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1.
Biotechnol Bioeng ; 117(3): 886-893, 2020 03.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-31788779

RESUMO

Optogenetic tools for controlling gene expression are ideal for tuning synthetic biological networks due to the exquisite spatiotemporal control available with light. Here we develop an optogenetic system for gene expression control integrated with an existing yeast toolkit allowing for rapid, modular assembly of light-controlled circuits in the important chassis organism Saccharomyces cerevisiae. We reconstitute activity of a split synthetic zinc-finger transcription factor (TF) using light-induced dimerization mediated by the proteins CRY2 and CIB1. We optimize function of this split TF and demonstrate the utility of the toolkit workflow by assembling cassettes expressing the TF activation domain and DNA-binding domain at different levels. Utilizing this TF and a synthetic promoter we demonstrate that light intensity and duty cycle can be used to modulate gene expression over the range currently available from natural yeast promoters. This study allows for rapid generation and prototyping of optogenetic circuits to control gene expression in S. cerevisiae.


Assuntos
Regulação Fúngica da Expressão Gênica , Optogenética/métodos , Regiões Promotoras Genéticas , Saccharomyces cerevisiae/genética , Proteínas de Arabidopsis/genética , Proteínas de Arabidopsis/metabolismo , Fatores de Transcrição Hélice-Alça-Hélice Básicos/genética , Fatores de Transcrição Hélice-Alça-Hélice Básicos/metabolismo , Clonagem Molecular , Criptocromos/genética , Criptocromos/metabolismo , Regulação Fúngica da Expressão Gênica/genética , Regulação Fúngica da Expressão Gênica/efeitos da radiação , Regiões Promotoras Genéticas/genética , Proteínas Recombinantes de Fusão/genética , Proteínas Recombinantes de Fusão/metabolismo , Saccharomyces cerevisiae/metabolismo , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae/genética , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae/metabolismo , Fatores de Transcrição/genética , Fatores de Transcrição/metabolismo , Dedos de Zinco/genética
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