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1.
J Enzyme Inhib ; 9(1): 73-86, 1995.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-8568568
2.
J Biol Chem ; 268(22): 16216-22, 1993 Aug 05.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-8344906

RESUMO

A thrombin-specific inhibitor with an apparent molecular mass of 11 kDa has been purified from the insect Rhodnius prolixus. Amino-terminal protein sequence analysis allowed the molecular cloning of the corresponding cDNA. The open reading frame codes for a protein of about 103 amino acid residues and displays an internal sequence homology of residues 6-48 with residues 57-101 indicating a two-domain structure. Based on the amino acid sequence the two domains exhibit high homology to protease inhibitors belonging to the Kazal-type family. Model building suggests that the first domain binds to the active site with residue His10 pointing into the specificity pocket. From gel filtration and tight-binding inhibition experiments the inhibitor appears to form 1:1 complexes with thrombin. Periplasma-directed heterologous expression of the rhodniin cDNA in Escherichia coli yields the intact thrombin inhibitor. Natural and recombinant rhodniin both display inhibition constants of about 2 x 10(-13) M.


Assuntos
Hormônios de Inseto/genética , Proteínas de Insetos , Rhodnius/química , Trombina/antagonistas & inibidores , Sequência de Aminoácidos , Animais , Sequência de Bases , Clonagem Molecular , DNA , Hormônios de Inseto/metabolismo , Dados de Sequência Molecular , Reação em Cadeia da Polimerase , Inibidores de Proteases/isolamento & purificação , Inibidores de Proteases/metabolismo , Homologia de Sequência de Aminoácidos , Inibidor da Tripsina Pancreática de Kazal/química , Inibidor da Tripsina Pancreática de Kazal/genética , Inibidor da Tripsina Pancreática de Kazal/isolamento & purificação , Inibidor da Tripsina Pancreática de Kazal/metabolismo
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