SFRP1, Posible biomarcador en la progresión o regresión de lesiones de cérvix asociado al Virus del Papiloma Humano / SFRP1, Possible Biomarker in the Progression or Regression of Cervical Pre-neoplastic Lesions Associated with Human Papilloma Virus

Resumen Objetivo: Comparar la expresión de mRNA y proteínas de SFRP1, PTPRN, CDO1, EDNRB, CDX2, EPB41L3 y HAND1 en pacientes con lesión intra-epitelial cervical de bajo y alto grado, con posterior progresión o regresión. Material y Método: Se realizó análisis de expresión de genes mediante RT-PCR y análisis de expresión de proteínas por inmunohistoquímica. El análisis estadís tico fue realizado con las pruebas: Wilcoxon, coeficiente de correlación de Spearman e índice de concordancia. Las muestras fueron pareadas en momento 1 y momento 2. Resultados: SFRP1 mostró tendencia de mayor expresión de mRNA en lesión intra-epitelial de bajo grado (momento 2) Vs. alto grado (momento 1). La expresión de proteínas por inmunohistoquímica de SFRP1 en casos de progresión (83,3 %) mostró disminución en su graduación (p = 0,0313*); los demás genes en estudio no tuvieron cambios estadísticamente significativos. Discusión: SFRP1 mostró comportamiento ajustado a resultados de estudios previos donde se encontró hipermetilado en lesiones intra-epiteliales de alto grado; su subexpresión por hipermetilación se reportó en otros canceres, proceso que colabora con su silenciamiento y transición epitelial-mesenquimatosa del cáncer de cuello uterino. Conclusiones. SFRP1 es potencial biomarcador en lesiones preneoplásicas del cuello uterino asociadas al virus de papiloma humano.

Abstract Objective. The aim of this work was to compare the expression of mRNA and proteins of SFRP1, PTPRN, CDO1, EDNRB, CDX2, EPB41L3 and HAND1 in patients with low and high grade cervical intraepithelial lesion, with subsequent progression or regression. Material and Methods: Gene expression analysis was conducted through RT-PCR and protein expression analysis was performed by immunohistochemistry. The statistics analysis were Wilcoxon test, Spearman's correlation coefficient and concordance index. The samples were paired during moment 1 (initial patient diag nosis) and moment 2 (follow-up histological diagnosis). Results: SFRP1 showed a trend of higher mRNA expression in low-grade intra-epithelial lesions (moment 2) Vs. high-grade (moment 1). The expression of proteins by immunohistochemistry of SFRP1 in progression cases (83.3%) showed a decrease in its graduation (p = 0.0313*); the other genes under study had no statistically significant. Discussion: SFRP1 showed a biological behavior adjusted to the results of previous studies where hypermethylation was found in high-grade intra-epithelial lesions; its subexpression by hypermethylation has been reported in other cancers, a process that collaborates with its silencing and epithelial-mesenchymal tran sition of cervical. Conclusions. SFRP1 is a potential biomarker in preneoplastic lesions of the cervix associated with human papillomavirus.

Detección del virus del papiloma humano en muestras obtenidas mediante técnica de autotoma en un grupo de universitarias peruanas / Detection of the human papillomavirus in samples obtained by self-collection technique in a group of peruvian college students

RESUMEN Estudio transversal que determinó la frecuencia y genotipos del virus del papiloma humano de alto riesgo (VPH-AR) a través de la técnica de autotoma en un grupo de universitarias de Lima. Participaron 221 estudiantes y se detectó el ADN del VPH-AR con el método de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La frecuencia del VPH-AR en las participantes fue de 43,4%; de este grupo se encontraron los genotipos VPH 16 en el 15,6% y VPH 18 en el 4,2% y otros VPH-AR en el 80,2%. Se concluye que la frecuencia del VPH-AR es mayor en el grupo de universitarias de este estudio en comparación a investigaciones nacionales previas.

ABSTRACT Cross-sectional study that determined the frequency and the genotypes of the (HR-HPV) high-risk human papillomavirus through the self-collection technique in a group of college students of Lima. Two hundred twenty-one (221) students participated and the DNA of the HR-HPV was detected with polymerase chain reaction (PCR). The frequency of HR-HPV in participants was 43.4%; of this group, genotype HPV 16 was present in 15.6%, HPV 18 in 4.2%, and another HR-HPV in 80.2%. We can conclude that the frequency of HR-HPV is greater in the group of college students of this study in comparison with previous national investigations.

Avaliação do rastreamento do câncer do colo do útero e sua periodicidade em um município de Santa Catarina / Assessment of cervical cancer screening and its periodicity in a city of Santa Catarina state

Modelo do estudo: Estudo de Prevalência. Objetivo do estudo: Conhecer a prevalência dos resultados alterados dos exames preventivos para câncer do colo do útero e a sua regularidade na coleta. Metodologia: Estudo observacional, transversal e retrospectivo. Foram estudadas 3.425 mulheres usuárias do Sistema Único de Saúde e 9.436 exames citopatológicos de novembro de 2003 a janeiro de 2014. Resultados: A mediana da idade foi de 35 anos (25,0 - 46,0, percentil 25 a 75%). No primeiro exame citopatológico, 2,7% das mulheres apresentaram alterações em células epiteliais. As Células escamosas atípicas de significado incerto (ASC-US) (n=54; 1,7%) e as lesões intra-epiteliais de baixo grau (LIEBG) (n=24; 0,7%) foram as mais frequentes. Ao longo do período observado houveram 87 novas alterações citopatológicas, totalizando 173 exames alterados em 9.436 analisados. Quanto a regularidade, 58,5% pacientes repetiram a segunda coleta. Conclusões: Houve um perfil predominante de mulheres jovens, sendo o diagnóstico de ASC-US o mais frequente. A flora bacteriana mais frequente foi Lactobacillus principalmente em mulheres jovens. (AU)

Study Model: Prevalence Study. Study objective: To determine the prevalence of the abnormal cervical cancer screening test (PAP) and regularity in repeat it. Methods: An observational, cross-sectional and retrospective study. 3,425 women, users of the Brazilian Unified Health System, and 9,436 cytopathology, conducted from November 2003 to January 2014, were studied. Results: The median age was 35 years (25.0 to 46.0, 25 to 75% percentile). In the first PAP, 2.7% of women examined had alterations in epithelial cells. The atypical squamous cells of uncertain significance (ASC-US) (n = 54; 1.7%), and low-grade intraepithelial lesion (LSIL) (n = 24; 0.7%) were the most frequent alterations found. During the observed period, 87 new abnormal PAPs were found, totalling 173 altered tests in 9436 analysed. Regarding regularity of test, 58.5% patients repeated the second PAP. Conclusions: There was a preferential profile of young women, and the diagnosis of ASC-US was the most frequently found. Lactobacillus, especially in young women, was the main bacterial flora. (AU)

Oncogenic High-risk Human Papillomavirus Detection and Evaluation of Risk Factors in the Cervical Intraepithelial Neoplasia I / Detecção do Papilomavírus Humano de Alto Risco Oncogênico e Avaliação dos seus Fatores de Risco nas Neoplasias Intraepiteliais Cervicais Grau

The cervical intraepithelial neoplasia grade I (CIN I) shows an important percentual of spontaneous regression (80%) and there is no universal consensus if these lesions should be treated or only monitored. Lesions at risk for progression are precisely those associated with high-risk HPV. Knowing which CIN I are related to these viruses may be one of the determining factors for the decision to treat or not. Objective: To determine the prevalence of high-risk HPV in women with CIN I and to evaluate if there is an association between the presence of the virus and some risk factors. Methods : Cross-sectional descriptive study. We evaluated 55 women with histological diagnosis of CIN I. All of them were previously submitted to HPV-DNA testing. Results: 25 out of 55 (45.5%) women analyzed were positive for high-risk HPV. The virus infection was related with higher level of education, smoking and history of sexually transmitted diseases. Other risk factors like age, number of sexual partners, age at first sexual intercourse, use of hormonal contraceptives, and immunosuppression condition did not show a relation to the high-risk HPV infection. Conclusions: The prevalence of high-risk HPV in women with histological diagnosis of CIN I was 45.5%. HPV-DNA detection was associated with smoking, history of sexually transmitted diseases, and higher level of education.

As neoplasias intraepiteliais cervicais grau I (NIC I) apresentam um percentual importante de regressão espontânea (cerca de 80%) e não há um consenso universal se essas lesões devam ser tratadas ou apenas acompanhadas. As lesões que apresentam risco de progressão são justamente aquelas associadas aos HPV de alto risco oncogênico. O conhecimento de quais lesões estão relacionadas a esses vírus pode ser um dos fatores determinantes para a decisão de se tratar ou não tais lesões. Objetivo: Determinar a prevalência do papilomavírus humano (HPV) de alto risco oncogênico em mulheres com resultado histológico de NIC I e verificar a existência da associação entre a presença do vírus e alguns fatores de risco. Métodos: Trata-se de um estudo transversal, de caráter descritivo, onde foram avaliadas 55 mulheres com diagnóstico histopatológico de NIC I. Todas foram submetidas ao teste de DNA-HPV previamente. Resultados: Das 55 mulheres analisadas, 25 (45,5%) apresentaram HPV de alto risco positivo. A infecção pelo vírus foi associada às mulheres com mais anos de estudo, tabagismo e à história de alguma doença sexualmente transmissível. Outros fatores de risco, como a idade, o número de parceiros sexuais, a faixa etária em que ocorreu a coitarca, o uso de anticoncepcionais hormonais e o estado de imunossupressão, não mostraram relação com a infecção pelo HPV. Conclusão: A prevalência do HPV de alto risco oncogênico nas mulheres com diagnóstico histológico de NIC I foi de 45,5%. A detecção do vírus foi associada ao tabagismo, à história de doença sexualmente transmissível e a um grau maior de escolaridade.

Prevalence of HR-HPV and risk factors associated with the development of lesion cervical precousor of cervical cancer, a sample of the Curitiba metropolitan region, case-control study / Prevalência do HPV-AR e fatores de risco associados ao desenvolvimento de lesões cervicais precursoras do câncer cervical, numa amostra da região metropolitana de Curitiba, estudo caso-controle

Objective: Characterize the risk factors associated with the development of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and determine the prevalence of Highrisk Human Papillomavirus (HR-HPV) infection in women without cytological abnormalities and women diagnose with CIN 2 and 3, living in metropolitan region Curitiba, Parana state, Brazil. Material and Methods: Case-control study consisting of 382 women without cytological abnormalities, 233 women with high-grade intraepithelial lesions, which were subdivided in 131 women with CIN 2 and 102 women with CIN 3 diagnose by histological analysis of the cervical segment conical excision material. The age range of the women in the study was 15-45 years old, collected in the period of 2009 to 2012. The detection of HR-HPV DNA was performed by Hybrid Capture 2 test (CH2)...

Objetivo: Caracterizar os fatores de risco associados ao desenvolvimento de neoplasias intraepiteliais cervicais (NIC) e verificar a prevalência da infecçãopelo HPV de alto risco (HPV-AR) em mulheres sem anormalidade citológicas e com NIC 2 e 3, residentes na Região Metropolitana de Curitiba, Paraná,Brasil. Materiais e Métodos: Estudo caso-controle, composto por 382 mulheres sem anormalidades citológicas, 233 mulheres com lesão intraepitelial de alto grau, sendo estas subdivididas em 131 mulheres com NIC 2 e 102 com NIC 3 após a análise histológica do material da excisão cônica do segmento do colo do útero. A faixa etária das mulheres do estudo foi de 15 a 45 anos, coletadas no período de 2009 a 2012. A detecção do DNA do HPV-AR foi realizada pelo teste Captura Híbrida (CH2)...

Comparison between two methods for molecular characterization of human papillomavirus

A sensitive method of detection for Human Papillomavirus (HPV) is important to facilitate the early treatment of cervical cancer precursors.Objective: to analyze the spectrum of HPV infection and compare the sensibility of DNA HPV detection using polymerase chain reaction (PCR) and nestedPCR (nPCR) methods in a group of 251 women of Pelotas-RS. Methods: genomic DNA was extracted from the collected samples and was submitted toPCR methods with the primers MY09/11 and nPCR with the pair of primers MY09/MY11 and GP5+/6+. The results were applied to the softwares Epi-Info v.3.5.1* and STATA v.11 * for analyzes. Results: the prevalence of HPV infection was 6.8% with the use of primers MY09/11. When associated withprimers GP5/6, this result increased to 29.9% (p < 0.001). Conclusion: the increase founded in HPV DNA detection from 6.8 to 29.9% suggests that thetechnique of nPCR MY09/11 followed by GP5/6 is the most sensitive method to detect HPV DNA from cervical specimens.

Detección del virus del papiloma humano de alto riesgo por captura híbrida II® según hallazgos citológicos en mujeres tratadas por lesiones escamosas intraepiteliales de cuello uterino, período 2006/2010 / Detection of high risk human papillomavirus by hybrid capture II(r) according cytological findings in women treated for squamous intraepithelial lesions of the cervix, period 2006/2010

OBJETIVO: Determinar la frecuencia del virus de papiloma humano de alto riesgo oncogénico (HR-HPV) por captura híbrida II (r) (CH II(r)) según hallazgos citológicos en mujeres tratadas por lesiones escamosas intraepiteliales (SIL) de cuello uterino. MATERIAL Y MÉTODO: Estudio descriptivo de corte transverso de una serie de casos, en donde se incluyeron 122 mujeres tratadas, 79 (65%) por SIL de bajo grado (LSIL) y 43 (35%) por SIL de alto grado (HSIL) que concurrieron al Laboratorio de HPV del Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Universidad Nacional de Asunción, para realizarse un control post-tratamiento, periodo 2006/2010. RESULTADOS: Se observó un total del 28% (34/122) de mujeres tratadas por SIL positivas para HR-HPV, detectándose infección viral en un 20% de las mujeres con ausencia de SIL (NSIL) (22/108), 83% de las mujeres con LSIL (10/12) y 100% de las mujeres con HSIL (2/2). De las 34 mujeres positivas para HR-HPV, 10 mujeres (29%) presentaron valores altos (100 pg/mL o más) de carga viral relativa, detectándose un aumento de casos positivos con la severidad de la lesión (28% NSIL, 30% LSIL, 50% HSIL). CONCLUSION: La detección de HR-HPV por CH II(r), así como los valores de carga viral relativa altos, en especial en mujeres con NSIL podrían ayudar a identificar mujeres tratadas con riesgo a desarrollar recidivas, contribuyendo así a fortalecer el programa de prevención de cáncer de cuello uterino. .

OBJECTIVE: To determinate the frequency of high risk human papillomavirus (HR-HPV) by hybrid capture II (r) (CH II(r)), according cytology results in women treated for squamous intraepithelial lesions of the cervix (SIL). MATERIAL AND METHODS: A descriptive cross-sectional study of a series of cases that included 122 women treated, 79 (75%) for low grade SIL (LSIL) and 43 (35%) for high grade SIL (HSIL) attending at the HPV Laboratory at the Health Sciences Research Institute (IICS), National University of Asunción (UNA), for post-treatment control during period 2006/2010. RESULTS: A total of 28% (34/122) of women treated for SIL were positive for HR-HPV, detecting viral infection in 20% of women with no SIL (NSIL) (22/108), in 83% of women with LSIL (10/12) and in 100% of women with HSIL (2/2). Of 34 women positive for HR-HPV, 10 women (29%) had high values (100 pg / mL or more) of relative viral load, detecting an increase of positive cases with severity of the lesion (28% NSIL, 30% LSIL, 50% HSIL). CONCLUSION: HR-HPV detection by CH II(r) and high relative viral load values especially in women with NSIL could help to identify treated women at risk of developing recurrence, thereby contributing to strengthening the cervical cancer prevention program. .

Investigação das alterações moleculares nos receptores de fator de crescimento epidermal (HER-1 e HER-2) e da proteína P16 em carcinoma de células escamosas de língua e assoalho de pacientes jovens e adultos / Investigation of the molecular receptors epidermal growth factor (HER-1 and HER-2) and P16 protein in squamous cell carcinoma of the tongue and floor of young adult patients

O carcinoma de células escamosas (CCE) tem aumentado em pacientes jovens, principalmente em língua, correspondendo a 6% de todos os cânceres bucais. Sugere-se que essa neoplasia maligna seja uma doença distinta da que ocorre em pacientes mais velhos, com etiologia e progressão clínica particulares. Os receptores da família HER apresentam um importante papel na patogênese e progressão do CCE, sendo relevante a identificação de alterações no gene e na expressão das proteínas relacionadas ao CCE bucal...O CCE em pacientes jovens acomete mais a língua e não tem predileção pelo sexo masculino, estando o etilismo menos associado a esse grupo de pacientes em relação aos adultos. A imunopositividade observada para os anticorpos para HER-1 e p16 demonstra a participação dessas proteínas na carcinogênese dos CCE de língua e assoalha de boca. A presença de mutações nas regiões hot spots do gene HER-1 reforça a participação desse gene no desenvolvimento CCE de língua e assoalho em pacientes jovens. Futuras investigações são sugeridas nessa linha de pesquisa, para avaliar proteínas envolvidas na via de sinalização do HER-1, bem como nos casos p16 positivos, a presença do vírus HPV.

Perfil citopatológico de mulheres atendidas nas unidades básicas do município de Uruguaiana, RS / Cytopathological profile of women met in the basic units of the municipality of Uruguaiana, RS

O câncer do colo de útero tem sido apontado como o terceiro tipo de câncer mais comum entre as mulheres e sua relação com a infecção por papilomavírus humano (HPV) é bem estabelecida. Objetivo: conhecer o perfil citopatológico de mulheres atendidas nas Unidades Básicas de Saúdedo município de Uruguaiana, RS. Métodos: análise retrospectiva de corte transversal e descritivo dos laudos de exames citopatológicos de pacientes querealizaram a citopatologia ginecológica (Papanicolaou) e respectivos prontuários, emitidos entre os anos de 2003 e 2011. Foram selecionadas as variáveis referentes à idade e a alteração citopatológica e classificadas segundo Bethes da, 2001. Resultados: da totalidade de laudos de exames citopatológicos analisados, 15,5% possuem alguma alteração celular e a que apresentou maior prevalência foi a atipia de células escamosas de significado indeterminado(ASC-US), com 50,28%, seguida das lesões intraepiteliais de baixo grau (LIEBG), com 35,45%. Em ambos os casos as mulheres com idade inferior a 25anos foram as que apresentaram maior prevalência. Cerca de 13% das pacientes apresentaram infecção pelo HPV e a maior prevalência foi observada nafaixa etária inferior a 25 anos (47,84%). Conclusão: a faixa etária de maior prevalência de lesões cervicais está em mulheres com idade inferior a 25 anose muitas das alterações celulares estão associadas à infecção pelo HPV. Salienta-se, portanto, a necessidade de políticas de rastreamento de lesões cervicais em mulheres nesta faixa etária, evitando assim a progressão das lesões que evoluem ao câncer.

Cancer of the cervix has been named as the third most common type of cancer among women and its relation to infection by human papillomavirus (HPV) is well established. Objective: cytopathologic know the profile of women attending the Basic Health Units in the municipality of Uruguaiana, RS. Methods: retrospective analysis of cross-sectional and descriptive the reports of cytopathology from patients who underwent gynecologic cytology (Papanicolaou) and their medical records, issued between the years 2003 and 2011. We selected the variables related to age and change and cytopathological sorted by Bethesda, 2001. Results: of all reports of reports of cytopathology analyzed, 15.5% have a cell phone and some change withthe highest prevalence was atypical squamous cells of undetermined significance (ASC-US), with 50.28%, followed by low-grade intraepithelial lesions(LSIL), with 35.45%. In both cases, women younger than 25 years showed the highest prevalence. About 13% of patients had HPV infection and the highestprevalence was observed in the age group below 25 years (47.84%). Conclusion: the age group with the highest prevalence of cervical lesions in womenis under the age of 25 years and many of the cellular changes associated with HPV infection. It is noteworthy, therefore, the need for political screening ofcervical lesions in women in this age group, thus preventing the progression of lesions that evolve to cancer.

Clinical and laboratorial study of HPV infection in men infected with HIV

OBJECTIVES: To determine the prevalence of precursor lesions of penile cancer, to establish the concordance of diagnostic techniques (PCR, Hybrid Capture (HC) and peniscopy with acetic acid 5%) in the diagnosis of Human Papilloma Virus (HPV) of the penis of men infected with HIV and to evaluate the influence of the immune status. PATIENTS, METHODS AND RESULTS: 276 men were studied, with a median age of 34.6 years. Prevalence of High Risk HPV, Low Risk HPV and infection with both, according to HC, was 43%, 32% and 22%, respectively. PCR showed 50% of positivity for HPV DNA. Peniscopy was positive in 27% of individuals. Peniscopy showed good specificity and low sensitivity for the detection of penile HPV, and low concordance with PCR. Men with white lesions had a 3.6 higher relative risk of positivity for HPV. The most common clinical lesion observed was vegetation, identified in 29% of patients. PCR and HC techniques showed high sensitivity for HPV DNA and there was an excellent correlation between them. Immunosuppressed individuals with CD4< 200 cells/mm3 had the highest prevalence of pre-malignant lesions that were observed in 10% of the studied individuals. CONCLUSIONS: Peniscopy was important for identification and treatment of subclinical lesions. PCR and HC techniques were sensitive methods for the detection of HPV DNA with high concordance. Severely immunosuppressed individuals showed a higher prevalence of pre-malignant lesions of the penis.

Células escamosas atípicas cervicais: conduta clínica / Cervical atypical squamous cells: clinical management

O diagnóstico precoce e o rastreamento das lesões precursoras do câncer do colo uterino são de extrema importância. O diagnóstico citológico ainda é a principal ferramenta para a prevenção. O uso de testes para detectar o DNA-HPV associado à citologia tem sido proposto, visto que existem evidências epidemiológicas de que o papilomavírus humanos (HPV) é causa necessária para a ocorrência do câncer cervical. De acordo com a classificação de Bethesda 2001, células escamosas atípicas (ASC) são alterações citológicas sugestivas de lesão intraepitelial, qualitativa ou quantitativamente insuficientes para uma interpretação definitiva. Elas são subdivididas em ASC-US (células escamosas atípicas de significado indeterminado possivelmente não neoplásicas) e ASC-H (células escamosas atípicas não sendo possível excluir lesão intraepitelial de alto grau). O seguimento ideal para mulheres com diagnóstico de ASC é controverso e existem dúvidas sobre como realizá-lo, bem como qual o tratamento mais apropriado. O objetivo desta revisão consiste em avaliar o seguimento e tratamento das mulheres com diagnóstico citológico de ASC. Foi realizada revisão da literatura de estudos indexados em banco de dados como MEDLINE, PubMed e LILACS.

Early diagnosis and screening of precursor lesions of cervical cancer are extremely important. The cytological diagnosis is still the main tool to prevention. The use of tests to detect DNA-HPV combined with cytology has been proposed, since there are epidemiological evidences that human papillomavirus (HPV) is a necessary cause for the occurrence of cervical cancer. According to the 2001 Bethesda classification atypical squamous cells (ASC), there are cytological changes suggestive of squamous intraepithelial lesion that are qualitatively or quantitatively insufficient for a definitive interpretation. It is subdivided into ASC-US (atypical squamous cells of undetermined significance may not neoplastic) and ASC-H (atypical squamous cells is not possible to exclude high-grade intraepithelial lesion). The ideal follow-up for women diagnosed with ASC is controversial and there are doubts about how to accomplish it and the most appropriate treatment. The objective of this review is to evaluate the monitoring and treatment of women with cytological diagnosis of ASC. We performed a literature review of studies indexed in databases such as MEDLINE, PubMed and LILACS.

Análise comparativa de biomarcadores no câncer cervical invasivo e sua correlação com o tipo de HPV / Comparative analysis of biomarkers in invasive cervical cancer and its correlation with hpv type

O câncer cervical é o terceiro tipo de câncer mais comum entre mulheres no mundo. Dentre outros cofatores, a infecção pelo HPV de alto risco, tem sido bem documentada como fator necessário ao desenvolvimento desse tipo de câncer. A principal ação do HPV envolve a expressão massiva das oncoproteínas virais E6 e E7 que podem formar complexos específicos com proteínas supressoras de tumor, sendo capazes de alterar mecanismos do ciclo celular, modificando a expressão de proteínas celulares. Um dos principais avanços na medicina clínico patológica é o uso dessas proteínas como marcadores de forma a aumentar a acurácia do prognóstico e do próprio estadiamento do câncer cervical. Assim, a fim de reforçar a hipótese de que as proteínas associadas ao ciclo celular Ki-67, MCM-2, p53 e p16INK4a se encontram superexpressas no câncer cervical, foram analisadas em 87 amostras cervicais de pacientes com câncer invasivo (CCI) e 43 cérvix normais. Verificamos também se há uma expressão diferencial que pode ajudar a avaliação do estadiamento clínico da FIGO e quais tipos virais podem induzir a uma expressão diferencial dessas proteínas. Além disso, características sociodemográficas, comportamentais e clínicas das pacientes foram obtidas dos prontuários e analisadas. Para isso, a detecção de DNA de HPV foi realizada pela técnica da PCR e hibridização in situ. A expressão das proteínas foi observada por imunohistoquímica, seguida por quantificação manual e através do software ImagePro Plus. A análise estatística foi feita utilizando o software STATA/SE 10.1 aplicando os testes: Kruskall-Wallis, Student, Fisher e Qui-Quadrado. Nossos resultados mostraram forte associação (p<0,05) do CCI e dos estágios tumorais mais avançados (III e IV) com mulheres superiores a 55 anos, com mais de quatro gestações e sem escolaridade. A prevalência de DNA de HPV por PCR na população total foi de 73,4 por cento. Nos grupos de CCI e controle foram, respectivamente, 94,3 por cento e 29,3 por cento. O tipo mais prevalente foi o HPV16 (70,8 por cento), acompanhado pelo HPV33 (11,2 por cento) e 35 (4,5 por cento). Como esperado, foi observado aumento (p<0,05) na expressão de Ki-67, MCM-2, p53 e p16INK4a no CCI, quando comparados ao controle. A proteína p16INK4a com expressão difusa, citoplasmática e nuclear esteve associada ao câncer. Ki-67 apresentou forte expressão (>50 por cento) conforme o agravamento da doença. Não foi observada associação entre a expressão de MCM-2, p53 e p16, e o estadiamento do tumor. Como conclusões, foram observadas maiores chances no desenvolvimento do CCI em mulheres com idades superiores a 55 anos, com mais de quatro gestações e sem escolaridades, estando esses fatores associados, também, à progressão tumoral. Apenas o marcador Ki-67 associouse ao estágio do CCI. Os tipos mais prevalentes encontrados, HPV16, 33, 35, 67 e 58, sugerem que novos estudos devam ser considerados para implementação de vacinação contra o HPV no Brasil.

Colposcopic triage methods for detecting cervical intraepithelial neoplasia grade 3 after cytopathological diagnosis of low-grade squamous intraepithelial lesion: a systematic review on diagnostic tests / Métodos de triagem colposcópica para detecção de neoplasia intraepitelial cervical grau 3 após diagnóstico citopatológico de lesão intraepitelial escamosa de baixo grau: uma revisão sistemática de testes diagnósticos

CONTEXT AND OBJECTIVE: The age-stratified performance of the oncogenic HPV-DNA (human papillomavirus deoxyribonucleic acid) test for triage of low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL) requires investigation. The objective of this study was to evaluate and compare the age-stratified performance (cutoff point: 35 years) of oncogenic HPV-DNA testing and repeated cytological tests, for detecting cervical intraepithelial neoplasia grade 3 (CIN3), in order to triage for LSIL. DESIGN AND SETTING: Systematic review. Studies were identified in nine electronic databases and in the reference lists of the articles retrieved. METHODS: The eligibility criteria consisted of initial cytological findings of LSIL; subsequent oncogenic HPV-DNA testing and repeated cytological tests; and CIN3 detection. The Quality Assessment of Diagnostic Accuracy Studies (QUADAS) guidelines were used for quality assessment. Qualitative information synthesis was performed. RESULTS: Out of 7,776 studies, 284 were identified as pertinent and three fulfilled the eligibility criteria. The CIN3 prevalence ranged from 6 percent to 12 percent. The HPV-DNA positivity rate ranged from 64 percent to 83 percent; sensitivity for CIN3 detection ranged from 95.2 percent to 100 percent; and specificity was available in two studies (27 percent and 52 percent). The sensitivity of repeated cytological tests, in relation to the threshold for atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS), was available in two studies (33 percent and 90.8 percent); and specificity was available in one study (53 percent). CONCLUSIONS: Currently, there is no scientific evidence available that would prove that colposcopic triage using oncogenic HPV-DNA testing to detect CIN3 performs better than repeated cytological tests, among women with LSIL aged 35 years and over.

CONTEXTO E OBJETIVO: O desempenho do teste de DNA-HPV (ácido desoxirribonucleico-papilomavírus humano) oncogênico estratificado por idade para triagem de lesão intraepitelial escamosa de baixo grau (LSIL) demanda investigação. O objetivo do estudo foi avaliar e comparar o desempenho, para detecção de neoplasia intraepitelial cervical (NIC3), do teste de DNA-HPV oncogênico e da citologia de repetição estratificados por idade (ponto de corte 35 anos), para triagem de LSIL. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Revisão sistemática da literatura. Foram identificados estudos em nove bases de dados eletrônicas e listas de referências dos artigos recuperados. MÉTODOS: Critérios de elegibilidade: citologia inicial LSIL, realização do teste de DNA-HPV oncogênico e da citologia de repetição e detecção de NIC3. A diretriz QUADAS (Quality Assessment of Diagnostic Accuracy Studies) foi utilizada para avaliação da qualidade. As informações foram sintetizadas qualitativamente. RESULTADOS: Dentre 7.776 estudos, 284 eram pertinentes ao tema e três atenderam aos critérios de elegibilidade. A prevalência de NIC3 apresentou variação entre 6 por cento e 12 por cento. A taxa de positividade do teste de DNA-HPV apresentou variação entre 64 por cento e 83 por cento; a sensibilidade para NIC3 apresentou variação entre 95,2 por cento e 100 por cento; a especificidade estava disponível em dois estudos (27 por cento e 52 por cento). A sensibilidade da citologia de repetição (ponto de corte ASCUS - células escamosas atípicas de significado indeterminado) estava disponível em dois estudos (33 por cento e 90,8 por cento); a especificidade estava disponível em um estudo (53 por cento). CONCLUSÕES: Não existem, atualmente, evidências científicas disponíveis para comprovar que, em mulheres com 35 anos ou mais e citologia LSIL, a triagem colposcópica com teste de DNA-HPV oncogênico apresenta melhor desempenho para detecção de NIC3 do que a repetição citológica.

Comparative analysis of three methods for HPV DNA detection in cervical samples / Análisis comparativo de tres métodos para la detección del ADN de VPH en muestras de cuello uterino

High risk HPV infection is considered to play a central role in cervical carcinogenesis. HPV DNA testing has shown to be a very useful tool for screening and following cervical infections. The aim of this study was to compare three methods for HPV DNA detection, along with cytology and colposcopy analysis. Cervical samples were collected from 100 sexually active women in Mérida, western Venezuela. HPV infection was screened using Hybrid-Capture 2 (HC2), L1-Nested-PCR and E6/E7-PCR assays. 40% of the samples (40/100) were HPV positive by at least one of the DNA detection methods. HC2 detected HPV in 12% specimens. L1- and E6/E7-PCRs showed 50% sensitivity and 77% specificity.The agreement rate between HC2 and both PCR assays was 65%. Kappa value showed moderate concordance between HC2 and both PCR methods (κ=0.55; CI 95%). Also moderate concordance was seen when L1- and E6/E7-PCRs were compared (κ=0.48; CI 95%). There was a significant association between the Schiller test and E6/E7-PCR (p=0.006) for HPV infection. An acceptable agreement between all three assays for HPV detection was observed. Nevertheless, different PCR formats need to be further analyzed in order to make the right choice of method for HPV testing.

La infección con VPH de alto riesgo es el principal factor etiológico asociado al desarrollo de carcinogénesis cervical y las pruebas de detección de ADN-VPH han mostrado ser una herramienta esencial para la pesquisa y seguimiento de estas infecciones. El objetivo del estudio ha sido comparar tres métodos para la detección del ADN viral, en combinación con los análisis colposcópico y citológico. Se obtuvieron muestras cervicales de 100 mujeres sexualmente activas, en Mérida, Venezuela. La detección de infecciones por VPH se realizó por Captura Híbrida 2 (CH2) y los ensayos de PCR “L1-Nested-PCR” y “E6/E7-PCR”. 40% de las muestras (40/100) fueron positivas para VPH por al menos uno de los métodos aplicados. 12% de las muestras analizadas fueron positivas para VPH por CH2. Las dos PCR utilizadas mostraron un 50% de sensibilidad y 77% de especificidad. La coincidencia observada entre CH2 y las dos PCR fue del 65%. La determinación del valor Kappa mostró una concordancia moderada entre CH2 y ambos métodos de PCR (κ=0,55; CI 95%). También existió concordancia moderada al comparar las PCR de las regiones L1 y E6/E7 de VPH (κ=0,48; CI 95%). Hubo una asociación significativa entre el resultado del test de Schiller y la PCR E6/E7 (p=0,006) para la infección por VPH. Se determinó una concordancia aceptable entre los tres métodos aplicados para la detección de VPH; sin embargo, las PCR deben ser analizadas en trabajos futuros con el fin de establecer las pruebas más adecuadas para la detección viral.

Human papillomavirus (HPV) detection and Papanicolaou cytology in low-resource women in Posadas city, Misiones, Argentina / Detección del virus papiloma humano (HPV) y citología de Papanicolaou en mujeres de bajos recursos de la ciudad de Posadas, Misiones, Argentina

The objective of this study was to determine the prevalence of HPV infection and cervical lesions present in women who attended a health center in a low-resource area of the city of Posadas, Misiones, Argentina. Cervical cell samples (n = 163) were processed for Papanicolaou cytology and HPV-PCR tests. Socio-cultural risk factors were estimated using the odds ratio (OR, CI 95 %). Cervical lesions were detected in 14.7 % of women. The general prevalence of HPV infection was of 38 %. The most common types among the total population were HPV-16 (9.8 %) and HPV-33 (9.3 %). HPV-16 was detected in association with 29.2 % and 6.5 % of women with and without cervical lesions, respectively, the OR being 5.3 (1.8-15.8). Risk factors for HPV-16 infection were a smoking habit and a history of previous sexually-transmitted diseases. These data are important for the implementation of prevention programs, including an appropriate introduction of vaccination and the baseline for virological surveillance in the vaccine era.

El objetivo de este estudio fue determinar la prevalencia de la infección por HPV y de lesiones cervicales en mujeres asistidas en un centro de salud situado en un área de bajos recursos de la ciudad de Posadas, Misiones, Argentina. Las muestras (n = 163) fueron examinadas mediante las pruebas de Papanicolaou y de PCR para HPV. Los factores socio-culturales de riesgo fueron identifcados mediante el cálculo de la odds ratio (OR, IC 95 %). Se detectaron lesiones cervicales en el 14,7 % de las mujeres. La prevalencia de infección por HPV fue de 38 %. Los tipos más frecuentes en la población total fueron HPV-16 (9,8 %) y HPV-33 (9,3 %). El HPV-16 se detectó asociado al 29,2 % y al 6,5 % de las mujeres con lesiones del cuello uterino y sin ellas, respectivamente, con un OR de 5,3 (1,8-15,8). Los factores de riesgo para la infección por HPV-16 fueron el hábito de fumar y el antecedente de enfermedades de transmisión sexual. Estos datos son importantes para la ejecución de los programas de prevención, incluyendo una introducción adecuada de la vacunación y la línea de base para la vigilancia virológica en la era de la vacuna.

Prevalence and multiplicity of HPV in HIV women in Minas Gerais, Brazil / Prevalência e multiplicidade do HPV em mulheres infectadas pelo HIV em Minas Gerais

OBJECTIVE: To detect the frequency and subtypes of HPV in the uterine cervix of HIV-infected women. METHODS: Sample consisted of 288 HIV-infected women, recruited from the public health system of five cities of Minas Gerais, Brazil. Women were seen from August 2003 to August 2008. Cervical samples were collected for cytological analysis and for HPV DNA detection, using polymerase chain reaction (PCR). HPV DNA was classified according to its oncogenic potential in low risk (types 6, 11) and high risk (types 16, 18, 31, 33, 35). Colposcopy was performed, followed by cervical biopsy when necessary. Categorical variables were compared using the Chi-squared test, with a significance level established at the 5 percent level. RESULTS: HPV prevalence was 78.8 percent. Most frequent genotypes were HPV-6 (63.9 percent) and HPV-16 (48.5 percent). High-risk HPV were observed in 70.5 percent of the women; low-risk in 71.4 percent; both high and low-risk HPV were detected in 55.1 percent of the patients. Multiple HPV genotypes were detected in 64.8 percent of the patients; two genotypes in 23.8 percent, and three in 18.9 percent. CONCLUSION: HPV prevalence was high among HIV-infected women. Multiple HPV genotypes were common in samples from the uterine cervix of HIV-infected women.

OBJETIVO: Detectar a frequência e os subtipos do HPV na cérvice uterina de mulheres infectadas pelo HIV. MÉTODOS: A amostra era composta por 288 mulheres infectadas pelo HIV, recrutadas do sistema público de saúde de cinco cidades de Minas Gerais, Brasil. As mulheres foram avaliadas de agosto de 2003 a agosto de 2008. Amostras cervicais foram coletadas para análise citológica e para detecção do HPV DNA, usando a reação em cadeia de polimerase (PCR). O HPV DNA foi classificado de acordo com seu potencial oncogênico em baixo risco (tipos 6,11) e alto risco (tipos 16, 18, 31, 33, 35). Foi realizada colposcopia, seguida de biópsia cervical, quando indicada. Variáveis categóricas foram comparadas usando o teste do quiquadrado, com nível de significância estabelecido de 5 por cento. RESULTADOS: A prevalência do HPV foi 78,8 por cento. Os genótipos mais frequentes foram HPV-6 (63,9 por cento) e HPV-16 (48,5 por cento). Genótipos de HPV de alto risco foram observados em 70,5 por cento das mulheres; de baixo risco em 71,4 por cento; HPV de alto e baixo risco foram detectados em 55,1 por cento das pacientes. Múltiplos genótipos de HPV foram detectados em 64,8 por cento das pacientes; dois genótipos em 23,8 por cento, e três em 18,9 por cento. CONCLUSÃO: A prevalência do HPV foi alta entre mulheres infectadas pelo HIV. Múltiplos genótipos de HPV foram comuns em amostras da cérvice uterina destas mulheres.

Detection of gene amplification in MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR, AKT2, and human papilloma virus in samples from cervical smear normal cytology, intraepithelial cervical neoplasia (CIN I, II, III), and cervical cancer / Detección de amplificación en los genes MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR y AKT2 y del virus de papiloma humano en muestras de cepillado cervical en mujeres con citología normal y con neoplasia intraepitelial cervical (NIC) I, II, III y cáncer de cuello uterino

Introduction: Cervical cancer is the second most common cancer among women worldwide and the second cause of cancer mortality in women. It has been demonstrated that the process of cervical carcinogenesis displays genetic and environmental epigenetic components. Currently, research is focused on new prognosis markers like oncogene amplification.Objectives: To perform detection of MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR, and AKT2 amplification. Additionally, to detect human papillomavirus in samples from normal cytology smear, cervical intraepithelial neoplasia (CIN) I, II, and III and cervical cancer patients.Methods: Papillomavirus (HPV) genotyping by reverse line blot (RLB) performed and gene amplification by detection with real-time PCR with Taqman probes.Results: HPV was present in 4% of the patients with normal cytology, 48% in CIN I, 63.6% in CIN II, 64% in CIN III, and 70.8% in cervical cancer. Genes amplified in cervical cancer were MYCN (39.1%), ERBB2 (34.7%), and MYCL1 (30.4%); showed higher amplification in high-grade lesions and cervical cancer in relation to low-grade lesions and normal cytology with statistically significant differences. Besides the genes, C-MYC, EGFR, and AKT2 were amplified in samples from patients with cervical cancer by 12%, 18%, and 13%, respectively; we did not find statistical differences.Conclusion: Higher prevalence of gene amplification and HPV was found in high-grade cervical lesions and cervical cancer.

Introducción: El cáncer cervical es el segundo cáncer más importante en mujeres a nivel mundial y es la segunda causa de muerte por cáncer en mujeres. Se ha demostrado que el proceso de carcinogénesis cervical presenta componentes tanto genéticos como epigenéticos y medio ambientales. En la actualidad, hay gran interés en la búsqueda de marcadores moleculares asociados con la progresión de esta enfermedad, uno de los posibles mecanismos y que además está poco estudiado en cáncer cervical es la amplificación génica de algunos oncogenes como la familia MYC, EGFR y AKT entre otros.Objetivos: Detectar la amplificación génica de MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR y AKT2 además de la presencia del virus de papiloma humano en cepillados cervicales en mujeres con citología normal o con neoplasia intraepitelial cervical (NIC) I, II y III o con cáncer cervical.Métodos: Se genotipificó mediante reverse line blot (RLB) el virus de papiloma humano (VPH) y se determinó el estado de amplificación génica de los genes mencionados mediante PCR en tiempo real utilizando sondas taqman.Resultados: El VPH se encontró presente en 4% de las pacientes con citología normal, en 48% en NIC I, 63.6% en NIC II, 64% en NIC III y 70.8% en cáncer cervical. Los genes MYCN, MYCL1 y ERBB2 mostraron mayor amplificación en lesiones de alto grado y cáncer con diferencias estadísticamente significativas a las lesiones de bajo grado y citología normal, en 39.1%, 34.7% y 30.4% respectivamente. Además, se encontraron amplificados los genes C-MYC, EGFR y AKT2, en muestras de pacientes con cáncer cervical, en 12%, 18% y 13% respectivamente. Sin embargo, no se observaron diferencias estadísticamente significativas con respecto a las lesiones de alto y bajo grado y citología normal.Conclusión: En las lesiones de alto grado como en cáncer cervical, se encuentra mayor prevalencia del virus al igual que se detectan mayor cantidad de alteraciones genéticas como la amplificación génica.

Human papillomavirus (HPV) detection in lip squamous cell carcinoma: correlation with clinical aspects and risk factors / Detecção do papilomavírus humano (HPV) em carcinoma espinocelular de lábio: correlação com aspectos clínicos e fatores de risco

O papilomavírus humano (HPV) está associado a um largo espectro de lesões em humanos e tem sido ligado à carcinogênese oral. O objetivo deste estudo foi investigar a presença do DNA do HPV em pacientes com carcinoma espinocelular de lábio e correlacioná-la com aspectos clínicos e fatores de risco. Foram estudados 33 pacientes com carcinoma espinocelular de lábio. Destes, 30 pacientes foram positivos para o gene da beta-globina humana e então foram testados para o DNA do HPV com uso da reação em cadeia de polimerase em duas etapas (PCR e nPCR) com os oligonucleotídeos iniciadores MY11/MY09 e GP5+/ GP6+. O DNA do HPV foi detectado em 43,33 por cento dos 30 pacientes analisados. Não houve associação com os fatores de risco analisados.

Human papillomavirus (HPV) is associated with a wide spectrum of lesions in humans, and it has been linked to oral carcinogenesis. The aim of this study was to investigate the presence of HPV DNA in patients with lip squamous cell carcinoma and to correlate it with clinical characteristics and risk factors. We studied 33 patients with lip squamous cell carcinomas. Of these, 30 were positive for human beta globin gene and tested for HPV DNA, using polymerase chain reaction in two steps (PCR and nPCR) with MY11/MY09 and GP5+/GP6+ primers. HPV DNA was detected in 43.33% of patients analyzed. There was no association with the risk factors analyzed.

Detección de virus papiloma humano (HPV) a partir de muestras celulares de cuello uterino en base líquida: Correlación con la inmunorreactividad de la proteína p16INK4a / Detection of human papilloma virus (HPV) in liquid-based cervical samples: Correlation with protein p16INK4a expression

La citología del cuello uterino en base líquida mejora la calidad de la muestra y el material residual podría ser utilizado para realizar pruebas complementarias, como la detección del virus papiloma humano (HPV) y estudio inmunocitoquímico de biomarcadores. El propósito de este estudio fue correlacionar la presencia de HPV y la inmunoexpresión de p16INK4a en las muestras citológicas en base líquida para examinar la utilidad de estas nuevas herramientas en la detección de cáncer de cuello uterino. Las pacientes incluidas (n=67) presentaban una citología anormal o patología cervical previa. La detección y genotipificación de HPV se realizó con PCR-SPF10/LiPA (INNOLiPA Extra Amp) y para la inmunodetección de p16INK4a se utilizó el anticuerpo clon E6H4. La citología convencional proporcionó los mismos hallazgos citológicos que la citología en base líquida. La prevalencia general del HPV fue de 43,3% (29/67). El HPV16 fue el tipo viral mas frecuente (31,03%) y el 48,3% de los casos presentó infección múltiple. En el 35,8% de las muestras cervicales se detectó inmunoexpresión de la p16INK4a y ésta fue significativamente (p<0,020) asociada a la presencia de HPV. Estos resultados apoyan la evidencia que la implementación de nuevas tecnologías en la rutina diaria del laboratorio contribuye significativamente en la detección precoz del cáncer de cuello uterino y en el aporte de datos importantes para facilitar en el manejo clínico adecuado de la paciente. La detección de HPV combinada con la p16INK4a podría ser utilizado en la evaluación de pacientes con mayor riesgo a desarrollar lesiones cervicales significativas.

The liquid-based cervical cytology improves the quality of the sample and the residual sample could be used efficiently to carry out complementary tests, such as the detection of HPV DNA and the immunocytochemical biomarkers study. The purpose of this study was to correlate the presence of HPV and immunoexpression of p16INK4a in liquid-based cervical samples to examine the utility of these new tools in the detection of cervical cancer. The included patients (n=67) presented an abnormal cytology or previous cervical pathology. The HPV detection and genotyping were carried out with PCR-SPF10/LiPA (INNOLiPA Extra Amp) and for p16INK4a immunodetection was used antibody clone E6H4. The conventional cytology provided the same cytologic interpretations that those of liquid-based cytology. The overall HPV prevalence was 43.3% (29/67). HPV16 was the most frequent viral type (31.03%) and 48.3% of the cases were infected with multiple HPV types. p16INK4a immunoexpression was observed in 35.8% of liquid-based cytological samples and this was significantly (p < 0.020) associated to the HPV presence. These results support the evidence that the implementation of new technologies in the daily routine of the laboratory, contribute significantly in the early detection of cervical cancer and provide important data to help in the patient’s efficient management. The combined use of HPV detection and p16INK4a expression could be used for evaluation of patients with more risk to develop significant cervical lesions.

O uso dos biomarcadores p16 e Ki-67 em citologia cérvico-vaginal: revisão de estudos / The use of biomarkers p16 and Ki-67 in cervix-vaginal cytology: studies review

O Papilomavirus humano- HPV possui diversas variáveis, algumas delas, classificadas como de alto risco, estão envolvidas na etiologia das lesões pré-neoplásicas e neoplásicas do colo uterino. Isto se dá pela integração das oncoproteínas virais E6 e E7 aoDNA da célula infectada, desestabilizando seu ciclo celular. Os biomarcadores moleculares possuem um importante papel preditivo nas doenças. Dentre muitos pode-se destacar a proteína Ki-67, um marcador de proliferação celular e a proteína supressora tumoral p16, que tem sido muito estudada em casos de lesões de colo uterino por sua possível função como marcadora prognóstica. Oobjetivo deste artigo é comparar os resultados dos estudos quanto à associação da expressão dos biomarcadores em diferentes diagnósticos de citologia cérvico-vaginal .

The human papillomavirus-HPV has many variables, and some of them are classified as high risk. HPV are involved in the aetiology of pre-neoplastic and neoplastic lesions of the cervix. This is due to integration of viral oncoproteins E6 and E7 DNA of the infected cell disrupting the cell cycle. The molecular biomarkers have an important predictive role in diseases. The Ki-67 protein is used as marker of cell proliferation, and the tumor suppressor p16 protein has been studied in cases of cervix lesons forits possible role as a prognostic marker. The aim of this paper is to compare the results of studies regarding the association of expression of biomarkers in different diagnoses of cervicovaginal cytology.