RESUMO
El herpesvirus bovino-1 (BHV-1) es un virus de genoma DNA perteneciente a la familia Herpesviridae, el cual afecta al bovino en el que provoca un amplio espectro de manifestaciones clínicas y pérdidas económicas. El principal componente inmunogénico de su envoltura es la glicoproteína D (gD), la cual ha sido caracterizada y utilizada como inmunógeno en distintos sistemas de expresión. El objetivo de este trabajo fue generar un poxvirus recombinante (Raccoonpox [RCN]) que expresara una versión truncada de la gD del BHV-1 para ser usado como inmunógeno. Para ello, se amplificó el gen que codifica para la versión truncada de la gD, la cual se clonó en el plásmido de transferencia pTK/ IRES/tpa que posee sitios de homología a la timidinakinasa del poxvirus, un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) y una señal secretoria (tPA), generando el constructo pTK/gD/IRES/tpa. Para generar el RCN recombinante, se tomaron células BSC-1, se infectaron con una cepa Silvestre del RCN (CDC/V71-I-85A) a un índice de multiplicidad de infección de 0,05 y se transfectaron con el constructo pTK/gD/IRES/tpa; generándose diferentes poblaciones virales con y sin el gen de interés. Para seleccionar los virus recombinantes que expresaban el gen de interés, se realizó una selección de recombinantes negativos para timidina kinasa y positivos para la gD por tres rondas de purificación de placas en monocapas de células RAT-2 las cuales son mutantes para timidina kinasa y en presencia de bromodeoxiuridina. Los virus recombinantes se confirmaron por PCR y secuenciación de nucleótidos y se denominaron RCN-gD.
Bovine Herpesvirus-1 is a DNA virus belonging to the family Herpesviridae, which affects cattle, causing a wide spectrum of clinical manifestations and economic losses. The main immunogenic component is its envelope glycoprotein D (gD), which has been characterized and used as immunogen in different expression systems. The aim of this work was to generate a recombinant poxvirus (Raccoonpox [RCN]) expressing a truncated version of BHV-1 gD to be used as a vaccine. To do this, it was amplified the gene for a truncated version of gD which subsequently was cloned in transfer plasmid PTK/IRES/tpa which has homology to sites of poxvirus thymidine kinase, an internal site of ribosome entry (IRES) and a secretory signal (tPA), generating the construct PTK/gD/IRES/tpa. To generate the recombinant RCN, we took BSC-1 cells and we infected with a wild type RCN (CDC/V71-I-85A) at a multiplicity of infection of 0.05, then cells were transfected with the construct PTK/gD/IRES/tpa, generating different viral populations with and without the gene of interest. To select recombinant viruses expressing the gene of interest, we performed a selection of recombinant thymidine kinase negative and positive for gD by three rounds of plaque purification on RAT-2 cells monolayers which are thymidine kinase null and using bromodeoxyuridine. Recombinant viruses were recovered and confirmed by PCR and nucleotide sequencing and so called RCN-gD.
RESUMO
The Hartón del Valle(HV)cattleisa Criollo breed of Spanish descent that has adapted to the conditionsof the Cauca valley (Colombia). This breed is currently listed as “vulnerable” because its population has dramatically declined in the last two years. Prompted by the uncertain future of this breed and its importance as a potential resource of valuable genes. Objective: this study addressed the diversity, genetic structure and ancestry of HV cattle using mitochondrial DNA (mtDNA). Methods: a 350-bp fragment was amplified and sequenced from 72 HV animals in 9 separate farms and from animals of Brahman and Holstein breeds. To analyze the breed's ancestry, the sequences were compared with 560 sequences available in the GenBank, representing 50 Bos taurus and Bos indicus breeds. Results: in accordance with the Spanish origin of the HV breed, there was a high representation of European mtDNA (91.7%) and a low representation of African (5.5%) and Middle Eastern mtDNA (2.7%). The average haplotype diversity was 0.65 ± 0.05. The farm with the oldest ancestry was the only population in which three mitochondrial lineages were observed; unfortunately, it was recently depopulated. Proximity was observed between HV and two Columbian breeds, the Romosinuano and Costeño con Cuernos. A comparative analysis with the sequences deposited in the GenBank from numerous breeds revealed the presence of 37 haplotypes, seven of which were unique to HV. Conclusions: the following Iberian breeds were found to be most closely related to HV: Tudanca, Rubia Gallega, Negra Serrana, Murciana, Pajuna, Avileña, Garvonesa and Mertolenga. Phylogenetic analysis confirmed the Iberian ancestry and some African influence on this Latin American Criollo breed.
El Hartón del Valle (HV),es una raza adaptada a las condiciones del Valle del Cauca(Colombia) que está catalogada como “vulnerable” y cuya población ha descendido drásticamente en los últimos dos años. Objetivo: debido al futuro incierto y a la importancia como recurso potencial en la seguridad alimentaria regional se abordó el estudio de la diversidad, la estructura genética y la ancestría del HV, mediante ADN mitocondrial (ADNmt). Métodos: se amplificó y secuenció un fragmento de 350 pb en 72 animales HV, provenientes de nueve poblaciones y de controles de las razas Brahman y Holstein. Para analizar la ancestría las secuencias fueron comparadas con 560 secuencias de 50 razas Bos taurus y Bos indicus, depositadas en el GenBank. Resultados: de acuerdo con su origen español, se encontró una marcada influencia del ADNmt europeo (91.7%) y baja participación de taurinos de origen africano (5.5%) y del cercano Oriente (2.7%). La diversidad haplotípica promedio fue 0.65 ± 0.05. El hato más antiguo fue el único que mostró los tres linajes mitocondriales, sin embargo, este ha sido liquidado recientemente. Se observó proximidad entre el HV con las razas colombianas Romosinuano y Costeño con Cuernos. La comparación con las secuencias depositadas en el GenBank con diferentes razas reveló la presencia de 37 haplotipos, de los cuales siete fueron únicos en el HV. Conclusiones: las razas ibéricas más cercanas al HV fueron: Tudanca, Rubia Gallega, Negra Serrana, Murciana, Pajuna, Avileña, Garvonesa y Mertolenga. El árbol filogenético confirmó la ancestralidad ibérica y la influencia africana en las razas criollas de América Latina.
O Hartón del Valle (HV) é uma raça adaptada às condições da região pertencente ao departamento do Valle del Cauca (Colombia). A raça está catalogada como vulnerável já que sua população tem sido reduzida drasticamente nos últimos dois anos. Objetivo: devido a incerteza no futuro da raça e a sua importancia como recurso potencial na segurança alimentaria regional, abordou-se o estudo da diversidade, a estrutura genética e a ancestralidade do gado HV, utilizando DNA mitocondrial (mtDNA). Métodos: para isto, se amplificou e sequenciou um fragmento de 350 pares de bases em 72 animais provenientes de nove populações e também de controles das raças Brahman e Holandesa. Para analizar a ancestralidade das sequências, estas foram comparadas com outras 560 de 50 raças Bos taurus y Bos indicus depositadas no genebank. Resultados: de acordo com sua origem espanhola, foi encontrada uma marcada influência do DNA mitocondrial europeu (91.7%), e baixa participação de taurinos de origem africana (5.5%) e do Oriente Próximo (2.7%). A média da diversidade haplotípica foi de 0.65 ± 0.05. A população de gado HV mais antiga foi a única que apresentou as três linhagens mitocondriais encontradas; embora, esta população foi terminada recentemente. Observou-se também proximidade do gado HV com as raças colombianas da região Caribe, Romosinuano e Costeño con Cuernos. A comparação com as sequências depositadas no genebank com diferentes raças revelou a presença de 37 haplotipos, dos quais sete foram únicos no HV. Conclusões: as raças ibéricas mais aproximadas do HV foram: Tudanca, Rubia Gallega, Negra Serrana, Murciana, Pajuna, Avileña Garvonesa e Mertolenga. A árvore filogenética confirmou sua ancestralidade ibérica e a influência africana nas raças crioulas da América Latina.
RESUMO
The goal of this study was to characterize intensive pig farms with inventories of 200 or more sows. Farms were located in the three major swine rearing areas of Colombia, representing 62% of the national total sow inventory. A random sample of 67 farms was evaluated, considering a 95% confidence level, 10% precision and 50% variability. A survey was applied to each farm, registering health and production indexes within each production stage, such as acclimatization, farrowing, weaning, and growing/finishing. Index differences between regions were established (p<0.05) and herd performance was analyzed to identify strengths and weaknesses of the main Colombian swine industry. Herds in the evaluated regions had a 87.6% farrowing rate, with a total of 11.7 pigs born per litter, of which 10.8 were born alive; and 10 pigs were weaned per litter, with an average production of 22.3 pigs weaned per sow/year. The average slaughter age was 166.1 days with 102.2 kg per pig. Indexes established in the present study were similar or higher compared to the ones reported for other countries. These data suggest that Colombian swine producers still have great opportunities to increase profitability if production costs decrease and the number of pigs and the amount of pork produced per year is increased.
El presente estudio tuvo como objeto caracterizar productivamente las granjas porcícolas colombianas de producción intensiva con más de 200 hembras en el pie de cría en las tres regiones con mayor influencia sobre la producción nacional lo cual representó el 62% del inventario nacional de madres. Se seleccionó aleatoriamente una muestra de 67 granjas con un nivel de confianza del 95%, una precisión del 10% y una variabilidad del 50%. Se aplicó una encuesta para estimar los principales indicadores sanitarios y de productividad en cada una de las etapas de producción: aclimatización, cría, precebo y ceba. Se establecieron las diferencias de los indicadores entre las regiones evaluadas (p<0.05) y se obtuvo una aproximación al desempeño productivo de las granjas identificando las fortalezas y debilidades de los sistemas en las regiones estudiadas. En promedio se estimó que las granjas tienen una tasa de parición del 87.6%, un promedio de 11.7 lechones nacidos totales, 10.8 lechones nacidos vivos y 10 lechones destetos por cerda; producen 22.3 lechones por cerda al año y sacrifican animales de 102 kg de peso con 166.1 días al sacrificio en promedio. Los resultados obtenidos demostraron que los indicadores de competitividad son similares a los reportados en otros países e inclusive superiores, siendo importante considerar que la porcicultura colombiana está en capacidad de disminuir costos de producción asociados al incremento en el número de cerdos y kilogramos producidos por cerda al año.
Este estudo teve como objectivo caracterizar produtivamente as empresas suínas com mais de e 200 fêmeas reprodutoras em três regiões com maior influência nacional, que representaram 62% do inventário nacional das mães. Foi seleccionada aleatoreamente uma amostra de 67 granjas com um nível de confiança de 95%, uma precisão de 10% e uma variabilidade de 50%. Um inquérito foi utilizado para estimar indicadores de saúde e produtividade em todas as fases de produção: aclimatação, cria, reprodução, pré engorda e engorda. Foram encontradas diferencias entre granjas nos indicadores entre as regiões avaliadas (p<0.05) e obteve-se uma aproximação do desempenho produtivo das granjas identificando-se os pontos fortes e fracos dos sistemas nas regiões estudadas. Em média as granjas agrícolas apresentaram uma taxa de natalidade do 87.6%, 11.7 leitões nascidos totais, 10.8 leitões nascidos vivos e 10 leitões desmamados por porca, produzidos 22.3 leitões por porca por ano e o abate foi de 102 kg com 166.1 dias. Os resultados mostraram que os indicadores da competitividade são semelhantes aos relatados em outros países e até mesmo maior, sendo importante considerar que o porco da Colômbia é capaz de reduzir os custos de produção associados ao aumento do número de leitões e kilogramas produzidos por porca ao ano.
RESUMO
El BHV-1 es un agente causante de graves pérdidas económicas. En nuestro país, ha sido reportado desde comienzos de los años 70 y aunque existe un plan de vacunación y prevención de la enfermedad, se sospecha que es uno de los principales limitantes de las explotaciones ganaderas del país. El objetivo de la presente investigación fue desarrollar un estudio serológico de la presencia del BHV-1 en dos sistemas de producción ganadera de leche y carne con antecedentes de no vacunación y posterior intento de aislamiento viral. Se realizó un estudio serológico transversal en el cual se muestrearon 316 individuos pertenecientes a 6 diferentes haciendas ganaderas, ubicadas en los departamentos de Antioquia y del Valle del Cauca. Utilizando la prueba de seroneutralización en cultivo celular, se encontró un 100% de prevalencia serológica por hato para el BHV-1 y una prevalencia general por individuos del 75.63%. La prevalencia para los hatos pertenecientes a los departamentos de Antioquia y del Valle fue del 85.51% y 69.84% respectivamente. Posteriormente, mediante inmunosupresión farmacológica, se realizó aislamiento viral en individuos que presentaron los títulos seroneutralizantes más altos, lográndose aislamientos del virus tanto de toros como de vacas y de diferentes muestras, indicando un estado de enzootia de la infección y demostrando que el BHV-1 sigue siendo uno de los agentes de mayor difusión en diferentes ámbitos ganaderos del país.
Bovine herpesvirus 1 (BHV-1) causes severe economic losses. This virus has been reported in Colombia since the early 70s, and although vaccination and prevention plans have been established, it is considered one of the major constraints for the cattle industry. Our objective was to conduct a serological survey for the presence of BHV-1 in non-vaccinated beef cattle and dairy farms. A cross-sectional serological survey, sampling 316 unvaccinated individuals from six farms located in Antioquia and Valle del Cauca provinces was conducted. The serum neutralization test showed 100% sero-prevalence of BHV-1 in each herd and 75.63% overall prevalence for individuals. The prevalence for herds in Antioquia and Valle provinces was 85.51% and 69.84% respectively. By immunosuppressive therapy, viral isolations were attempted from samples of individuals with the highest neutralizing titers, obtaining isolates from both bulls and cows, indicating an enzootic state of infection and demonstrating that BHV-1 remains one of the most widely dispersed agents in the country.
O BHV-1 é um agente que causa grandes perdas econômicas. Em nosso país, tem sido reportado desde começos dos anos 70 e embora exista um plano de vacinação e prevenção da doença, suspeita-se que é um dos principais limitantes da produção em no pais. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver um estudo sorológico da presença do BHV-1 em dois sistemas de produção de leite e de corte com antecedentes de não vacinação e posterior intento de isolamento viral. Foi realizado um estudo sorológico transversal no qual foram mostrados 316 indivíduos pertencentes a seis fazendas localizadas nos departamentos de Antioquia e Valle del Cauca. Foi utilizada um teste de soro neutralização em cultivo celular, foi encontrado um 100% de prevalência sorológica por fazenda BHV-1 e uma prevalência geral por indivíduos do 75.63%. A prevalência para as fazenda dos departamentos de Antioquia e Valle del Cauca foi do 85.51% e 69.84%, respectivamente. Posteriormente, mediante imuno supressão farmacológica, foi realizado um isolamento viral em indivíduos que apresentaram que títulos soroneutralizantes mais altos, logrando-se isolamentos do vírus em touros e vacas e de diferentes amostras, indicando um estado de enzootia da infecção e demonstrando que o BHV-1 segue sendo um dos agentes de maior difusão em diferentes âmbitos gerados no país.
RESUMO
El virus de la diarrea viral bovina (VDVB) es uno de los agentes infecciosos más importantes del ganadobovino. Este patógeno tiene una distribución mundial y es endémico en la mayoría de las poblacionesbovinas donde alcanza un nivel de seropositividad del 40 al 80%. Así mismo, ocasiona pérdidas económicasprincipalmente de origen reproductivo. Una de las características más importantes de este virus es sualta frecuencia de mutación y la tendencia a la recombinación, lo que ha llevado a que tenga una grandiversidad genética y antigénica; problema que se ve reflejado en las múltiples manifestaciones clínicasobservadas en los animales afectados y en el difícil control de la enfermedad. Los programas de controlutilizados por algunos países se fundamentan en gran medida en la eliminación de la principal fuentede infección: los animales persistentemente infectados (PI), así como en mejorar la respuesta inmunemediante el empleo de vacunas. La inmunización con vacunas inactivadas y virus vivo modificado contraVDVB se ha empleado por décadas sin evidencia de una reducción significativa de la prevalencia de laenfermedad o un control de la infección, por lo cual se han empezado a desarrollar otras estrategiasexperimentales como las vacunas recombinantes, donde se seleccionan genes específicos del BVDV con elfin de inmunizar al ganado buscando superar los inconvenientes de las vacunas convencionales.
Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) is one of the most important infectious agents in cattlepopulation. BVDV is widespread throughout the world and it is endemic disease in most of the cattle population where 40 to 80% are seropositive. It causes economic losses mainly in breeding cattle. BVDVgenetic and antigenic diversity is due to the virus high mutation and recombination frequency, which isreflected in many clinical manifestations and the difficult control of the disease. Control and preventionmeasures implemented by some countries are based on the elimination of the main source of infection: thepersistently infected animals (PI animals), as well as the improvement of the immune response throughthe use of vaccines. Immunization with inactivated and modified-live vaccines has been used for decadeswithout any significant improvement. New experimental strategies are being developed: recombinantvaccines where BVDV specific genes are selected in order to immunize cattle and thus overcome theshortcomings of conventional vaccines.
O vírus da diarréia viral bovina (VDVB) é um dos agentes mais importantes do gado bovino. Estepatogénio tem uma distribuição mundial e é endêmico na maioria das populações bovinas onde alcançaum nível de seropositividade do 40 ao 80%. Também ocasiona perdas econômicas, principalmente deorigem reprodutivo. Uma das características mais importantes do vírus é sua alta freqüência de mutação etendência à recombinação, o que tem ocasionado uma grande diversidade genética e antigênica; problemaque ocasiona múltiples manifestações clinicas observadas nos animais afetados e no difícil controle dadoença. Os programas de controle utilizados por alguns países que fundamentam em grande medidaa eliminação da principal fonte de infecção: os animais persistentemente infectados (PI). Assim comomelhorar a resposta imune mediante o uso de vacinas. A imunização com vacinas inativas e vírus vivomodificado contra o VDVB tem-se utilizado por décadas sim evidencia de uma redução significativa daprevalência da doença o um controle da infecção, pelo qual se utilizam estratégias experimentais comovacinas recombinantes, onde se selecionam genes específicos do BVDV com o propósito de imunizar ogado buscando superar os inconvenientes das vacinas convencionais.
Assuntos
Animais , Bovinos/virologia , Vírus da Diarreia Viral BovinaRESUMO
La fiebre aftosa es una enfermedad viral causada por uno de los miembros prototipo de la familiaPicornaviridae, y aunque dicha enfermedad ha sido descrita hace más de 5 siglos, sigue siendo una de lasprincipales barreras económicas y sanitarias tanto para importación como para exportación de ganadobovino y porcino y sus derivados. Dado que el 75% del hato bovino nacional se encuentra libre de laenfermedad con vacunación, es necesario que nos actualicemos en el estado del arte de la enfermedadpara poder así estar preparados para el anhelado momento en el que el país sea declarado libre sinvacunación y apartir del cual, un completo conocimiento de la enfermedad, sus factores de riesgo, sucorrecto reconocimiento y diagnóstico, van a ser clave para mantener este importante estatus zoosanitarioque beneficia tanto a la comunidad ganadera como al país.
Foot-and-Mouth disease (FMD) is a viral disease caused by a prototype member of the Picornaviridaefamily. Although the disease has been described for more than 5 centuries, it remains one of the majorhealth and economic barriers for cattle and swine import and export. Since 75% of the national cattle herdis FMD free, it is necessary to provide an updated literature review of the disease. Updated informationof FMD will assist in the decision making of the need and use of vaccines, especially at the time when thecountry is declared free of FMD.
A febre aftosa é uma doença viral causada por dos membros protótipo da família Picornaviridae.Embora que esta doença tem sido descrita a mais cinco séculos, tem sido a principal barreira econômicae sanitária pra a importação e exportação de gado bovino e suíno e seus derivados. Dado que o 75% dorebanho bovino nacional encontra-se livre da doença com vacinação, é necessária a atualização do estadoda arte da doença para poder assim estar preparados para o esperado momento em que o país seja declaradolivre de vacinação. Momento pelo qual, um completo conhecimento da doença, seus fatores de risco, seucorreto reconhecimento e diagnóstico, serão chaves para manter este importante status zoosanitario quebeneficia tanto aos criadores com ao país.
Assuntos
Animais , Febre Aftosa/históriaRESUMO
Se produjo un anticuerpo monoclonal a partir de proteínas de unión a calmodulina (PUCaM) aislada por cromatografía de afinidad. Utilizando el inmunoensayo Western blot se detectó una proteína de 30 kDa en extractos de glóbulos rojos parasitados con Plasmodium falciparum. Esta señal no se observó en extractos de eritrocitos no infectados. Adicionalmente, este anticuerpo presentó una reacción con dos bandas de alto peso molecular localizadas en 260 y 240 kDa, siendo mucho más intensa la señal para 240 kDa. Estas mismas bandas fueron reconocidas por un anticuerpo policlonal anti-espectrina. Lo anterior implica que el anticuerpo monoclonal 1G3 presenta una reacción cruzada con las cadenas de la espectrina y sugiere la presencia de un epítope similar a una estructura estrechamente relacionada en ambas proteínas. Se estudió la expresión de esta proteína durante el ciclo de desarrollo del parásito y se pudo definir su presencia en las fases tardías del ciclo. L cantidad de la PUCaM de 30 kDa no sólo aumenta de manera absoluta, sino también relativamente con relación a las demás proteínas del parásito. El hecho de que se presente señal en los estadios avanzados de desarrollo y no en el estadio de anillos está indicando que tiene un patrón de expresión diferencial durante el desarrollo del parásito
Assuntos
Proteínas de Ligação a Calmodulina , Plasmodium falciparum , Western Blotting , Cromatografia de AfinidadeRESUMO
El pestisvirus que produce la diarrea viral bovina (V.D.V.B), ocasiona porblemas reproductivos en el ganado vacuno y se encuentra ampliamente difundido en el país. La presencia de cepas no citopatogénicas del mismo, las cuales normalmente no se evidencian en los cultivos celulares contaminados con éste virus, han constituido un limitante para el establecimiento y mantenimiento de cultivos primarios y líneas celulares libres del V.D.V.B., para uso rutinario en actividades diagnósticas o investigativas. El suero fetal bovino (SFB) es la fuente usual de contaminación para los cultivos de tejidos animales, dadas las escasas previsiones para el control de su calidad, ya que la recolección y mercadeo del SFB se realiza con criterios artesanales y sin los debidos controles de calidad. Específicamente en el caso del V.D.V.B., se pueden presentar dos situaciones con el SFB: que contenga partículas virales o que posea niveles de anticuerpos contra el virus; en ambos casos se darán problemas en los procedimientos realizados con dichos sueros. Con el fin de controlar las contaminaciones de los cultivos celulares con el VDVB, en el Postgrado de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional, se ha empleado la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) para detectarlas tanto, en el SFB como en diferentes cultivos celulares, obteniéndose para el SFB el 25.8 por ciento de postivos de un total de 32 muestras de diferentes orígenes y para cultivos celulares el 42.8 por ciento de positivos de 28 lotes, procedentes de diferente origen animal y centros de investigación, resultados que son comparables con los obtenidos por otros laboratorios internacionales como el National Animal Diseases Laboratory (NADL) del Departamento de Agricultura de USA. Dentro de las recomendaciones para la prevención y control del problema en laboratorios de diagnóstico e investigación médica y veterinaria, que empleen tecnologías relacionadas con manejo y mantenimiento de cultivos celulares, están las de implementar técnicas para la detección del virus como la IFI, la peroxidasa o la inmunoprecipitación al igual que el manejo de un bajo número de fetos en la conformación de lotes de SFB
