HTS driven by fluorescence lifetime detection of FRET identifies activators and inhibitors of cardiac myosin.

Small molecules that bind to allosteric sites on target proteins to alter protein function are highly sought in drug discovery. High-throughput screening (HTS) assays are needed to facilitate the direct discovery of allosterically active compounds. We have developed technology for high-throughput time-resolved fluorescence lifetime detection of fluorescence resonance energy transfer (FRET), which enables the detection of allosteric modulators by monitoring changes in protein structure. We tested this approach at the industrial scale by adapting an allosteric FRET sensor of cardiac myosin to high-throughput screening (HTS), based on technology provided by Photonic Pharma and the University of Minnesota, and then used the sensor to screen 1.6 million compounds in the HTS facility at Bristol Myers Squibb. The results identified allosteric activators and inhibitors of cardiac myosin that do not compete with ATP binding, demonstrating high potential for FLT-based drug discovery.

Fator de crescimento derivado de plaquetas humanas obtido por uma metodologia rápida e de baixo custo / Human platelet-derived growth factor obtained by means of a fast and inexpensive methodology

O fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF) é uma proteína catiônica armazenado principalmente nos grânulos-alfa plaquetário. O PDGF por ser altamente mitogênico, principalmente para fibroblastos e leiomiócitos, é de grande importância no processo de regeneração tecidual. Neste trabalho, o PDGF foi obtido a partir do lisado de plaquetas humanas (5 x 10 plaquetas/mL) vencidas, purificado por cromatografia de troca iônica em resina de CM-Sepharose. A proteína eluída na fração catiônica, foi identificada por anticorpos policlonais anti-PDGF (AA e BB) e, posteriormente, sua atividade mitogênica confirmada pela incorporação da [H3]-TdR usando fibroblastos da linhagem celular NIH/3T3 em cultura. A comparação entre os efeitos mitogênicos sobre o PDGF, fração catiônica, com uma proteína recombinante controle (PDGF-AB), revelou que a proteína parcialmente purificada induziu semelhante estimulação, 157.567 cpm e 165.796 cpm, respectivamente. Os resultados obtidos evidenciam a aplicabilidade dessas condições experimentais na obtenção do PDGF, preservando sua atividade biológica, através de procedimentos de baixa complexibilidade, eficiente e de custo operacional reduzido, possibilitando seu uso em experimentos de regeneração tecidual

Use of dental implants in children: a literature review.

The aim of this literature review is to discuss the use of dental implants in growing patients and the influence of maxillary and mandibular skeletal and dental growth on the stability of those implants. It is recommended to wait for the completion of dental and skeletal growth, except for severe cases of ectodermal dysplasia.

Investigacao citologica de Chlamydia trachomatis em 1000 casos cervico vaginais revistos. / Cytological research of Chamydia trachomatis 1,000 cervico-vaginal cases reviewed

Foi feita revisao de 1000 esfregacos escolhidos ao acaso dos 11.581 exames citologicos efetuados em 1981 na Seccao de Citopatologia do Servico de Patologia do Hospital das Clinicas da F.M.R.P. - U.S.P., tendo o objetivo de individualizar novos casos de Chlamydia trachomatis e submeter a reavaliacao os ja dados como positivos, baseando-se exclusivamente em criterios morfologicos. Foram diagnosticados dois novos casos e foi confirmado um caso, anteriormente dado como suspeito. A porcentual encontrada foi de 0,3% indicando que a infeccao por Chlamydia nao e tao frequente em nosso meio, sendo mais frequente a infeccao por cocos (50%), Trichomonas vaginalis (9,1%), Candida sp (8%)