Ionizable Lipid Nanoparticle-Mediated TRAIL mRNA Delivery in the Tumor Microenvironment to Inhibit Colon Cancer Progression.

Introduction: Immunotherapy has revolutionized cancer treatment by harnessing the immune system to enhance antitumor responses while minimizing off-target effects. Among the promising cancer-specific therapies, tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) has attracted significant attention. Methods: Here, we developed an ionizable lipid nanoparticle (LNP) platform to deliver TRAIL mRNA (LNP-TRAIL) directly to the tumor microenvironment (TME) to induce tumor cell death. Our LNP-TRAIL was formulated via microfluidic mixing and the induction of tumor cell death was assessed in vitro. Next, we investigated the ability of LNP-TRAIL to inhibit colon cancer progression in vivo in combination with a TME normalization approach using Losartan (Los) or angiotensin 1-7 (Ang(1-7)) to reduce vascular compression and deposition of extracellular matrix in mice. Results: Our results demonstrated that LNP-TRAIL induced tumor cell death in vitro and effectively inhibited colon cancer progression in vivo, particularly when combined with TME normalization induced by treatment Los or Ang(1-7). In addition, potent tumor cell death as well as enhanced apoptosis and necrosis was found in the tumor tissue of a group treated with LNP-TRAIL combined with TME normalization. Discussion: Together, our data demonstrate the potential of the LNP to deliver TRAIL mRNA to the TME and to induce tumor cell death, especially when combined with TME normalization. Therefore, these findings provide important insights for the development of novel therapeutic strategies for the immunotherapy of solid tumors.

Serum Soluble Mediator Profiles and Networks During Acute Infection With Distinct DENV Serotypes.

A panoramic analysis of chemokines, pro-inflammatory/regulatory cytokines, and growth factors was performed in serum samples from patients with acute DENV infection (n=317) by a high-throughput microbeads array. Most soluble mediators analyzed were increased in DENV patients regardless of the DENV serotype. The substantial increase (≥10-fold) of CXCL10, IL-6, and IFN-γ, and decreased levels of PDGF (<0.4-fold) was universally identified in all DENV serotypes. Of note, increased levels of CXCL8, CCL4, and IL-12 (≥3-9-fold) were selectively observed in DENV2 as compared to DENV1 and DENV4. Heatmap and biomarker signatures further illustrated the massive release of soluble mediators observed in DENV patients, confirming the marked increase of several soluble mediators in DENV2. Integrative correlation matrices and networks showed that DENV infection exhibited higher connectivity among soluble mediators. Of note, DENV2 displayed a more complex network, with higher connectivity involving a higher number of soluble mediators. The timeline kinetics (Day 0-1, D2, D3, D4-6) analysis additionally demonstrated differences among DENV serotypes. While DENV1 triggers a progressive increase of soluble mediators towards D3 and with a decline at D4-6, DENV2 and DENV4 develop with a progressive increase towards D4-6 with an early plateau observed in DENV4. Overall, our results provided a comprehensive overview of the immune response elicited by DENV infection, revealing that infection with distinct DENV serotypes causes distinct profiles, rhythms, and dynamic network connectivity of soluble mediators. Altogether, these findings may provide novel insights to understand the pathogenesis of acute infection with distinct DENV serotypes.

Impact of HIV co-infection on immunological biomarker profile of HTLV-1 infected patients.

The impact of HIV co-infection on the plasma immunological biomarker profile of HTLV-1 infected patients was evaluated. The plasma levels of leukotrienes and chemokines/cytokines were quantified by ELISA and Cytometric Bead Array. A total of 138 volunteers were enrolled and divided into two subgroups ("HTLV-1(+)HIV(-)" and "HTLV-1(+)(HIV(+)"), which were categorized according to the HTLV-1-associated neurological disease (AS, pHAM and HAM). Reference controls were BD and HIV mono-infected patients. HAM(+) exhibited higher CD4+ T-cell counts as compared to HIV+ mono-infected patients and lower HTLV-1 proviral load as compared to mono-infected HAM(-) patients. AS(+) exhibited higher levels of CysLT, CXCL8/IL-8 and lower levels of CCL5/RANTES as compared to AS(-). Increased levels of IL-6 and TNF with reduced levels of CXCL10/IP10 and CCL5/RANTES were observed in co-infected pHAM(+) as compared to mono-infected pHAM(-). HAM(+) patients revealed an increase in CXCL8/IL-8, CCL2/MCP-1, CXCL-10/IP-10, TNF and a decrease in IL-2 as compared to HAM(-) subgroup.

Liver damage in schistosomiasis is reduced by adipose tissue-derived stem cell therapy after praziquantel treatment.

BACKGROUND: In view of the potential immunosuppressive and regenerative properties of mesenchymal stem cells (MSC), we investigated whether transplantation of adipose tissue-derived stem cells (ASC) could be used to control the granulomatous reaction in the liver of mice infected with Schistosoma mansoni after Praziquantel (PZQ) treatment. METHODOLOGY/PRINICPAL FINDINGS: C57BL/6 mice infected with S. mansoni were treated with PZQ and transplanted intravenously with ASC from uninfected mice. Liver morpho-physiological and immunological analyses were performed. The combined PZQ/ASC therapy significantly reduced the volume of hepatic granulomas, as well as liver damage as measured by ALT levels. We also observed that ASC accelerated the progression of the granulomatous inflammation to the advanced/curative phase. The faster healing interfered with the expression of CD28 and CTLA-4 molecules in CD4+ T lymphocytes, and the levels of IL-10 and IL-17 cytokines, mainly in the livers of PZQ/ASC-treated mice. CONCLUSIONS: Our results show that ASC therapy after PZQ treatment results in smaller granulomas with little tissue damage, suggesting the potential of ASC for the development of novel therapeutic approaches to minimize hepatic lesions as well as a granulomatous reaction following S. mansoni infection. Further studies using the chronic model of schistosomiasis are required to corroborate the therapeutic use of ASC for schistosomiasis.

Quality perception in research laboratories from Fiocruz after QMS implementation / A percepção da qualidade em laboratórios de pesquisa da Fiocruz após a implementação do SGQ / La percepción de la calidad en los laboratorios de investigación Fiocruz después de la implementación del SGC

Quality Management System has been implemented at the René Rachou Research Center since 2003. This study investigated its importance for collaborators (Cs) in laboratories. This was a quantitative and descriptive study performed in a group of 113 collaborators. It was based on the World Health Organization handbook: Quality Practices in Basic Biomedical Research. The questionnaires evaluated the parameters using the Likert scale. Biosafety, training and ethics were considered to be the most important parameters. Supervision and quality assurance, data recording, study plan, SOPs and file storage achieved intermediate evaluation. The lower frequency of responses was obtained for result report, result verification, personnel and publishing practices. Understanding the perception of the collaborators allows the development of improvement actions aiming the construction of a training program directing strategies for disseminating quality.

El Sistema de Gestión de la Calidad ha sido implementado en el Centro de Investigación René Rachou desde el año 2003. En este estudio se investigó la importancia de dicho sistema para los trabajadores de los laboratorios de investigación. Se realizó un estudio de tipo cuantitativo, descriptivo con un grupo de 113 trabajadores. Fueron utilizadas las guías sobre Prácticas de Calidad en Investigación Biomédica Básica (QPBR) de la Organización Mundial de la Salud. El cuestionario evalúa los parámetros de esta guía utilizando la Escala Likert. Bioseguridad, formación y ética fueron los factores considerados como los más importantes dentro del cuestionario. Supervisión y Control de calidad, registro de datos, plan de estudios, POP y el archivo obtuvieron una puntuación intermedia. La puntuación más baja fue obtenida por el informe, la verificación de resultados, el personal y las prácticas de publicación. Conocer las opiniones de los trabajadores permitirá el desarrollo de acciones para la mejora del Sistema de Gestión de la Calidad, contribuyendo al desarrollo de un programa de capacitación y de estrategias para la difusión de la calidad.

O Sistema de Gestão da Qualidade vem sendo implementado no Centro de Pesquisas René Rachou desde 2003. Este estudo investigou sua importância para os colaboradores dos laboratórios de pesquisa. Tratou-se de um estudo quantitativo, descritivo, realizado com um grupo de 113 colaboradores. Utilizou-se a diretriz Práticas de Qualidade na Pesquisa Biomédica Básica (QPBR), da Organização Mundial de Saúde. Os questionários aplicados avaliaram os parâmetros dessa diretriz utilizando a escala Likert. Biossegurança, treinamento e ética foram os fatores considerados mais importantes. Supervisão e garantia da Qualidade, registro de dados, plano de estudo, POP e arquivo obtiveram uma avaliação intermediária. A menor avaliação foi obtida para relatório, verificação de resultados, pessoal e práticas de publicação. Entender a percepção dos colaboradores permitirá o desenvolvimento de ações de melhoria, contribuindo para a construção de um programa de treinamento e estratégias de disseminação da qualidade.

Condições higiênico-sanitárias, ocorrência de parvovírus e de parasitos de roedores em colônias de camundongos e ratos de biotérios brasileiros

As condições sanitárias de 17 biotérios de instituições públicas de ensino e/oupesquisa, produção de produtos farmacêuticos e controle de qualidade deimunobiológicos de diferentes regiões geográficas do Brasil e a ocorrência deparvovírus e de parasitos de roedores em colônias de camundongos e ratos foramavaliadas. Dados sobre barreiras sanitárias para evitar a transmissão de doenças e deprograma de monitoramento de saúde animal foram obtidos através da aplicação de umquestionário. Métodos sorológicos (IFI e IHA) e PCR foram utilizados para diagnósticode parvovírus em 563 camundongos e 167 ratos. Métodos parasitológicos foramutilizados para o diagnóstico de ácaros, piolhos, helmintos e protozoários em 611camundongos e 183 ratos

A maioria dos biotérios avaliados não possui instalações ebarreiras sanitárias de proteção apropriadas para evitar a transmissão de infecções einfestações por patógenos. Maior positividade de infecção por parvovírus foi detectadapela técnica de PCR. Nas 563 amostras de camundongos a ocorrência de parvovíruspor métodos sorológicos foi de 18,3% (MVM - 6,2%; MPV - 12,3%) e a positividadevariou de 0,0% a 22,5% nas diferentes regiões geográficas; por PCR foi de: 49,2%(MVM - 12,3%; MPV - 43,5%) e a positividade variou de 16,7% a 100%. Ns 167amostras de rato a ocorrência de parvovírus por métodos sorológicos foi de: 40,7% (H-1- 1,8%; KRV - 3,0%; RPV-1/RMV-1 - 35,9%) e amostras positivas foram dectadassomente na região SE; por PCR foi de: 73,7% (H-1 - 0%; KRV - 6,0%; RMV-1 - 37,7%;RPV-1 - 54,5%) e a positividade vairou de 25,0% a 100,0%. MPV e RPV-1 foram osvírus mais freqüentes e detectados em todas as regiões avaliadas. Biotérios com menornúmero de barreiras sanitárias (Categoria C) apresentaram maior ocorrência deparvovírus. Análises de concordância demonstraram não haver concordância ouconcordância fraca (K=0,036 a 0,514) entre os métodos sorológicos e a PCR paradetecção de infecção por parvovírus. Na região SE, parvovírus foram detectados porPCR em biotérios dos Estados de São Paulo, Rio de Janeiro e Minas Gerais. Em noveinstituições públicas do Estado de Minas Gerais foi observada elevada ocorrência deinfecção por parvovírus (35% a 100%), sendo detectadas co-infecções por MVM e MPVem seis biotérios (75%) e por RPV e RMV em cinco biotérios (71,4%). Alta ocorrênciade parasitas foi observada nos biotérios avaliados, sendo Shypacia spp., Spironucleusmuris, Tritrichomonas muris, Trichomonas minuta e Entamoeba muris os maisfrequentes nas colônias de camundongos e ratos

Condições higiênico-sanitárias, ocorrência de parvovírus e de parasitos de roedores em colônias de camundongos e ratos de biotérios brasileiros / Sanitary conditions, occurrence of parvovirus and rodent parasites in colonies of mice and rats of Brazilian animal houses

As condições sanitárias de 17 biotérios de instituições públicas de ensino e/oupesquisa, produção de produtos farmacêuticos e controle de qualidade deimunobiológicos de diferentes regiões geográficas do Brasil e a ocorrência deparvovírus e de parasitos de roedores em colônias de camundongos e ratos foramavaliadas. Dados sobre barreiras sanitárias para evitar a transmissão de doenças e deprograma de monitoramento de saúde animal foram obtidos através da aplicação de umquestionário. Métodos sorológicos (IFI e IHA) e PCR foram utilizados para diagnósticode parvovírus em 563 camundongos e 167 ratos. Métodos parasitológicos foramutilizados para o diagnóstico de ácaros, piolhos, helmintos e protozoários em 611camundongos e 183 ratos. A maioria dos biotérios avaliados não possui instalações ebarreiras sanitárias de proteção apropriadas para evitar a transmissão de infecções einfestações por patógenos. Maior positividade de infecção por parvovírus foi detectadapela técnica de PCR. Nas 563 amostras de camundongos a ocorrência de parvovíruspor métodos sorológicos foi de 18,3% (MVM - 6,2%; MPV - 12,3%) e a positividadevariou de 0,0% a 22,5% nas diferentes regiões geográficas; por PCR foi de: 49,2%(MVM - 12,3%; MPV - 43,5%) e a positividade variou de 16,7% a 100%. Ns 167amostras de rato a ocorrência de parvovírus por métodos sorológicos foi de: 40,7% (H-1- 1,8%; KRV - 3,0%; RPV-1/RMV-1 - 35,9%) e amostras positivas foram dectadassomente na região SE; por PCR foi de: 73,7% (H-1 - 0%; KRV - 6,0%; RMV-1 - 37,7%;RPV-1 - 54,5%) e a positividade vairou de 25,0% a 100,0%. MPV e RPV-1 foram osvírus mais freqüentes e detectados em todas as regiões avaliadas. Biotérios com menornúmero de barreiras sanitárias (Categoria C) apresentaram maior ocorrência deparvovírus. Análises de concordância demonstraram não haver concordância ouconcordância fraca (K=0,036 a 0,514) entre os métodos sorológicos e a PCR paradetecção de infecção por parvovírus. Na região SE, parvovírus foram detectados porPCR em biotérios dos Estados de São Paulo, Rio de Janeiro e Minas Gerais. Em noveinstituições públicas do Estado de Minas Gerais foi observada elevada ocorrência deinfecção por parvovírus (35% a 100%), sendo detectadas co-infecções por MVM e MPVem seis biotérios (75%) e por RPV e RMV em cinco biotérios (71,4%). Alta ocorrênciade parasitas foi observada nos biotérios avaliados, sendo Shypacia spp., Spironucleusmuris, Tritrichomonas muris, Trichomonas minuta e Entamoeba muris os maisfrequentes nas colônias de camundongos e ratos.

Molecular fluorescent approach to assessing intraerythrocytic hemoprotozoan Babesia canis infection in dogs.

The development of recent flow cytometry-based protocols for the diagnosis of canine babesiosis, Babesia gibsoni in particular, has encouraged us to investigate its applicability to detect B. canis-infected erythrocytes as well as optimize the hydroethidine-flow cytometry methodology (HE-FC), using peripheral blood samples from naturally and experimentally infected dogs. Our data demonstrated that HE at 25 microg/ml provided the most outstanding fluorescence profile, able to discriminate between infected and uninfected dogs with no alterations in cell properties such as forward scatter and unspecific fluorescence. The results were expressed as the percentage of positive fluorescent erythrocytes (PPFE) for each individual sample, with 1.53% of PPFE as the cut-off determined between infected and uninfected animals. B. canis-infected erythrocytes during both acute and chronic experimental infection were identified through HE-FC, validating its use for diagnosis purposes in endemic areas for canine babesiosis. In a clinical trial, 22.8% out of 162 dogs showed to be positive to Babesia infection through this approach. Such prevalence was similar to that estimated for altered hematological profiles (HT) < or = 30% (29%), but highly distinct from the prevalence provided by direct blood smear (BS) examination (1.8%) or immunofluorescent assay (IFA) (60.5%). Furthermore, our findings indicate that positive PPFE data was associated with HT < or = 30%, emphasizing that, in clinical practice, the haematocrit should be used as a screening test followed by HE-FC, suitable to confirm hypotheses of canine babesiosis.