Material y método: estudio clínico prospectivo que incluye 28 pacientes asmáticos de difícil control sintomático cuyos indicadores de atopia fueron negativos, con el propósito de determinar una posible relación de su cuadro asmático con reflujo gastroesofágico. A los pacientes se les elaboró historia clínica completa y se efectuaron pruebas cutáneas a aeroalergenos comunes, IgE sérica total, eosenófilos en sangre periférica, espirometría, esofagograma y telerradiografía de tórax. Además, se practicaron: endoscopía esofágica en nueve pacientes y manometría esofágica en un paciente. Todos observaron medidas generales antirreflujo y recibieron omeprazol y cisaprida durante ocho semanas. Resultados: se observó mejoría completa en 24 pacientes (85.7 por ciento), mejoría moderada en tres (10.7 por ciento) y ninguna mejoría en uno (3.6 por ciento). Tres pacientes requirieron cirugía antirreflujo. Conclusiones: se observó reaparición de los síntomas 2 a 3 semanas después de suspender la terapéutica, por lo cual se recomendó que las medidas antirreflujo se convirtiesen en una manera de vida en estos pacientes

Reacción anafiláctica por aplicación de pruebas cutáneas: comunicación de un caso / Anaphylaxis reaction related to skin tests: a case report

Se comunica el caso de una paciente de 25 años de edad que desarrolló reacción anafiláctica sistémica posterior a la aplicación de pruebas cutáneas para aeroalergenos que acudió a consulta con el diagnóstico de asma bronquial y rinitis alérgica. El propósito de este trabajo es alertar acerca de las reacciónes sistémicas agudas relacionadas con la aplicación de pruebas cutáneas. La reacción ocurrió 15 minutos después de la aplicación intradérmica de varios aeroalergenos (pólenes, hongos atmosféricos y polvo de casa). Sus síntomas fueron: dolor hipogástrico, sangrado transvaginal, urticaria generalizada y síntomas respiratorios de broncoespasmo. Fue tratada de inmediato con antihistaminicos, broncodilatadores y esteroides; los síntomas desaparecieron 12 horas después. Se concluye que las pruebas cutáneas dan origen a reacciones sistémicas severas que pueden identificarse y tratarse de inmediato por personal adiestrado y que estas pruebas deben evitarse ante la sospecha de embarazo

La placenta en el embarazo múltiple: correlación anatomoclínica / The placenta in multiplo pregnancy: anatomo-clinical correlation

Se estudiaron 46 pacientes ingresadas con diagnóstico de embarazo múltiple. Una vez resuelto el embarazo, las placentas fueron enviadas a estudio anatomopatológico, poniendo especial atención al tipo de placentación (monocoriales, dicoriales etc). La edad de las pacientes estuvo entre los 17 y 38 años, con una media de 27. La mayor incidencia de embarazo múltiple ocurrió entre los 25 y 34 años y fue más frecuente en multíparas. De los 46 pacientes estudiadas, 44 tuvieron embarazo gemelar, y dos, triple, obteniendo un total de 94 recién nacidos. Respecto al peso de los productos, no hubo diferencia significativa entre el primero y segundo gemelo (p = 0.05), en cambio, encontramos diferencia significativa en el peso de las masas placentarias, observando que las de mayor peso fueron las placentas dicoriales separadas, en comparación con una sola masa placentaria (monocoriales, dicoriales fusionadas), p = 0.05. Los cambios anatomopatológicos más frecuentes en este estudio fueron: inserción velamentosa de cordón en ocho casos (17,3%), anastomosis vasculares placentarias en tres casos (6,5%), y corioamniotics en seis casos (13%). Dentro de las complicaciones maternas asociadas al embarazo múltiple estuvo la anemia (HB <-10 g) en 19 casos (41,3%), trastornos hipertensivos en nueve casos (19%), y atonía uterina postparto en cuatro casos. La complicación más frecuente en los recién nacidos fue la prematurez, en 47% de los casos