RESUMEN
Introduction. For over a century, Sporothrix schenckii was considered the sole species responsible for sporotrichosis. In 2007, scientific community confirmed the disease could be caused by various Sporothrix species. These species differed in their virulence factors and their antifungal sensitivity. Objective. This study aims to characterize 42 Colombian clinical isolates of Sporothrix spp. phenotypically and genotypically. Materials and methods. Forty-two clinical isolates were characterized using phenotypic methods. It involved various culture media to determine their growth range at different temperatures and to assess the type and distribution of pigment and colony texture. Microscopic morphology was evaluated through microcultures, as well as the conidia diameter, type of sporulation, and morphology. Additionally, the assimilation of carbohydrates was selected as a physiological trait for species identification. Genotyping of 40 isolates was performed through partial amplification of the calmodulin gene, followed by sequence analysis. Results. Molecular studies enabled the identification of 32 isolates of S. schenckii and 8 isolates of S. globosa. The combination of phenotypic and genotypic methods eased these species characterizations and the recognition keys development based on parameters such as growth diameter at 25 and 30 °C, colony texture (membranous or velvety) on potato dextrose agar, and microscopic morphology with predominance of pigmented triangular, elongated oval globose, or subglobose conidia. Conclusions. Confirmation of the phenotypic characteristics and molecular analysis is crucial for identifying Sporothrix species and determining adequate treatment. This study represents the first phenotypical and genotypical characterization of clinical isolates of Sporothrix spp. reported in Colombia.
Introducción. Por más de un siglo se creyó que Sporothrix schenckii era la única especie responsable de la esporotricosis. Sin embargo, en el 2007, se consideró que podría ser causada por diferentes especies de Sporothrix, que difieren en sus factores de virulencia y su sensibilidad a los antifúngicos. Objetivo. Caracterizar fenotípica y genotípicamente 42 aislamientos clínicos colombianos de Sporothrix spp. Materiales y métodos. Se caracterizaron 42 aislamientos clínicos mediante métodos fenotípicos. Se usaron varios medios de cultivo para determinar el rango de crecimiento a diferentes temperaturas, el tipo y la distribución del pigmento, y la textura de las colonias. Se evaluó la morfología microscópica por microcultivos mediante la determinación del diámetro, el tipo de esporulación y la morfología de las conidias. La asimilación de carbohidratos se usó como una característica fisiológica para identificar las especies. La genotipificación de los 40 aislamientos se llevó a cabo mediante la amplificación parcial del gen que codifica para la calmodulina y se confirmó por secuenciación. Resultados. Mediante estudios moleculares, se identificaron 32 aislamientos de S. schenckii y ocho de S. globosa. La combinación de métodos fenotípicos y genotípicos permitió caracterizar las especies y construir claves para su reconocimiento, con base en parámetros como el diámetro de crecimiento a 25 y 30 °C, la textura de las colonias (membranosa, aterciopelada) en agar papa dextrosa y la morfología microscópica con predominio de conidias (triangulares pigmentadas, ovales globosas elongadas, subglobosas). Conclusiones. La caracterización fenotípica y los análisis moleculares son necesarios para identificar las especies de Sporothrix y, de esta forma, elegir el tratamiento indicado. Esta es la primera caracterización fenotípica y genotípica reportada de aislamientos clínicos colombianos de Sporothrix spp.
Asunto(s)
Esporotricosis , Fenotipo , Sporothrix , GenotipoRESUMEN
During their journey through the female reproductive tract to reach the oocyte in the ampulla of the fallopian tube, spermatozoa interact with substances and microorganisms that affect sperm quality, thus altering their fertilizing capacity. OBJECTIVES: To determine in vitro the effect of Streptococcus agalactiae, Klebsiella pneumoniae and their soluble factors on sperm parameters, and to evaluate the ability of human sperm to interact with and transport these bacteria. METHODS: The effects of S. agalactiae, K. pneumoniae and their soluble factors on the viability, sperm motility and functional sperm parameters were quantified. In addition, motile spermatozoa were incubated with decreasing concentrations of bacteria for one hour, washed and post-infection treatments were performed with trypsin and transport capacity was assessed by quantitative cultures. RESULTS: Incubation of spermatozoa with K. pneumoniae decreased progressive motility. The soluble factors of K. pneumoniae increased the number of necrotic spermatozoa and the soluble factors of S. agalactiae increased lipid peroxidation of the sperm membrane (p<0.05). A strong interaction between sperm and bacteria was observed in the transport assays even in washed trypsin-treated samples. CONCLUSION: Human spermatozoa act as vectors for infections, generating strong interactions with K. pneumoniae and S. agalactiae favoring their diffusion through the female reproductive tract. This interaction affects male fertility by altering progressive motility, increasing the number of necrotic cells and inducing apoptosis.
Los espermatozoides durante su recorrido por el tracto reproductivo femenino en busca del oocito interactúan con sustancias y microorganismos que afectan la calidad seminal alterando su capacidad fecundante.OBJETIVOS: Determinar el efecto in vitro de Streptococcus agalactiae, Klebsiella pneumoniae y sus factores evaluar la capacidad de los espermatozoides humanos para interactuar y transportar estas bacterias.MÉTODOS: Se cuantificó el efecto de la incubación de S. agalactiae, K. pneumoniae y sus factores solubles sobre la viabilidad, la movilidad y los parámetros espermáticos funcionales. Adicionalmente, espermatozoides móviles fueron incubados con concentraciones decrecientes de bacterias durante una hora, se realizaron lavados y tratamientos post infección con tripsina y se evaluó la capacidad de transporte mediante cultivos cuantitativos.RESULTADOS: La incubación de los espermatozoides con K. pneumoniae ATCC 1705 disminuyó la movilidad espermática tipo I. Los factores solubles de K. pneumoniae ATCC 700603 aumentaron el número de espermatozoides necróticos mientras que los factores solubles de S. agalactiae aumentaron la lipoperoxidación de la membrana espermática (p<0,05). En los ensayos de transporte se observó una interacción fuerte entre los espermatozoides y las bacterias, incluso en las muestras tratadas con tripsina y lavados.CONCLUSIÓN: Los espermatozoides humanos sirven como vectores de infecciones, generan interacciones fuertes con K. pneumoniae y S. agalactiae, favoreciendo su difusión por el tracto reproductivo femenino. Esta interacción afecta la fertilidad masculina alterando la movilidad progresiva, aumentando el número de células necróticas y la apoptosis espermática.
