Excess Maternal Thyroxine Alters the Proliferative Activity and Angiogenic Profile of Growth Cartilage of Rats at Birth and Weaning.

Objective The aim of this study was to unravel the mechanisms by which thyroxine affects skeletal growth by evaluating proliferative activity and angiogenic profile of growth cartilage of neonatal and weanling rats. Methods Sixteen adult Wistar rats were equally divided into 2 groups: control and treated with thyroxine during pregnancy and lactation. The weight, measurement of plasma free T4 and thyroids, femurs' histomorphometric analysis, and proliferative activity and angiogenic profile by immunohistochemical or real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction in growth cartilage was performed. Data were analyzed using Student's t test. Results The free T4 was significantly higher in the treated rats. However, the height of the follicular epithelium of the thyroid in newborns was significantly lower in the treated group. The excess maternal thyroxine significantly reduced the body weight and length of the femur in the offspring but significantly increased the thickness of trabecular bone and changed the height of the zones of the growth plate. Furthermore, excess maternal thyroxine reduced cell proliferation and vascular endothelial growth factor (VEGF) expression in the growth cartilage of newborn and 20-day-old rats ( P < 0.05). There was also a reduction in the immunohistochemical expression of Tie2 in the cartilaginous epiphysis of the newborns and FLK-1 in the articular cartilage of 20-day-old rats. No significant difference was observed in Ang2 expression. Conclusions The excess maternal thyroxine during pregnancy and lactation reduced endochondral bone growth in the progeny and reduced the proliferation rate and VEGF, Flk-1, and Tie2 expression in the cartilage of growing rats without altering the mRNA expression of Ang1 and Ang2.

ω-conotoxin MVIIA intralesional injection in spinal cord injury in rats / Aplicação intralesional da ω-conotoxina MVIIA no trauma medular em ratos

This study aimed to investigate the neuroprotective effect of ω-conotoxin MVIIA (MVIIA) intralesional application in rats submitted to spinal cord injury. Male Wistar rats, weighing 300g±23.4, were distributed in five groups: negative control (SHAM), placebo (PLA), 5μM MVIIA, 10μM MVIIA and 20μM MVIIA MVIIA. After laminectomy of the 12th thoracic vertebra (SHAM), the PLA, 5μM MVIIA, 10μM MVIIA and 20μM MVIIA groups were subjected to acute compressive spinal cord trauma for five minutes, and then five minutes later, the animals received specific treatment in a standard total volume of 2µL, by intralesional route, using sterile PBS as placebo. Locomotor activity was assayed using Basso Beattie Bresnahan (BBB) scale to show the patterning of SCI. With 48 hours of injury, the animals were euthanized, the liquor sample was collected in atlantooccipital space, and also the spinal segment, including the epicenter and caudal region to injury. Assays were performed for mitochondrial viability, serum glutamate, production of reactive oxygen species (ROS) and lipid peroxidation (LP) were performed. The study design was randomized and the data submitted to ANOVA and comparison of means by SNK test, and data from BBB scale were evaluated using Kruskal-Wallis test (P<0.05). There was no significant difference between groups in BBB scores. The MVIIA did not promote decrease in the levels of glutamate, ROS, LP, and did not preserve the mitochondria in the intralesional application five minutes after spinal cord injury in rats.

Objetivou-se investigar o efeito neuroprotetor da aplicação intralesional da MVIIA em ratos submetidos ao trauma medular. Foram utilizados ratos Wistar, machos, com peso entre 300g±23.4, distribuídos em cinco grupos: controle negativo (SHAM), placebo (PLA), 5µM MVIIA, 10µM MVIIA e 20µM MVIIA. Após a laminectomia da vértebra torácica 12 (SHAM), os grupos PLA, 5µM MVIIA, 10µM MVIIA e 20µM MVIIA foram submetidos ao trauma medular agudo compressivo por cinco minutos e, cinco minutos após o trauma, receberam o tratamento específico em volume total padrão de 2µL, pela via intralesional, sendo utilizado como placebo o PBS estéril. A atividade locomotora foi avaliada pela escala proposta por Basso Beattie Bresnahan (BBB), com intuito de mostrar a padronização do trauma medular. Com 48 horas do trauma, os animais foram submetidos à eutanásia, coletou-se amostra do líquor no espaço atlantooccipital e um segmento medular, incluindo o epicentro e região caudal à lesão. Foram realizados ensaios de viabilidade mitocondrial, dosagem de glutamato, produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e peroxidação lipídica (PL). O delineamento do estudo foi inteiramente casualizado e os dados submetidos ao ANOVA, com comparação de médias pelo teste de SNK e os dados do teste BBB foram comparados utilizando o teste Kruskal-Wallis (P<0.05). Em relação aos escores do BBB, não houve diferença entre os grupos. A MVIIA não promoveu a diminuição dos níveis do glutamato, ERO, PL e não preservou a mitocôndria na aplicação intralesional, cinco minutos após o trauma medular em ratos.

Técnica histoquímica aplicada ao tecido ósseo desmineralizado e parafinado para o estudo do osteócito e suas conexões / Histochemical tecnique for osteocyte and its connections study in descalcified and paraffined bone tissue

O osteócito vem sendo alvo de pesquisas recentes. A avaliação in situ de sua morfologia, da atividade e das características de suas conexões é difícil, portanto é realizada apenas com técnicas avançadas. Devido à importância desse tipo celular na manutenção da matriz óssea, este estudo propõe uma técnica de coloração pela prata como alternativa para o estudo do osteócito e suas conexões em tecido ósseo desmineralizado e parafinado. Cortes de 4æm do fêmur de ratas foram desmineralizados, desparafinados em xilol e hidratados em concentrações decrescentes de álcool etílico (ETOH) e água miliQ. Para a impregnação foram utilizadas soluções de nitrato de prata a 50 por cento e de ácido fórmico a 1 por cento com 2 por cento de gelatina microbiológica em estufa a 40ºC. Essa técnica permite visualizar facilmente as bordas lacunares dos osteócitos e suas conexões, proporcionando uma alternativa simples e eficaz para o estudo da morfologia desse tipo celular até então ainda não proposta com essa finalidade.