Presencia de Interleuquina 8 en fluido crevicular de pacientes con periodontitis agresiva / Presence of Interleukin 8 in crevicular fluid of patients with aggressive periodontitis

La periodontitis agresiva se asocia a la presencia de periodontopatógenos y a una respuesta alterada de los polimorfonucleares neutrófilos (PMN). La interleuquina 8 (IL-8) recluta y activa estas células en los sitios de infección. En la presente investigación se analizó la presencia de IL-8 en fluido crevicular de 17 pacientes con periodontitis agresiva y 11 individuos normales. En todos los pacientes y controles se realizó evaluación médica indicadora de salud sistémica, nivel de inserción (NI), índice de placa (IP), índice de sangría (SS) y volumen de fluido crevicular (VFC) con Periotron 8000. En el fluido crevicular se midió concentración y cantidad total de IL-8 con ELISA. El análisis estadístico no mostró diferencias significativas entre los pacientes y controles en relación con relación a edad 36,94 (D. E. 8,62) y 30,18 (D. E. 8,61) y a la higiene oral IP = 49,35 por ciento (D. E. 24,65) y 34,27 por ciento(D. E. 19,45) respectivamente. Los pacientes se diferenciaron de los controles en su pérdida de inserción NI (p = 0.000039), en el SS (p = 0,007) y en el VFC (p = 0,00001). Aunque la concentración de IL-8 en pacientes y controles no mostró diferencias 315,4 y 426,4 pg/mL respectivamente (p > 0,05), el contenido total de IL-8 sí (mediana 1844,06 y 229,87 pg respectivamente, (p = 0,0013). En definitiva se demuestra asociación entre periodontitis agresiva, NI, VFC y el contenido total de IL-8. Este estudio muestra la importancia de la IL-8, fundamental en la respuesta de los PMN en la periodontitis.

[Expression and activity of polymorphisms in the 67-kDa protein of the NADPH oxidase system]. / Expresión y actividad de posibles polimorfismos provenientes de individuos normales en la proteína de 67 kd del sistema NADPH oxidasa utilizando el sistema COSphox.

The NADPH oxidase system plays a central role in the antimicrobial activity of phagocytes. This system is initiated by the translocation of cytosolic proteins p67phox, p47phox and p40phox to be in close contact with membrane flavocytochrome b558. This event begins the electron transfer from cytosolic NADPH to molecular oxygen to produce superoxide anions. Herein, a functional analysis is presented of p67phox polymorphisms identified from healthy humans. Mutations were generated in the p67phox cDNA by site-directed mutagenesis and then transiently expressed in COS7 cells that also expressed gp91phox, p22phox, and p47phox from stable transgenes. The changes Va1166lle, Pro329Ser and His389Gln correspond to possible polymorphisms identified in healthy individuals revealed a functional activity similar to COSphox cells transiently transfected with WT p67phox; therefore, these modifications are not associated with genetic deficiencies in NADPH oxidase. In conclusion, the COSphox system represents an easily transfectable model for analysis of NADPH oxidase function in intact cells. The analysis of mutant derivatives of p67phox provides insight into molecular mechanisms by which this subunit regulates the NADPH oxidase.

Expresión y actividad de posibles polimorfismos provenientes de individuos normales en la proteína de 67 kd del sistema NADPH oxidasa utilizando el sistema COS phox / Expression and activity of polymorphisms in the 67-kDa protein of the NADPH oxidase system

El sistema NADPH oxidasa de las células fagocíticas cumple una función importante durante la respuesta antimicrobiana del organismo. La activación de este sistema está precedida por la translocación de las proteínas citosólicas p67 phox , p47 phox y p40 phox hacia la membrana para ponerse en contacto con el flavocitocromo b 558 , lo que induce la generación del anión superóxido, un precursor de agentes microbicidas oxidantes. El presente trabajo presenta un análisis funcional del sistema NADPH oxidasa basado en los hallazgos de polimorfismos encontrados en el gen de p67 phox de individuos sanos. Para esto se generaron mutaciones en el cADN que codifica la p67 phox y se expresaron en el sistema de células COS phox . Los datos obtenidos en el presente trabajo indican que los cambios Val 166 .Ile, Pro 329 .Ser y His 389 .Gln no generan alteraciones en el funcionamiento de la p67 phox cuando su función se analizó en el sistema transgénico basado en células COS-7. Por lo tanto, estos polimorfismos no generan ningún riesgo genético de producir deficiencias en la activación del sistema NADPH oxidasa. Además, se demuestra que el modelo de células COS phox representa un nuevo sistema celular, fácilmente transfectable que permite estudiar la función del sistema NADPH oxidasa de las células fagocíticas y sus particularidades genéticas. Finalmente, los hallazgos con estos polimorfismos nos permiten avanzar en el conocimiento sobre los mecanismos moleculares involucrados en la activación del sistema NADPH oxidasa células fagocíticas

A sensitive and restricted enzyme-linked immunosorbent assay for detecting a heterogeneous antibody population in serum from people suffering from a new variant of endemic pemphigus.

We recently described a new variant of endemic pemphigus foliaceus (EPF) in El Bagre, Colombia, that resembles Senear-Usher syndrome and identified autoantibodies to desmoglein 1 (Dsg1), as well as to multiple known and unknown antigens including plectins, in the serum of these patients. Here, we developed a cost-effective ELISA assay capable of detecting the heterogeneous antibody population observed in these EPF patients, and useful for serum epidemiological studies. A protein extract obtained from trypsin-digested fresh bovine skin and further purified on a concanavalin A matrix was used as antigen. This extract contains an important conformational epitope (a 45 kDa tryptic fragment of the Dsg1 ectodomain), which is recognized by antibodies in serum from patients with all varieties of pemphigus foliaceus (PF), and from half of those with pemphigus vulgaris with active clinical disease. The cut-off and threshold values were normalized using human serum obtained from both endemic and non-endemic areas for PF. The efficiency of this ELISA was tested using 600 serum samples from controls and patients diagnosed with EPF, non-endemic PF and other bullous diseases. The overall sensitivity and specificity of the assay were determined to be 95% and 72%, respectively, with reproducibilities of 98% (intraassay) and 95% (interassay). Comparing the ELISA with other tests to detect EPF autoantibodies, this ELISA was the most sensitive, followed by direct immunofluorescence (DIF), indirect immunofluorescence using anti-IgG4 monoclonal antibodies and immunoprecipitation (IP), respectively. The most specific assay was IP, followed by DIF. Immunoblotting to Dsg1 exhibited both poor sensitivity and poor specificity, although plectins were well visualized. We conclude that this ELISA is an excellent tool for field serological studies, allowing testing of multiple serum samples simultaneously and for detecting, with appropriate restriction and sensitivity, the heterogeneous antibody population seen in patients with this variant of EPF. Finally, autoantibody serum levels obtained with this ELISA correlated well with the clinical activity and extent of disease in patients with El Bagre EPF.

Ateraciones en el extendido de sangre periferica en las inmunodeficiencias primarias / Alterations in the peripheal blood spreading in primary inmunodeficiencies

Los datos obtenidos a partir del extendido de sangre periférica son esenciales para el diagnóstico de diversas enfermedades, como en el caso particular de las inmunodeficiencias primarias, donde son considerados un parámetro clave. Las inmunodeficiencias primarias son un grupo de trastornos heterogéneos y complejos del sistema inmunológico, frecuentemente asociados con anormalidades en el número y/o en la morfología de las células sanguíneas. Estas alteraciones pueden ser observadas en un extendido de sangre periférica y fácilmente asociadas con algunas inmunodeficiencias en particular, brindando orientación para el diagnóstico y el tratamiento oportuno y adecuado de los pacientes. Esta revisión resume las alteraciones que pueden encontrarse en el estudio del extendido de sangre periférica de los pacientes con inmunodeficiencias primarias, recalcando la importancia de esta prueba en la práctica clínica, especialmente en la evaluación de los pacientes con alteraciones en el sistema inmune.

[Evaluation as a function of granulocytes in hyperimmunoglobulinemia E syndrome with recurrent infections]. / Evaluación de la función de los granulocitos en el síndrome de hiperinmunoglobulinemia E con infecciones recurrentes.

The hyper-IgE syndrome with recurrent infections (HIESRI) is characterized by skin and respiratory infections due to Staphylococcus aureus and several fungi infections which are frequently associated with tissue damage. A deficiency in the chemotaxis of phagocytic cells has been documented to explain these findings; however, the expression of adhesion molecules, the secretion of cytokines that activate granulocytes and the production of oxygen reactive molecules have not been evaluated in HIESRI. Six HIESRI patients were evaluated for the following parameters: (1) secretion of GM-CSF and IL-5 by mitogen and antigen-activated mononuclear cells, (2) the chemotactic response of FMLP-activated granulocytes, (3) the respiratory burst of PMA-activated granulocytes, and (4) the expression of L-selectin and CD11b in PMA-activated granulocytes. Human recombinant GM-CSF and culture supernatants were evaluated for capacity to modulate granulocytic function. Compared to controls, HIESRI patients showed a normal production of GM-CSF and an increase in the basal secretion of IL-5. No significant differences were observed for chemotaxis, respiratory burst or L-selectin and CD11b expression. The GM-CSF did not modulate these functions in granulocytes from HIESRI patients, but culture supernatants applied to granulocytes inhibited chemotaxis, increased respiratory burst and caused the shedding of L-selectin from the granulocyte surface. The 6 HIESRI patients were nonsymptomatic during the time of this research due to a program of continued treatment; findings suggest that granulocytes are activated more easily in response to proinflammatory factors and that production of these factors is higher in HIESRI.

Evaluación de la función de los granulocitos en el síndrome de hiperinmunoglobulinemia E con infecciones recurrentes / Evaluation of granulocyte function in the hyper immunoglobulin E syndrome associated with recurrent infections

El síndrome de hiper-IgE con infecciones recurrentes (SHIEIR) se caracteriza por infecciones de la piel y el aparato respiratorio causadas especialmente por Staphylococcus aureus y algunos hongos, infecciones que se asocian frecuentemente con daño tisular. Para explicar esta evolución clínica se ha documentado en el SHIEIR una deficiencia en la quimiotaxis de las células fagocíticas, pero no se ha evaluado la expresión de las moléculas de adhesión que regulan este fenómeno. Además, a pesar del daño tisular observado en este trastorno, no se ha estudiado la producción de citocinas activadoras de los granulocitos ni la producción de moléculas reactivas derivadas del oxígeno. En seis pacientes con SHIEIR se evaluó la secreción de GM-CSF e IL-5 de las células mononucleares cultivadas con mitógenos y antígenos, la quimiotaxis de los granulocitos inducida por el N-formil-metionil-leucina-fenilalania (FMLP) bajo gel de agarosa, la explosión respiratoria de los granulocitos después de la activación con forbol-miristato-acetato (PMA) determinada por citometría de flujo y la expresión de las moléculas de superficie L-selectina y CD11b en los granulocitos activados con PMA. Además, se determinó la modulación ejercida sobre estas funciones de los granulocitos por el GM-CSF y los sobrenadantes de cultivos. Con respecto a los controles, los pacientes con SHIEIR presentaron una producción normal de GMCSF y un aumento en la secreción basal de IL-5, mientras que no existieron diferencias significativas en la quimiotaxis, la explosión respiratoria y la expresión de L-selectina y CD11b.

Características cefalométricas y antropométricas craneofaciales de los pacientes con síndrome de hiperinmunoglobulinemia "E" con infecciones recurrentes (SHIEIR) / Cephalometric and anthropologic craniofacial characteristics of patients with hyperglobulinemia E and recurrent infections

El propósito de este estudio realizado en los pacientes con síndrome de hipe-inmunoglobulinemia E con infecciones recurrentes (SHIEIR) fue analizar por medio de radiografías cefálica lateral y posteroanterior de cabeza, las características cefalométricas comunes entre ellos. También se realizaron mediciones antropométricas cranofaciales, para luego compararlas con estándares internaciones y de esta manera, junto con el análisis radiográfico, definir con mayor exactitud las características craneofaciales de estos pacientes. En 8 pacientes entre tres y veintún años, con niveles de inmunoglobulina E (IgE) sérica mayorees de 2000 UI/mL y con historia típica de SHIEIR (según criterios OMS), se realizaron historia clínicas estomatológicas, RX periapicales, panorámicas, cefálicas laterlaes y frontales, estudios fotográficos, modelos en yeso y mediciones antropométricas. Como característica cefalométrica común se encontró que todos los pacientes tenían el ángulo goníaco aumentado; no se encontraron asimetrías marcadas que comprometieran clínica o estéticamente a los pacientes. En cuanto a las mediciones antropométricas, se encontró aumento en la distancia intercantal interna, intercantal externa, amplitud nasal y longitud nasal en los pacientes con SHIEIR en edad de crecimiento