RESUMO
Foot and mouth disease (FMD) is responsible for serious economic losses in Egypt. Although vaccination is practised as the main control strategy, failure of vaccination has been reported in many cases, which can be due to a number of factors. Selection of FMD antigenic variants under the immune pressure of partially immunised hosts has been previously recorded. This study was designed to isolate and characterise foot and mouth disease viruses (FMDVs) circulating in Egyptian vaccinated animals. Serotype O, A and Southern African Territories (SAT) 2 FMDVs were detected in different Egyptian governorates during 2015, 2016 and 2017. The successful isolation of 15 FMDVs of the three serotypes is reported in this paper. Phylogenetic analysis based on the viral protein (VP) 1 gene showed that all serotype O isolates had East Africa (EA)-3 topotypes. There was variation in 15-17 amino acids between the serotype O isolates of 2015 and those of 2016 and 2017. The serotype A isolates belonged to the A-Iran-05 lineage, with the exception of one isolate of 2016 which clustered with the African strains of G-IV. Serotype SAT2 FMDV was detected in two samples of 2017 and both were of lineage Alx-12 of topotype VII. The virus neutralisation test using sera raised against vaccine strains confirmed the serotyping of the isolates and determined the antigenic relatedness between the isolates and the currently used vaccine strains. A decrease in the neutralising antibody titre of some serotype O and A isolates could be attributed to mutation in critical amino acids in the neutralising antigenic sites. Hence, this work supports previous studies describing the significance of amino acid substitutions within the antigenic sites of the virus in antibody neutralisation and immune escape.
La fièvre aphteuse est à l'origine d'importantes pertes économiques en Égypte. Si la vaccination constitue la principale stratégie de lutte contre cette maladie, de nombreux échecs vaccinaux ont été rapportés, dus à différents facteurs. Il a été constaté par le passé que la pression immunitaire exercée par des hôtes partiellement immunisés contre la fièvre aphteuse entraînait une sélection de variants antigéniques du virus. La présente étude avait donc pour objet d'isoler et de caractériser les virus de la fièvre aphteuse présents en Égypte chez les animaux vaccinés. Les sérotypes O, A et Southern African Territories (SAT) 2 du virus de la fièvre aphteuse ont été détectés dans plusieurs gouvernorats égyptiens en 2015, 2016 et 2017. Les auteurs font état de 15 isolements réussis de souches virales appartenant à chacun des trois sérotypes. Il ressort de l'analyse phylogénétique basée sur le gène de la protéine virale 1 (PV1) que tous les isolats de sérotype O correspondaient au topotype East Africa (EA) 3. Une variation de 15 à 17 acides aminés a été observée entre les virus de sérotype O isolés en 2015 et ceux du même sérotype isolés en 2016 et en 2017. Les isolats de sérotype A appartenaient tous à la lignée A-Iran-05, à l'exception d'un isolat de 2016 qui était proche des souches africaines du lignage G-IV. Le sérotype SAT-2 du virus de la fièvre aphteuse a été détecté dans deux échantillons prélevés en 2017. Les deux souches isolées appartenaient à la lignée Alx-12 du topotype VII. La neutralisation virale utilisant des antisérums produits contre les souches vaccinales a permis de confirmer le sérotypage des souches isolées et de déterminer le degré de similitude entre les isolats et les souches vaccinales utilisées actuellement. La diminution du titre d'anticorps neutralisants dirigés contre certains isolats des sérotypes O et A est probablement imputable à une mutation d'acides aminés déterminants au sein des sites de neutralisation des antigènes. Ce travail corrobore les résultats d'études antérieures qui avaient révélé que les substitutions d'acides aminés au sein des sites antigéniques du virus peuvent avoir un rôle dans la neutralisation d'anticorps et dans l'échappement du virus au système immunitaire.
La fiebre aftosa es causante de graves pérdidas económicas en Egipto. Aunque la vacunación viene siendo la principal estrategia de lucha, se han descrito numerosos casos en los que ha resultado ineficaz, hecho que puede deberse a varios factores. Anteriormente ya se había observado que la presión inmunitaria de hospedadores parcialmente inmunizados conduce a la selección de determinadas variantes antigénicas de la fiebre aftosa. Los autores exponen un estudio encaminado a aislar y caracterizar los virus de la fiebre aftosa circulantes en los animales egipcios vacunados. En los años 2015, 2016 y 2017 se detectaron en diferentes provincias del país los serotipos víricos O, A y SAT (Southern African Territories) 2. Los autores dan cuenta del aislamiento de 15 virus de la fiebre aftosa pertenecientes a uno u otro de estos tres serotipos. El análisis filogenético basado en el gen de la proteína vírica (VP) 1 demostró que todos los virus del serotipo O aislados correspondían al topotipo EA (East Africa)-3, con diferencias localizadas en los aminoácidos 15 a 17 entre los virus aislados en 2015 y los de 2016 y 2017. Los virus del serotipo A pertenecían al linaje A-Iran-05, con la excepción de uno de los de 2016, que formaba un conglomerado con las cepas africanas del linaje G-IV. El serotipo SAT2, por su parte, estaba presente en dos muestras de 2017, pertenecientes ambas al linaje Alx-12 del topotipo VII. Empleando la prueba de neutralización vírica con sueros sensibilizados contra cepas vacunales se confirmó el serotipo de los virus aislados y se determinó el grado de parentesco antigénico entre esos virus y las cepas vacunales utilizadas actualmente. El decremento observado en el título de anticuerpos neutralizantes frente a algunos de esos virus de los serotipos O y A podría explicarse por la mutación de aminoácidos fundamentales de los sitios antigénicos neutralizantes. Este trabajo, por lo tanto, viene a corroborar anteriores estudios que señalaban la gran influencia de la sustitución de aminoácidos en los sitios antigénicos del virus en los procesos de neutralización de anticuerpos y escape inmunitario.
Assuntos
Vírus da Febre Aftosa/genética , Febre Aftosa/virologia , Mutação , Animais , Egito , Vírus da Febre Aftosa/isolamento & purificação , Filogenia , SorogrupoRESUMO
In this study, a recombinant DNA plasmid was constructed, encoding for HA1 of a selected Egyptian H5N1 virus (isolated during the 2012 outbreaks). In the immunization and challenge experiments, SPF chickens received 1 or 2 doses of H5-DNA plasmid prime, and boosted with the inactivated H5N2 vaccine. Haemagglutination inhibition (HI) titers, protection levels, and the magnitude of virus shedding were compared to that of the chickens that received either DNA plasmid or inactivated H5N2 vaccine alone. H5N1 virus A/chicken/Egypt/128s/2012 (H5N1) highly pathogenic avian influenza (HPAI) clade 2.2.1/C was used for the challenge. Chickens immunized with 1 or 2 doses of H5-DNA vaccine failed to overcome the challenge with 0% and 10% protection, respectively. Quantitative real-time reverse transcription-PCR revealed virus shedding of 2.2 x 104 PCR copies/ml 3 days post challenge (dpc) in the only surviving bird from the group that received 2 doses of plasmid. However, chickens immunized with 1 or 2 doses of H5-DNA plasmid as prime and inactivated H5N2 vaccine as booster, showed 80% protection after challenge, with a viral shedding of 1.2 x 104 PCR copies/ml (1 dose) and 1.6 x 104 PCR copies/ml (2 doses) 3 dpc. The surviving birds in both groups did not shed the virus at 5 and 7 dpc. In H5N2-vaccinated chickens, protection levels were 70% with relatively high virus shedding (1.8 x 104 PCR copies/ml) 3 dpc. HI titers were protective to the surviving chickens. This study reports the efficacy of H5-DNA plasmid to augment reduction in viral shedding and to provide better protection when applied in a prime-boost program with the inactivated AI vaccine.