RESUMEN
Fluorescent in situ hybridization (FISH) techniques can be used to identify a range of chromosome abnormalities that are clinically significant in many cancers. Multicolor FISH can be used to identify multiple targets, which can be simultaneously detected in individual cells using digital imaging microscopy. In an era of precision medicine there is a requirement to make a precise diagnosis and to have a molecular classification of the tumor that can guide therapy. Cancer genomics is now regarded as a sub-specialism in pathology and genomic testing needs to be robustly integrated into the routine diagnostic practice.The FISH techniques described in this chapter have been developed over many years in a busy hematopathology diagnostic laboratory. We describe robust in-house methods for both liquid samples (blood and bone marrow mainly) and formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue biopsies that allow for large numbers of slides to be set up in batches. The techniques described are for interphase cells in tissues where metaphase chromosome techniques are generally not applicable. Some of the FISH tests need to be carried out as an "out-of-hours" emergency test to make a critical diagnosis while others provide prognostic information and are used to guide downstream patient management.
Asunto(s)
Citodiagnóstico/métodos , Sondas de ADN/genética , Hibridación Fluorescente in Situ/métodos , Neoplasias/diagnóstico , Aberraciones Cromosómicas , Sondas de ADN/uso terapéutico , Humanos , Neoplasias/genética , Neoplasias/patología , PronósticoRESUMEN
A multifunctional theranostic nanoplatform, which integrates diagnostic and therapeutic functions in a single nanosystem, holds great promise for guiding disease treatment and improving the corresponding therapy efficacy. We report the development of a novel g-C3N4 nanosheet-based theranostic nanoassembly for both enhanced imaging of cancer-relevant mRNA in living cells and imaging-guided on-demand photodynamic therapy (PDT) for tumors. The nanoassembly was constructed by using highly fluorescent and water-dispersible g-C3N4 nanosheets which act as nanocarriers, enabling efficient and self-tracking transfection of the DNA hairpin probes. The presence of intracellular mRNA will initiate the DNA hairpin probes, ultimately resulting in an amplified fluorescence signal via hybridization and displacement with mRNA. Moreover, enhanced fluorescence imaging-guided precise PDT for tumors in living cells was also demonstrated, allowing the selective ablation of tumors without any obvious side effects. Therefore, the developed theranostic approach can provide a promising platform for low-abundance biomarker discovery and early treatment of related diseases.
Asunto(s)
Imagen Molecular/métodos , Fotoquimioterapia/métodos , ARN Mensajero/metabolismo , ARN Neoplásico/metabolismo , Biomarcadores de Tumor/química , Biomarcadores de Tumor/metabolismo , Supervivencia Celular/efectos de los fármacos , Sondas de ADN/química , Sondas de ADN/uso terapéutico , Fluorescencia , Grafito/química , Grafito/uso terapéutico , Células HeLa , Humanos , Nanoestructuras/química , Nanoestructuras/uso terapéutico , Compuestos de Nitrógeno/química , Compuestos de Nitrógeno/uso terapéutico , Hibridación de Ácido Nucleico , ARN Mensajero/química , ARN Neoplásico/química , Nanomedicina TeranósticaRESUMEN
Foi avaliada a eficácia de uma sonda de DNA genômica marcada com digoxigenina para a detecçäo de B. Forsythus em amostras subgengivais. Além disso, reaçäo de polimerase em cadeia com "primers" arbitrários (AP-PCR), foi empregada com o objetivo de se delinear a diversividade genética de B. Forsythus. A sonda de DNA pode detectar 10(3) células de B. Forsythus e apresentou um forte sinal positivo com 10(4) células. A sonda reagiu com B. Forsythus ATCC 43037T e 44 cepas frescas isoladas da mesma espécie e näo demonstrou reaçäo detectável com 75 cepas de outras 24 espécies da microbiota bucal. Utilizando-se a cultura como referência, a sonda de DNA, através do método dot-blot, demonstrou uma sensibilidade de 88,8 por cento e uma especificidade de 38,4 por cento (exatidäo de 72,5 por cento). Pelo método "colony-blot", foram obtidas sensibilidade de 98,1 por cento e especificidade de 53,8 por cento (exatidäo de 83,7 por cento). B. Forsythus foi detectado em 449 dos 614 pacientes estudados (73,1 por cento). O microrgarnismo demonstrou uma estreita associaçäo com Porphyromonas Gingivalis, sendo ambos presentes em 54,8 por cento e ausentes em 22,2 por cento das 270 amostras estudadas. AP-PCR identificou 24 genotipos de B. Forsythus entre 27 cepas estudadas. Este estudo demonstrou a utilidade de uma genômica de DNA näo-radioativa para a detecçäo direta de B. Forsythus em amostras subgengival. A espécie demonstrou um considerável grau de diversidade genética. A análise de DNA pode ajudar a determinar o papel de B. Forsythus na doença periodontal e seu modo de transmissäo entre indivíduos
