RESUMO
DNA encoded ligands are self-assembled into bivalent complexes and chemically ligated to link their identities. To demonstrate their potential as a combinatorial screening platform for avidity interactions, the optimal bivalent aptamer design (examplar ligands) for human alpha-thrombin is determined in a single round of selection and the DNA scaffold replaced with minimal impact on the final design.
Assuntos
Técnicas de Química Combinatória , DNA/química , Bibliotecas de Moléculas Pequenas/química , Trombina/análise , Cristalografia por Raios X , Humanos , Ligantes , Modelos Moleculares , Estrutura MolecularAssuntos
Países em Desenvolvimento , Deficiências do Desenvolvimento/enfermagem , Emprego/psicologia , Adolescente , Criança , Pré-Escolar , Coerção , Comparação Transcultural , Deficiências do Desenvolvimento/etiologia , Deficiências do Desenvolvimento/prevenção & controle , Deficiências do Desenvolvimento/psicologia , Feminino , Alemanha , Tráfico de Pessoas/psicologia , Humanos , Masculino , Fatores de RiscoAssuntos
Características de Residência , Classe Social , Meio Social , Fatores Socioeconômicos , Criança , Pré-Escolar , Feminino , Alemanha , Comportamentos Relacionados com a Saúde , Humanos , Lactente , Recém-Nascido , Estilo de Vida , Sobrepeso/enfermagem , Sobrepeso/psicologia , Gravidez , Carência Psicossocial , Fatores de RiscoRESUMO
Aptamer microarrays are a promising high-throughput method for ultrasensitive detection of multiple analytes, but although much is known about the optimal synthesis of oligonucleotide microarrays used in hybridization-based genomics applications, the bioaffinity interactions between aptamers and their targets is qualitatively different and requires significant changes to synthesis parameters. Focusing on streptavidin-binding DNA aptamers, we employed light-directed in situ synthesis of microarrays to analyze the effects of sequence fidelity, linker length, surface probe density, and substrate functionalization on detection sensitivity. Direct comparison with oligonucleotide hybridization experiments indicates that aptamer microarrays are significantly more sensitive to sequence fidelity and substrate functionalization and have different optimal linker length and surface probe density requirements. Whereas microarray hybridization probes generate maximum signal with multiple deletions, aptamer sequences with the same deletion rate result in a 3-fold binding signal reduction compared with the same sequences synthesized for maximized sequence fidelity. The highest hybridization signal was obtained with dT 5mer linkers, and the highest aptamer signal was obtained with dT 11mers, with shorter aptamer linkers significantly reducing the binding signal. The probe hybridization signal was found to be more sensitive to molecular crowding, whereas the aptamer probe signal does not appear to be constrained within the density of functional surface groups commonly used to synthesize microarrays.
Assuntos
Aptâmeros de Nucleotídeos/biossíntese , Análise de Sequência com Séries de Oligonucleotídeos/métodos , Estimulação Luminosa/métodos , Aptâmeros de Nucleotídeos/genética , Ligação Proteica/fisiologiaAssuntos
Antibacterianos/uso terapêutico , Mortalidade da Criança/tendências , Controle de Doenças Transmissíveis/tendências , Países em Desenvolvimento , Mortalidade Infantil/tendências , Vacinação/tendências , Adolescente , Causas de Morte/tendências , Criança , Pré-Escolar , Comparação Transcultural , Previsões , Humanos , LactenteAssuntos
Anormalidades Congênitas/enfermagem , Exposição Ocupacional/efeitos adversos , Exposição Paterna/efeitos adversos , Efeitos Tardios da Exposição Pré-Natal/enfermagem , Anormalidades Congênitas/etiologia , Anormalidades Congênitas/prevenção & controle , Feminino , Alemanha , Humanos , Recém-Nascido , Masculino , Exposição Ocupacional/prevenção & controle , Exposição Paterna/prevenção & controle , Gravidez , Efeitos Tardios da Exposição Pré-Natal/prevenção & controleAssuntos
Maus-Tratos Infantis/prevenção & controle , Violência Doméstica/prevenção & controle , Criança , Maus-Tratos Infantis/estatística & dados numéricos , Estudos Transversais , Crianças com Deficiência , Violência Doméstica/estatística & dados numéricos , Educação , Alemanha , Humanos , Fatores de RiscoAssuntos
Transtornos do Espectro Alcoólico Fetal/enfermagem , Diagnóstico de Enfermagem , Criança , Pré-Escolar , Diagnóstico Precoce , Feminino , Transtornos do Espectro Alcoólico Fetal/diagnóstico , Transtornos do Espectro Alcoólico Fetal/prevenção & controle , Alemanha , Humanos , Lactente , Recém-Nascido , Masculino , Enfermagem Materno-Infantil , Gravidez , Cuidado Pré-Natal , Fatores de RiscoRESUMO
L-DNA is the perfect mirror-image form of the naturally occurring d-conformation of DNA. Therefore, L-DNA duplexes have the same physical characteristics in terms of solubility, duplex stability and selectivity as D-DNA but form a left-helical double-helix. Because of its chiral difference, L-DNA does not bind to its naturally occurring D-DNA counterpart, however. We analysed some of the properties that are typical for L-DNA. For all the differences, L-DNA is chemically compatible with the D-form of DNA, so that chimeric molecules can be synthesized. We take advantage of the characteristics of L-DNA toward the establishment of a universal microarray that permits the analysis of different kinds of molecular diagnostic information in a single experiment on a single platform, in various combinations. Typical results for the measurement of transcript level variations, genotypic differences and DNA-protein interactions are presented. However, on the basis of the characteristic features of L-DNA, also other applications of this molecule type are discussed.
Assuntos
DNA/química , Análise de Sequência com Séries de Oligonucleotídeos/métodos , Animais , DNA/síntese química , DNA/metabolismo , Proteínas de Ligação a DNA/análise , DNA Polimerase Dirigida por DNA/metabolismo , Desoxirribonucleases/metabolismo , Perfilação da Expressão Gênica/métodos , Marcadores Genéticos , Técnicas de Diagnóstico Molecular , Conformação de Ácido Nucleico , Sondas de Oligonucleotídeos , Polimorfismo de Nucleotídeo Único , EstereoisomerismoAssuntos
Procedimentos de Cirurgia Plástica/psicologia , Procedimentos de Cirurgia Plástica/tendências , Psicologia do Adolescente , Psicologia da Criança , Adolescente , Adulto , Criança , União Europeia , Feminino , Alemanha , Humanos , Lipectomia , Masculino , Mamoplastia , Relações Pais-Filho , Procedimentos de Cirurgia Plástica/estatística & dados numéricos , Religião e Medicina , Rinoplastia , Estados UnidosRESUMO
A general synthetic approach to various isoxanthopterin-nucleosides starting from 6-methyl-2-methylthio-4(3H),7(8H)-pterdinedione (1) has been developed. Ribosylation with 1-O-acetyl-2,3,5-tri-O-benzoyl-beta-D-ribofuranose via the silyl-method led to 2 and reaction with 1-chloro-2-deoxy-3,5-di-O-p-toluoyl-alpha-D-ribofuranose using the DBU-method afforded 28. Protection of the amide function at O4 by benzylation to 5 and by a Mitsunobu reaction with 2-(4-nitrophenyl)ethanol to 29 gave soluble intermediates which can be oxidized to the corresponding 2-methylsulfonyl derivatives 8 and 30, respectively. Nucleophilic displacement reactions of the highly reactive 2-methylsulfonyl functions by various amines proceeded under mild conditions to isoxanthopterin-N8-ribo- (11-17) and 2'-deoxyribomucleosides (31-33). Debenzylation can be achieve by Pd-catalyzed hydrogenation (9 to 19) and cleavage of the npe-protecting group (31, 32 to 34, 35) works well with DBU by beta-elimination.