Determinação do limite mínimo de detecção da técnica de Nested-PCR para os poliomavírus JC e BK / Assessment of minimum detection limit of Nested-PCR for JC and BK polyomaviruses
Clin. biomed. res
; 34(3): 260-265, 2014. ilus, tab
Article
en Pt
| LILACS
| ID: biblio-834468
Biblioteca responsable:
BR18.1
ABSTRACT
Introduction:
Polyomaviruses (BKV and JCV) cause infection mainly in immunocompromised adults. A sensitive and specific diagnosis tool is fundamental to demonstrate the BKV and JCV infections. Nowadays many laboratories are using a PCR technique for detecting polyomaviruses genome in clinical samples. In this context, the purpose of this study is to determine the threshold of detection of the nested-PCR for polyomaviruses JC and BK.Methods:
Serial dilutions of the samples of BKV and JCV of known concentration (100 copies/mL, 50 copies/mL, 25 copies/mL, 10 copies/mL, 5 copies/mL, and 1 copy/ml) were subjected to the technique of nested-PCR. All dilutions were tested 11 times to determine the minimum detection limit.Results:
The minimum detection limit of the nested-PCR for JC and BK viruses was 25 copies/mL. This dilution (25 copies/mL) showed 100% PCR positive reaction. Furthermore, we found that weak positive results were obtained at dilutions of 1,5 and 10 copies/mL in some repetitions. Dilutions of 25, 50, and 100 copies/mL always had very positive results.Conclusions:
These values are similar to those reported in other studies, contributing to the indication of this PCR for potential diagnostic purposes.RESUMO
Introdução:
Os poliomavírus (JCV e BKV) causam infecções principalmente em adultos imunocomprometidos. Um diagnóstico sensível e específico é de fundamental importância para os pacientes portadores de JCV e BKV. Atualmente alguns laboratórios têm utilizado a técnica de PCR para a detecção do material genético destes vírus em amostras clínicas. Assim, o objetivo deste estudo é determinar o limite mínimo de detecção da técnica de nested-PCR para os poliomavírus JC e BK.Métodos:
Diluições seriadas (100 cópias/mL; 50 cópias/mL; 25 cópias/mL; 10 cópias/mL; 5 cópias/mL e 1 cópia/mL) de controles positivos comerciais de JCV e BKV com concentrações conhecidas foram submetidas à técnica de nested-PCR semi-duplex. Todas as diluições foram testadas 11 vezes para determinação do limite mínimo de detecção.Resultados:
O limite mínimo de detecção da reação de nested-PCR para os vírus JC e BK foi de 25 cópias/mL para ambos, com 100% de positividade das diluições testadas na reação de PCR. Ainda, pudemos observar que resultados positivos fracos foram obtidos nas diluições de 1, 5 e 10 cópias/mL em algumas das repetições realizadas. As diluições de 25, 50 e 100 cópias/mL sempre obtiveram resultado rancamente positivo.Conclusões:
Estes valores são semelhantes aos relatados em outros estudos, contribuindo para a indicação desta reação de PCR para potenciais fins diagnósticos.Palabras clave
Texto completo:
1
Colección:
01-internacional
Base de datos:
LILACS
Asunto principal:
Reacción en Cadena de la Polimerasa
/
Virus BK
/
Virus JC
/
Infecciones por Polyomavirus
/
Límite de Detección
Tipo de estudio:
Diagnostic_studies
Límite:
Humans
Idioma:
Pt
Revista:
Clin. biomed. res
Asunto de la revista:
MEDICINA
Año:
2014
Tipo del documento:
Article
País de afiliación:
Brasil