Macrophage HIV-1 infection in duodenal tissue of patients on long term HAART.

Mucosal surfaces play a major role in human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) transmission and pathogenesis. Since the role of intestinal macrophages as viral reservoirs during chronic HIV-1 infection has not been elucidated, we investigated the effects of successful therapy on intestinal HIV-1 persistence. Intestinal macrophage infection was demonstrated by the expression of p24 antigen by flow cytometry and by the presence of proviral DNA, assessed by PCR. Proviral DNA was detected in duodenal mucosa of HIV-infected patients under treatment with undetectable plasma viral load. These findings confirm that intestinal macrophages can act as viral reservoirs and permit HIV-1 production even after viral suppression following antiretroviral therapy.

Increased lymphocyte viability after non-stimulated peripheral blood mononuclear cell (PBMC) culture in patients with X-linked lymphoproliferative disease (XLP).

Survival of lymphocytes after prolonged culture was studied in two asymptomatic XLP patients. Viability of XLP PBMC after 30 days of non-stimulated culture was higher than that of normal controls (N), mainly due to the persistence of CD8 memory lymphocytes. IFNgamma high CD8 T lymphocytes remained higher in XLP than in N after 30 days. The number of perforin+ CD8 lymphocytes was markedly reduced after 30 days in XLP and in N. Increased viability was not related to CD127, PD-1, CD27, or CD62L expression. Concerning B lymphocytes, memory CD27+ CD19+ cells prevailed over CD27- cells after 30 days in both XLP and N, with far more surviving cells in XLP. In N, few CD19+ B lymphocytes were viable after prolonged culture. In XLP, these cells were also IgD+, IgM+ and EBNA2+. These results demonstrate that IFNgamma-positive memory CD8 T cells persist in XLP after prolonged culture in association with a subset of viable memory CD27+ B cells expressing latent EBV antigens. The survival advantage of XLP cells might be related to increased frequency of extranodal lymphoma in XLP patients.

[The role of dendritic cells in the infection by HIV and HCV]. / Papel de las celulas dendriticas en la infeccion por HIV y HCV.

Dendritic cells are most important as antigen presenting cells during the induction of an effective immune response. Therefore, it is important to study their role during the generation of persistent or chronic viral infections, such as HIV or HCV infection. In this review we shall describe the phenotypic and functional characteristics of the different classes of dendritic cells and of their membrane receptors. Their participation in defence or facilitation mechanisms involved in the immune response against these viruses will be discussed. It is important to take this knowledge into account when trying to design therapeutic strategies for protection or reconstruction of the immune system that may be altered as a consequence of infection with HIV or HCV.

Impact of human immune deficiency virus infection on hepatitis C virus infection and replication.

Human immune deficiency virus (HIV) and human hepatitis C virus (HCV) infection are frequent in patients who have been exposed to blood or blood-derived products. It has been suggested that HIV infection increases HCV replication altering the course of HCV-related disease. However, it is not known if HIV directly enhances HCV replication or if its effect is the consequence of HIV infection of other cell types that control HCV replication (lymphocytes, macrophages). While the main cell targets for HIV infection are mononuclear leukocytes bearing CD4 and the chemokine receptors CCR5 and CXCR4, HCV was originally thought to be strictly hepatotropic, but it is now known that HCV can also replicate in peripheral blood mononuclear cells (PBMC). Therefore, in co-infected individuals, these two different viruses could share cell targets and interact either directly or indirectly. Some membrane receptors can be used by both HCV and HIV for entry into target cells, but the intracellular mechanisms shared by these viruses are not known. Lack of experimental systems providing suitable methods for the study of HCV replication in the presence or absence of HIV co-infection has hampered advances in this research area, but recent investigations are currently going on in order to answer these questions. This is an important issue, as knowledge of HIV/HCV interactions is required for the design of effective antiviral therapies.

Papel de las células dendríticas en la infección por HIV y HCV / The role of dendritic cells in the infection by HIV and HCV

Las células dendríticas son las principales células presentadoras de antígenos para el montaje de la respuesta inmune. Por lo tanto es importante estudiar de qué manera intervienen en el equilibrio que el sistema inmune desarrolla frente a infecciones virales persistentes como la infección por el HIV o el HCV. En esta revisión se presentan en primer término generalidades sobre las diferentes clases de células dendríticas, las características fenotípicas y funcionales que las definen y los receptores que pueden estar involucrados en la infección viral. Luego se analiza su participación en los mecanismos de defensa o facilitadores de la infección por estos virus. Es importante tener en cuenta estos conocimientos para poder diseñar adecuadas estrategias de vacunación o protección y para intentar la reconstrucción funcional del sistema inmune impidiendo la subversión de los mecanismos inmunes de defensa causada por la infección con el HIV y el HCV.

Dendritic cells are most important as antigen presenting cells during the induction of an effective immune response. Therefore, it is important to study their role during the generation of persistent or chronic viral infections, such as HIV or HCV infection. In this review we shall describe the phenotypic and functional characteristics of the different classes of dendritic cells and of their membrane receptors. Their participation in defence or facilitation mechanisms involved in the immune response against these viruses will be discussed. It is important to take this knowledge into account when trying to design therapeutic strategies for protection or reconstruction of the immune system that may be altered as a consequence of infection with HIV or HCV.

HIV-1 infection and chemokine receptor modulation.

In addition to the CD4 molecule that binds to the human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) envelope glycoprotein gp120, productive HIV-1 infection requires interaction with cellular receptors for alpha- or beta- chemokines (CXCR4 and CCR5 respectively). Isolates of HIV-1 exhibit different tropism depending on the chemokine receptor type that they use to infect their cellular targets. HIV-1 strains that use preferentially CCR5 are known as R5 strains. They are more frequently found in asymptomatic individuals during the initial stages of the disease and are involved in the transmision of infection from mother to child. HIV-1 species using CXCR4 (X4 strains) are observed mainly in patients with advanced disease. While X4 isolates are associated with syncitium formation, in general R5 strains are not. Interaction of X4 and R5 with their specific receptors is necessary to establish productive HIV-1 infection and trigger a series of intracellular signals. Modulation of CXCR4 and CCR5 expression after HIV-1 infection is one of the results of such interaction and may have important consequences on the course of the infection. Down regulation of CCR5 and CXCR4 after HIV-1 infection could be the result of indirect events linked to HIV-1 infection, such as the induction of alpha- or beta-chemokines competing with the virions for receptor binding. They could also reflect direct effects of HIV-1 on chemokine-receptor turnover. In this review, the mechanisms of modulation of CXCR4 and CCR5 expression after HIV-1 infection will be discussed.

Loss of circulating CD27+ memory B cells and CCR4+ T cells occurring in association with elevated EBV loads in XLP patients surviving primary EBV infection.

Detailed longitudinal studies of patients with X-linked lymphoproliferative disease (XLP) may increase our understanding of the immunologic defects that contribute to the development of lymphoma and hypogammaglobulinemia in XLP. We describe progressive changes observed in immunoglobulin concentrations, lymphocyte subsets, and Epstein-Barr virus (EBV) loads occurring in a 2-year period in a newly infected, but otherwise healthy, carrier (patient 9). We compare these findings with those observed in the patient's brother, who had hypogammaglobulinemia and XLP (patient 4). Immunoglobulin G (IgG), IgM, and IgA concentrations increased in patient 9 during acute EBV infection, but thereafter they decreased steadily to concentrations consistent with hypogammaglobulinemia, reaching a plateau 5 months after infection. In both patients, CD19+ B-lymphocyte rates remained lower than 3%, with a contraction of the B-cell memory compartment (CD27+ CD19+/CD19+) to 20% (normal range, 32%-56%). T-lymphocyte subpopulations showed a reduction in CD4+ T-cell counts and a permanent CD8+ T-cell expansion. Interestingly, CXCR3 memory TH1 cells were expanded and CCR4+ TH2 lymphocytes were reduced, suggesting that abnormal skewing of memory T-cell subsets might contribute to reduced antibody synthesis. Despite an expanded number of CD3+CD8+ lymphocytes, increased EBV loads occurred in both patients without overt clinical symptoms of mononucleosis, lymphoproliferative disease, or lymphoma.

[X-linked lymphoproliferative syndrome, EBV virus infection and defects in cytotoxicity lymphocyte regulation]. / Sindrome linfoproliferativo ligado al cromosoma X, infección por el virus EBV y defectos en la regulación de la citotoxicidad linfocitaria.

Mutations in SH2D1A, a gene that codifies for the regulatory protein SAP, result in uncontrolled activation of the SLAM (signaling lymphocyte-activation molecule) pathway. This X-linked immunodeficiency becomes evident when the patients are infected with Epstein Barr virus (EBV) and develop a fulminant form of infectious mononucleosis leading to a lymphoproliferative syndrome that is often fatal (X-linked lymphoproliferative syndrome, XLP). In those who survive, hypogammaglobulinemia and oncohematologic diseases are frequently observed. In this revision, the immuno-regulatory mechanisms involved in XLP immunopathology and the role of different effector cells (CD8 T lymphocytes, NK cells) are discussed.

Sindrome linfoproliferativo ligado al cromosoma X, infeccion por el virus EBV y defectos en la regulacion de la citotoxicidad linfocitaria / X-linked lymphoproliferative syndrome, EBV virus infection and defects in cytotoxicity lymphocyte regulation

Mutations in SH2D1A, a gene that codifies for the regulatory protein SAP, result in uncontrolled activation of the SLAM (signaling lymphocyte-activation molecule) pathway. This X-linked immunodeficiency becomes evident when the patients are infected with Epstein Barr virus (EBV) and develop a fulminant form of infectious mononucleosis leading to a lymphoproliferative syndrome that is often fatal (X-linked lymphoproliferative syndrome, XLP). In those who survive, hypogammaglobulinemia and oncohematologic diseases are frequently observed. In this revision, the immuno-regulatory mechanisms involved in XLP immunopathology and the role of different effector cells (CD8 T lymphocytes, NK cells) are discussed

Decreased recovery of replication-competent HIV-1 from peripheral blood mononuclear cell-derived monocyte/macrophages of HIV-positive patients after 3 years on highly active antiretroviral therapy.

We studied the release of p24 antigen from peripheral blood mononuclear cell-derived monocyte/macrophages obtained from 13 HIV-positive patients receiving highly active antiretroviral therapy (HAART). Although HIV-infected monocyte/macrophages were detected in 80% of patients after 36 months of continuous treatment, additional exposure to HAART reduced the chance of detecting HIV-releasing monocyte/macrophages. Therefore, after more than 3 years of HAART, recently infected monocytes may play a less important role as a source of emerging HIV-1 upon HAART interruption.

Expresión de co-receptores para el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) luego del cultivo de leucócitos mononucleares (LM) de pacientes VIH+ / Human immunodeficiency virus (HIV) co-receptors expression in mononuclear leucocytes (ML) of HIV+ patients

Se estudiaron variaciones en la expresión de los co-receptores CXCR4 y CCR5 luego del cultivo no estimulado de LM de pacientes VIH+ por periodos de 3 a 20 días. El porcentaje de células CCR5+ descendió tanto en linfocitos T CD4+ como en T CD8+ luego de 7 días, manteniéndose disminuido hasta los 20 días. En cambio los niveles de CXCR4 se mantuvieron estables durante el cultivo en ambas subpoblaciones. En los cultivos de LM de donantes VIH- no hubo cambios significativos en la expresión de CCR5 ni en la de CXCR4. Para comprobar si la disminución de CCR5 estaba asociada a la replicación viral, se infectaron LM VIH- (pre-cultivados por 6 días) con sobrenadantes de cultivos de LM VIH+. Luego de 3 días de infección, la expresión de CCR5 se redujo tanto en linfocitos T CD4+ como en linfocitos T CD8+ , coincidiendo con la replicación viral durante el cultivo.

Macrófagos infectados por HIV aislados de pacientes HIV+ con carga viral indetectable luego del tratamiento antirretroviral combinado / HIV infected macrophages isolated from HIV+ patients with undetectable viral load undergoing combined antiretroviral treatment

Se desarrolló un método de cultivo prolongado de células mononucleares periféricas, sin estímulo (CMP s/e) que permite la proliferación y diferenciación completa de los macrófagos (M). Con el mismo se demostró la replicación in vitro del HIV en pacientes HIV+ con carga viral negativa luego de más de un año de tratamiento HAART. Las células infectadas siempre fueron M. Utilizando el sistema estándar de co-cultivo con CPM activadas con PHA e IL-2 (CM-PHA) no se habían logrado aislamientos de estos pacientes. Los sobrenadantes (SN) con p24> 65 pg/ml fueron infectivos para target CMP s/e normales, pre-cultivados 6-7 días. Em comparación se utilizaron CMP-PHA. Em CMP predominan los M proliferantes (CD64+, Ki67+) y en CMP-PHA los blastos T (CD3+, Ki67). La expresión de CCR5 fue mayor en CMP s/e que en CMP-PHA. Estas diferencias pueden explicar por qué el sistema CMP s/e es má sensible que CMP-PHA para detectar la infección por HIV en pacientes asintomáticos con carga viral indetectable, con cepas de HIV macrófago trópicas (R5).

Aumento de CD4 en monocitos de pacientes con Hemofilia VIH positivos / Increased CD4 in monocytes from HIV+ Hemophilia patients

El sistema monocito macrofágico (M/M) juega un papel central en la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y la expresión del antígeno CD4 sobre la superficie del M/M es un factor clave para la entrada del VIH a células susceptibles. En este trabajo evaluamos los niveles del receptor CD4 en monocitos de pacientes con hemofilia (He) infectados o no con el VIH (He-VIH+). Se estudiaron treinta pacientes He-VIH+, cuatro pacientes seronegativos (He-VIH-) y veinte dadores normales voluntarios. La evaluación fenotípica de los monocitos fue realizada por citometría de flujo a partir de sangre periférica teñida con anticuerpos monoclonales anti CD45, CD3, CD4 y CD14. Se encontró que el porcentaje de monocitos CD4+ estaba incrementado en todos los grupos de pacientes (incluyendo He-VIH-), pero fue más alto en pacientes sintomáticos He-VIH+. Además el valor más frecuente de intensidad de fluorescencia para CD4 de la población de monocitos de estos pacientes, estaba desplazado hacia zonas de mayor intensidad respecto de los individuos normales. Esto indicaría una expresión incrementada del número de moléculas CD4 sobre la membrana celular de los monocitos. Las características de esta células en los pacientes He-VIH+, podrían favorecer la persistencia y la diseminación viral.

Apoptosis linfocitaria y evolución clínica en pacientes con hemofilia hiv positivos / Apoptossis and clinical evolution in HIV positive hemophilic patients

Se han postulado diversas hipótesis para explicar los defectos cuali y cuantitativos de los linfocitos T CD4+, en los pacientes HIV+. Ultimamente se ha sugerido que la apoptosis podría estar involucrada en la depleción linfocitaria observada, ya sea por acción del virus o por acción secundaria a la estimulación antigénica. El objetivo de nuestro trabajo fue determinar el IA en HeHIV+ sintomáticos. Se estudiaron 32 HeHIV+ agrupados según la clasificación del CDC en HI, IVA y IVCI. Se evaluaron morfológicamente los linfocitos periféricos en cultivos de 48 horas estimulados o no con anti-CD3. La apoptosis se valoró por medio de coloración, con naranja acridina y bromuro fr etidio. En todos los grupos de HeHIV+ el IA se encontraba muy elevado en los cultivos sin estimular, con respecto a los normales (p<0,001); tambiéen eran significativamente mayor en los HeHIV+ del grupo CDC IVCI con respecto al grupo CDC HI. Por los resultados obtenidos se comprobaría que en los HeHIV+ sintomáticos la estimulacín in vitro produce apoptosis en un porcentaje elevado de los linfocitos circulantes. El IA sería de utilidad en el seguimiento de los pacientes por su relación con el cuadro clínico

Apoptosis: su papel en la ontogenia del sistema inmune y en la infeccion por HIV / Apoptosis: its role in the immune system ontogeny and in HIV infection

La apoptosis es un proceso que se caracteriza por la puesta en marcha de un programa letal genéticamente controlado que culmina en la muerte celular, con disminución del volumen, condensación de la cromatina y fragmentación del ADN nuclear. Es un mecanismo fisiológico por el cual se eliminan las células no deseadas o senescentes, sin causar inflamación. Interviene en la selección del repertorio de linfocitos en el timo, en el control de la proliferación celular y tumoral; además puede estar involucrado en el desarrollo de patología autoinmune o en la depleción linfocitaria que ocurre a consecuencia de infecciones virales, tales como el DISA. Se presenta una revisión de los mecanismos de apoptosis, especialmente dentro del sistema inmune, y de las técnicas más frecuentemente empleadas para su valoración

Infeccion por HIV-1 en pacientes con hemofilia: la experiencia argentina desde 1983 hasta 1990 / HIV-1 infection in patients with hemophilia: the Argentinian experience from 1983 to 1990

Se presentan los resultados del estudio de la evolución de la infeción por HIV-1 en los pacientes con hemofilia que recibieron tratamiento con concentrados antihemofílicos (CAH) de origen comercial y fueron atendidos en nuestro Instituto entre 1983 y 1990. La prevalência de la infección por HIV-1 fue de 30% sobre 638 pacientes estudiados, siendo mayor en el grupo con hemofilia severa (que tuvo mayor requerimiento de CAH). No hubo diferencias de seropositividad entre hemofilia A y B. La transmisión sexual de la infección se comprobó en 8/64 (13%) de las mujeres con relación sexual estable con los pacientes hemofílicos. Tres de ellas tuvieron embarazos durante el período posterior al contagio y en dos de los hijos se comprobó transmisión perinatal de HIV-1. Tanto la evolución clínica como los parámetros hematológicos e inmunológicos de los pacients infectados fueron similares a los descritos en la población hemofílica de otros países de Occidente. Las infecciones oportunistas observadas fueron las habituales, pero se destaca la presencia de encefalitis chagásica fatal en dos de los pacientes con SIDA. Por lo tanto, la localización de T. cruzi en el sistema nervioso central debe considerarse especialmente como complicación severe que puede ocurrir en los pacientes con SIDA y serología positiva para T. cruzi

Suppression of T cell proliferation induced by concanavalin A in hemophilia patients

Se valoró la función supresora inducida por Concanavalina A (Con A) en 48 pacientes con hemofilia severa. Cuando se adicionaron cantidades variavles de células inducidas por Con A a un número constante de células T autólogas estimuladas por PHA, se pudieron diferenciar dos grupos de pacientes: en el grupo A (60%) así como en los controles normales, los valores de supresión obtenidos fueron superiores al agregar mayor número de células inducidas por Con A; en el grupo B el agregado en cantidades crecientes de células inducidas por Con A no produjo supresión de la proliferación de células T estimuladas con PHA. El efecto observado en el grupo B pudo ser corregido con inhibidores del metabolismo exidativo del ácido araquidónico presentes durante la etapa de inducción. Los perfiles de supresión definidos no guardaron correlación con la serología para HIV-1 o HBV. Al valorar la evolución clínica, teniendo en cuenta los síntomas y signos del complejo relacionado al SIDA, ésta tendió a ser mejor en el grupo B de pacientes. Se sugiere que la disminución de la actividad supresora inducida por Con A observada en el grupo B es el resultado de un proceso regulatorio normal que involucra productos del metabolismo oxidativo del ácido araquidónico