An engineered promoter driving expression of a microbial avirulence gene confers recognition of TAL effectors and reduces growth of diverse Xanthomonas strains in citrus.

Xanthomonas citri ssp. citri (X. citri), causal agent of citrus canker, uses transcription activator-like effectors (TALEs) as major pathogenicity factors. TALEs, which are delivered into plant cells through the type III secretion system (T3SS), interact with effector binding elements (EBEs) in host genomes to activate the expression of downstream susceptibility genes to promote disease. Predictably, TALEs bind EBEs in host promoters via known combinations of TALE amino acids to DNA bases, known as the TALE code. We introduced 14 EBEs, matching distinct X. citri TALEs, into the promoter of the pepper Bs3 gene (ProBs31EBE ), and fused this engineered promoter with multiple EBEs (ProBs314EBE ) to either the ß-glucuronidase (GUS) reporter gene or the coding sequence (cds) of the pepper gene, Bs3. TALE-induced expression of the Bs3 cds in citrus leaves resulted in no visible hypersensitive response (HR). Therefore, we utilized a different approach in which ProBs31EBE and ProBs314EBE were fused to the Xanthomonas gene, avrGf1, which encodes a bacterial effector that elicits an HR in grapefruit and sweet orange. We demonstrated, in transient assays, that activation of ProBs314EBE by X. citri TALEs is T3SS dependent, and that the expression of AvrGf1 triggers HR and correlates with reduced bacterial growth. We further demonstrated that all tested virulent X. citri strains from diverse geographical locations activate ProBs314EBE . TALEs are essential for the virulence of X. citri strains and, because the engineered promoter traps are activated by multiple TALEs, this concept has the potential to confer broad-spectrum, durable resistance to citrus canker in stably transformed plants.

Altered urinary sodium excretion response after central cholinergic and adrenergic stimulation of adult spontaneously hypertensive rats.

In this study, we hypothesized that blunting of the natriuresis response to intracerebroventricularly (i.c.v.) microinjected cholinergic and adrenergic agonists is involved in the development of hypertension in spontaneously hypertensive rats (SHR). We evaluated the effect of i.c.v. injection of cholinergic and noradrenergic agonists, at increasing concentrations, and of muscarinic cholinergic and α1 and α2-adrenoceptor antagonists on blood pressure and urinary sodium handling in SHR, compared with age-matched Wistar Kyoto rats (WR). We confirmed that CCh and NE microinjected into the lateral ventricle (LV) of conscious rats leads to enhanced natriuresis. This response was associated with increased proximal and post-proximal sodium excretion accompanied by an unchanged rate of glomerular filtration. We showed that cholinergic-induced natriuresis in WR and SHR was attenuated by previous i.c.v. administration of atropine and was significantly lower in the hypertensive strain than in WR. In both groups the natriuretic effect of injection of noradrenaline into the LV was abolished by previous local injection of an α1-adrenoceptor antagonist (prazosin). Conversely, LV α2-adrenoceptor antagonist (yohimbine) administration potentiated the action of noradrenaline. The LV yohimbine pretreatment normalized urinary sodium excretion in SHR compared with age-matched WR. In conclusion, these are, as far as we are aware, the first results showing the importance of interaction of central cholinergic and/or noradrenergic receptors in the pathogenesis of spontaneous hypertension. These experiments also provide good evidence of the existence of a central adrenergic mechanism consisting of α1 and α2-adrenoceptors which works antagonistically on regulation of renal sodium excretion.

Agrobacterium-mediated transient expression in citrus leaves: a rapid tool for gene expression and functional gene assay.

In this study, we present a method for transient expression of the type III effector AvrGf1 from Xanthomonas citri subsp. citri strain A(w) in grapefruit leaves (Citrus paradisi) via Agrobacterium tumefaciens. The coding sequence of avrGf1 was placed under the control of the constitutive CaMV 35S promoter in the binary vectors pGWB2 and pGWB5. Infiltration of grapefruit leaves with A. tumefaciens carrying these constructs triggered a hypersensitive response (HR) in grapefruit 4 days after inoculation. When transiently expressed in grapefruit leaves, two mutants, AvrGf1ΔN116 and AvrGf1ΔC83, failed to induce an HR. Moreover, using bioinformatics tools, a chloroplast transit signal was predicted at the N terminus of AvrGf1. We demonstrated chloroplast localization by using an AvrGf1::GFP fusion protein, where confocal images revealed that GFP fluorescence was accumulating in the stomatal cells that are abundant in chloroplasts. Transient expression in citrus has the potential for aiding in the development of new disease defense strategies in citrus.

The H63D genetic variant of the HFE gene is independently associated with the virological response to interferon and ribavirin therapy in chronic hepatitis C.

BACKGROUND: Conflicting results have been reported in studies evaluating the relationship between serum markers of iron overload, liver iron deposits, and HFE mutations (C282Y and H63D) in chronic hepatitis C patients, and also their impact on the response to therapy in these patients. AIM: To evaluate the role of HFE mutations in the severity of liver disease and in the response to therapy in chronic hepatitis C. METHODS: Two hundred and sixty-four hepatitis C patients treated with standard interferon and ribavirin were divided into two groups according to type of antiviral response: sustained virological response (SVR) and nonresponse or relapse. We evaluated the relationship between HFE mutation and the type of antiviral response, clinical data, biochemical tests, liver histopathology, virological data, and HFE mutations. RESULTS: Of the 264 patients, 88 (32.1%) had SVR whereas 67.9% had nonresponse or relapse. Liver iron deposits were observed in 49.2% of the patients. The factors associated with SVR were hepatitis C virus genotype 2 or 3, transferrin saturation value of 45% or less, and detection of the H63D mutation. HFE mutation was more frequent in patients with iron deposits, but without association with serum iron biochemistry or severity of liver disease. Steatosis was more frequent in patients with liver iron deposits. CONCLUSION THE: H63D mutation was an independent factor associated with SVR in chronic hepatitis C patients, as also were hepatitis C virus genotype 2 or 3 and transferrin saturation value of 45% or less. Moreover, the H63D mutation was associated with liver iron deposits.

Tumor necrosis factor region polymorphisms are associated with AIDS and with cytomegalovirus retinitis.

BACKGROUND: The tumor necrosis factor (TNF) gene is located within the highly polymorphic major histocompatibility complex region, exhibiting the -308 GA promoter region polymorphism and six microsatellites (TNFa-f) spanning the region nearby the TNF locus. OBJECTIVE: In the present study, we evaluated the frequency of -308 GA and TNFa-e polymorphisms and respective haplotypes (in chromosomal sequence: TNFd-TNFe-308GA-TNFc-TNFa-TNFb), in 222 patients with AIDS, 52 of whom exhibited cytomegalovirus retinitis, and in 202 healthy HIV-negative individuals. METHOD: TNF microsatellite and single nucleotide polymorphism typings were performed by PCR followed by polyacrylamide gel electrophoresis. RESULTS: The TNF-308A allele and the 4-3-G-2-7-1 haplotype were associated with susceptibility to AIDS, whereas the TNFb4 allele and the 3-3-G-1-11-4 haplotype were associated with protection against AIDS development. The TNFc2 allele and the 4-1-G-2-2-1 haplotype, which contains the TNFc2 allele, were associated with cytomegalovirus retinitis. CONCLUSION: This study highlights that polymorphic sites spanning the region nearby the TNF locus are associated with AIDS per se and with cytomegalovirus retinitis in AIDS patients.

AT1 receptors and the actin cytoskeleton during angiotensin II treatment.

BACKGROUND: The response of proximal convoluted tubules (PCTs) to angiotensin II is mediated by specific type 1 receptors found on both apical and basolateral surface membrane cells. After ligand association with type 1 receptors, different signaling pathways are triggered and determine changes in fluid absorption (Jv). The presence of AT1 and actin cytoskeleton, which are directly related to Jv, can undergo changes in distribution based on the actions of AngII and losartan. METHODS: Using a microperfusion technique and immunohistochemistry analysis, we investigated the basolateral action in PCTs, of AngII and/or losartan on Jv in rabbits, with regard to AT1 and actin cytoskeleton. RESULTS: AngII increased Jv, while in contrast, losartan and combined AngII + losartan led to its decrease. AngII did not change fluorescence intensity of AT1 receptors on tubular membranes, while losartan and AngII + losartan demonstrated a slight increase after treatment. On the other hand, AngII increased the fluorescence intensity of actin cytoskeleton, while losartan induced a decrease. AngII + losartan led actin cytoskeleton having a higher fluorescence intensity than in the control group. CONCLUSIONS: In the present study, we demonstrated that treatment of the basolateral side of PCT cells with AngII and losartan could lead to changes in absorptive tubular function. Important alterations were detected in AT1 receptor fluorescence on the luminal and basolateral membranes, and changes in F-actin cytoskeleton were verified by fluorescence following these protocols.

Detecção precoce de ototoxicidade usando emissões otoacústicas produtivas de distorção / Ototoxicity early detection using distortion product otoacoustic emissions

Introdução: Os aminoglicosídeos são potencialmente ototóxicos, sendo que a monitorização tradicional detecta ototoxicidade quando a lesão já aconteceu. Objetivo: Estudamos prospectivamente a audição de pacientes que recebiam amicacina, usando audiometria tonal liminar (ATL) e emissões otoacústicas, produtos de distorção (EOA-PD), visando a suspeita precoce de ototoxicidade e sua prevenção. Forma de estudo: Prospectivo randomizado. Material e método: Avaliamos, com ATL, 29 pacientes em tratamento com amicacina, para detectar alterações audiométricas. Desses 29 pacientes, três tiveram alteração na ATL em 6 e/ou 8 kHz (10,34 por cento) - um com alteração bilateral; os outros dois, unilateral (quatro ouvidos), todos assintomáticos. Realizamos EOA-PD, para estudar a função coclear. Dos 29 pacientes (58 ouvidos), nove (18 ouvidos) foram afastados do estudo por não completarem as testagens das EOA-PD, ficando 20 pacientes (40 ouvidos) para análise. Resultados: Não encontramos alterações significativas nas respostas das EOA-PD durante o vale e o pico sérico da amicacina, como esperado. Quando comparados os ouvidos com e sem alterações audiométricas, as variações das respostas não foram significativas em 1, 2 e 4 kHz; no entanto, em 6 e 8 kHz mostraram diferenças significativas (p<0,05). As respostas das EOA-PD nos ouvidos com ATL normal apresentaram incrementos mais do que quedas; e o contrário aconteceu nos ouvidos que apresentaram ATL alterada, ou seja: houve mais quedas do que incrementos. Conclusões: a ototoxicidade pode ser monitorada eficazmente com EOA-PD durante a administração da droga, independentemente do horário da sua administração; os incrementos nas respostas poderiam ser um sinal precoce de ototoxicidade por aminoglicosídeos.

Marcadores sorológicos de hepatite B em indivíduos submetidos a exames de sangue em unidades de saúde / Serological markers of hepatitis B in people submitted to blood testing in health care clinics

Objetivo: Estudar aspectos da epidemiologia da hepatite B em pessoas submetidas à coleta de sangue em unidades de saúde. Métodos: Indivíduos dos quais se coletou sangue em unidades de saúde de Ribeiräo Preto, independentemente do motivo, foram solicitados a fornecer uma quantidade adicional de material, obtida no momento da coleta e submetida à detecçäo de marcadores de hepatite B. Simultaneamente, por meio de questionário padronizado, foram obtidas informaçöes de possíveis fatores de risco para a doença. Os dados foram analisados por meio de um modelo de regressäo logística. Resultados: As prevalências de HBsAg e de anti-HBcAg foram de 0,3 por cento e 13,9 por cento, respectivamente. Os fatores de risco associados à infecçäo foram: idade, residência na cidade há menos de 1 ano, antecedente de hepatite, exposiçäo prévia a casas de correçäo e homo/bissexualismo masculino. Conclusöes: Devido a dificuldades crescentes de obtençäo de sangue de indivíduos sadios, essa pode ser uma alternativa para estudos que objetivem fornecer informaçöes sobre a circulaçäo de agentes infecciosos na populaçäo. Embora näo se possa generalizar os dados obtidos pela metodologia usada, ela traz conhecimento referente à circulaçäo do vírus de hepatite B

Influência da migraçäo na prevalência de marcadores sorológicos de hepatite B em comunidade rural. 1 - Análise de prevalência segundo local de nascimento / Influence of migration on prevalence of serological hepatitis B markers in a rural community. 1 - Analysis of prevalence by birthplace

Como parte de uma investigaçäo epidemiológica de campo, sobre hepatite B num município de características rurais do Estado de Säo Paulo, Brasil, foi estudada a distribuiçäo de marcadores sorológicos dessa doença segundo a área de residência e o local de nascimento dos indivíduos. Para o município estudado como um todo, a prevalência encontrada para um ou mais dos marcadores sorológicos de hepatite B foi de 7,7 por cento, com os habitantes rurais apresentando risco mais elevado que os urbanos (9,8 por cento e 4,9 por cento, respectivamente). A análise da positividade, de acordo com o local de nascimento, mostrou valores mais altos entre os migrantes provenientes de outros Estados do país (15,8 por cento), seguidos dos oriundos de outros municípios de Säo Paulo (9,2 por cento): entre os nascidos no município estudado e, particularmente em Ribeiräo Preto, centro urbano de localizaçäo próxima ao mesmo, observaram-se as menores prevalências (5,2 por cento e 2,5 por cento, respectivamente). Discute-se a importância de se analisar em estudos epidemiológicos, a procedência dos indivíduos, variável capaz de influir na história natural da hepatite B numa comunidade, e, eventualmente, explicar diferenças nas distribuiçöes de marcadores dessa infecçäo em populaçöes aparentemente semelhantes.

Influência da migraçäo na prevalência de marcadores sorológicos de hepatite B em comunidade rural. 2 - Análise comparativa de algumas características das populaçöes estudadas / Influence of migration on prevalence of serological hepatitis B markers in a rural community. 2 - Comparative analysis of some characteristics of the population studied

A associaçäo entre prevalência de marcadores sorológicos de hepatite B e local de nascimento, verificado em estudo realizado num município de características rurais do Estado de Säo Paulo, Cássia dos Coqueiros, sugere existirem diferenças entre migrantes e näo-migrantes no que diz respeito a fatores de risco para hepatite B. Esses dois grupos foram analisados segundo as variáveis escolaridade, ocupaçäo profissional, número de hospitalizaçöes, antecedente de transfusöes sangüíneas e tipo de tratamento dentário prévio. A comparaçäo entre os grupos mostra que migrantes, particularmente de outros Estados do país, apresentam baixos níveis de escolaridade, elevadas proporçöes de lavradores empregados, maior número de internaçöes prévias e maiores exposiçöes a transfusöes sangüíneas e a procedimentos odontológicos mais agressivos. Observaram-se ainda associaçöes entre a prevalência de marcadores de hepatite B e as variáveis escolaridade, ocupaçäo profissional, número de hospitalizaçöes e tipo de tratamento odontológico, muito embora as duas últimas näo justifiquem as maiores prevalências entre os migrantes. A distribuiçäo de marcadores de hepatite B parece ser resultado da pior condiçäo socioeconômica dos migrantes, refletida pelo seu nível inferior de escolaridade e pela predominância de ocupaçöes secundárias

Prevalência de marcadores sorológicos de hepatite B numa pequena comunidade rural do Estado de Säo Paulo, Brasil / Prevalence of serological markers of hepatitits B in a small rural community of S. Paulo State, Brasil

Foi realizado estudo epidemiológico com vistas a determinar a prevalência de marcadores sorológicos de hepatite B na populaçäo de um pequeno município, de características rurais, do Estado de Säo Paulo. Observou-se prevalência total de marcadores igual a 7,74 por cento, com valores de HBsAg, anti-HBs e anti-HBc, respectivamente iguais a 0,10 por cento, 1,69 por cento e 7,64 por cento. Ressalta-se a importância da determinaçäo do anti-HBc em estudos epidemiológicos, bem como discute-se a relevância de se comparar a reduzida circulaçäo viral, observada na área, com as elevadas prevalências verificadas em outras regiöes, buscando assim levantar hipóteses acerca de mecanismos alternativos de transmissäo

Emprego do cefaclor na infecçäo urinária näo complicada / Use of cefaclor in the treatment of uncomplicated urinary tract infections

Vinte e cinco pacientes adultos de ambos os sexos, com diagnóstico clínico e laboratorial de infecçäo urinária aguda näo complicada, foram selecionados e tratados com cefaclor (Ceclor, Lilly) 250mg duas vezes por dia, durante 5 a 7 dias. Foram efetuados pelo menos duas culturas de urina para cada paciente e os agentes patogênicos isolados com maior freqüência foram E. coli (76%), Enterobacter aerogenes (12%), Klebsiella sp. (8%), Proteus mirabilis (4%) e Pseudomonas aeruginosa (4%). A tolerabilidade ao cefaclor foi excelente, näo foram observados efeitos colaterais de relevância que levassem à interrupçäo do tratamento, com exceçäo de uma paciente que apresentou prurido difuso. Obteve-se evoluçäo satisfatória para cura em 88% dos pacientes com desaparecimento do quadro clínico. Estes resultados obtidos suportam a conclusäo de que o cefaclor apresenta elevada tolerância e eficácia quando administrado na posologia acima mencionada