Genotyping of HBV and tracking of resistance mutations in treatment-naïve patients with chronic hepatitis B.

BACKGROUND AND AIMS: Resistance mutation analogs to nucleos(t)ides have been described in treatment-naïve patients with chronic hepatitis B (CHB), with clinical implications. The aim of this study was to investigate primary resistance mutations and genotypes circulating in patients naïve to chronic hepatitis B, in the Northern and Northeastern regions of Brazil. METHODS: We conducted a study of resistance mutations and genotypic characterization of hepatitis B virus (HBV) in 189 treatment-naïve patients chronically infected with HBV. RESULTS: Drug resistance-associated mutations located in the RT domain of the P gene (rtHBV) were found in 6% of the treatment-naïve patients from the Northeastern Region. The mutations were rtA194T, rtL180M + rtM204V, rtS202I, rtM204I, and rtA181S. No patient in the Northern Region had the resistance mutation. In the gene S region, the frequency of vaccine escape mutations was 2.4% in the Northeastern Region and 8.6% in the Northern Region. CONCLUSION: This information before the start of treatment may contribute to clinical decision making, reducing treatment failure and the risk of progression to cirrhosis and hepatocellular carcinoma for CHB.

Comparação de dois testes automatizados por quimioluminescência para a detecção de anticorpos contra o vírus da hepatite C / Comparison of two automated chemiluminescence tests for the detection of antibodies against the hepatitis C virus

INTRODUÇÃO: O diagnóstico correto da infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) é de grande importância, já que o tratamento é altamente dispendioso e tem sérios efeitos colaterais. Os testes para a detecção dos anticorpos contra o VHC (anti-VHC) sofreram várias modificações e, atualmente, os testes de terceira geração são amplamente utilizados por terem sensibilidade e especificidade maiores. OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi comparar dois testes automatizados para a detecção do anti-VHC por quimioliminescência, de terceira geração, disponíveis comercialmente. MÉTODOS: Foram utilizadas 67 amostras da soroteca do Laboratório Central de Saúde Pública do Estado da Bahia. Os reagentes utilizados foram os testes automatizados ARCHITECT® anti-HCV assay (Abbott Diagnostics, Wiesbaden, Alemanha), Elecsys® anti-HCV assay (Roche Diagnostics, Basileia, Suíça) e o teste confirmatório Recombinant Immunoblot Assay (RIBA) (Chiron RIBA VHC 3.0 SIA, Chiron Corporation, Emeryville, CA, EUA). RESULTADOS: Com o teste Architect anti-HCV assay foram obtidas 18 amostras positivas, 39 negativas e dez indeterminadas, enquanto que com o Elecsys anti-HCV assay, 47 amostras foram negativas e 20 positivas. Não houve amostras indeterminadas com este teste. Das dez amostras indeterminadas no Architect anti-HCV assay, cinco foram negativas pelo teste RIBA e cinco foram indeterminadas. Todas as amostras indeterminadas pelo RIBA apresentaram reatividade para a proteína c33. CONCLUSÃO: Os dois testes, quando comparados (62 amostras) entre si, tiveram uma concordância de 91,9 por cento. O Elecsys anti-HCV assay parece ser menos sensível que o Architect anti-HCV assay, em particular para a detecção da proteína c33, revelada pelo RIBA. Por outro lado, o Architect anti-HCV assay apresentou um maior número de resultados indeterminados em amostras negativas confirmadas pelo RIBA, o que sugere uma menor especificidade, quando comparado com o outro teste avaliado.

INTRODUCTION: A correct diagnosis of hepatitis C virus (HCV) infection is important because treatment is highly expensive and has severe side effects. The assays for the detection of antibodies against HCV (anti-HCV) have undergone several changes, and third-generation tests have been widely used due to their increased sensitivity and specificity. OBJECTIVE: In this study, we aimed to compare two commercially available, automated third-generation chemiluminescence tests for the detection of anti-HCV antibodies. METHODS: We analyzed 67 samples from the serum databank from the Laboratório Central de Saúde Pública do Estado da Bahia (LACEN-BA). The reagents examined were the automated ARCHITECT® anti-HCV assay (Abbott Diagnostics, Wiesbaden, Germany) and Elecsys® anti-HCV assay (Roche Diagnostics, Basel, Switzerland) tests and the confirmatory Recombinant Immunoblot Assay (RIBA) test (Chiron RIBA VHC 3.0 SIA, Chiron Corporation, Emeryville, CA, USA). RESULTS: The Architect anti-HCV assay indicated 18 positive samples, whereas 39 were negative and ten were indeterminate. The Elecsys anti-HCV assay indicated 47 negative and 20 positive samples and no indeterminate samples. Of the ten indeterminate samples indicated by the Architect anti-HCV assay, five were negative by the RIBA test and five were indeterminate. All indeterminate samples indicated by the RIBA test were reactive against the c33 protein. CONCLUSION: The agreement between the two tests (62 samples) was 91.9 per cent. The Elecsys anti-HCV assay appears to be less sensitive than the Architect anti-HCV, particularly for the detection of the c33 protein shown by the RIBA test. In addition, the Architect anti-HCV assay indicated more indeterminate results out of the negative samples confirmed by the RIBA test, which suggests a lower specificity than the Elecsys anti-HCV assay..

Increased frequency of CD56Bright NK-cells, CD3-CD16+CD56- NK-cells and activated CD4+T-cells or B-cells in parallel with CD4+CDC25High T-cells control potentially viremia in blood donors with HCV.

A detailed phenotypic analysis of major and minor circulating lymphocyte subsets is described in potential blood donors with markers of hepatitis C virus (HCV), including non-viremic and viremic groups. Although there were no changes in the hematological profile of either group, increased the levels of pre-NK cells (CD3-CD16+CD56-) and a lower frequency of mature NK cells (CD3-CD16+CD56+) characterized innate immunity in the non-viremic group. Both non-viremic and viremic groups displayed significantly increased levels of CD56(Bright) NK cells. Furthermore, this subset was significantly elevated in the viremic subgroup with a low viral load. In addition, an increase in the NKT2 subset was observed only in this subgroup. An enhanced frequency of activated CD4+ T-cells (CD4+HLA-DR+) was a characteristic feature of the non-viremic group, whereas elevated CD19+ B-cells and CD19+CD86+ cell populations were the major phenotypic features of the viremic group, particularly in individuals with a low viral load. Although CD4+CD25High T-cells were significantly elevated in both the viremic and non-viremic groups, it was particularly evident in the viremic low viral load subgroup. A parallel increase in CD4+CD25High T-cells, pre-NK, and activated CD4+ T-cells was observed in the non-viremic group, whereas a parallel increase in CD4+CD25High T-cells and CD19+ B-cells was characteristic of the low viral load subgroup. These findings suggest that CD56Bright NK cells, together with pre-NK cells and activated CD4+ T-cells in combination with CD4+CD25High T-cells, might play an important role in controlling viremia. Elevated CD56(Bright) NK cells, B-cell responses and a T-regulated immunological profile appeared to be associated with a low viral load.

Estudo da resposta imune na infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) / Study of immune response in infection by hepatitis C virus (HCV)

Os mecanismos da resposta imune que ocorrem na infecção pelo VHC em humanos ainda não estão totalmente esclarecidos. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a resposta imune em doadores de sangue soropositivos para o VHC (VHC+), não virêmicos e virêmicos e comparar os resultados com aqueles observados no grupo controle de não infectados (NI). As citocinas foram dosadas no soro pelo Kit CBA (cytometric bead array; BD) e os marcadores de superfície celular foram determinados nas células mononucleares do sangue periférico por análise de citometria de fluxo. Foram observadas freqüências aumentadas de altos produtores de IL-113 e IL-B no grupo não virêmico, enquanto um aumento nas freqüências de altos produtores de IL-5, IL-10 e IL-12 foi observado no grupo virêmico. Houve um aumento seletivo na freqüência de altos produtores de IL-113 no subgrupo dos não virêmicos com teste confirmatório para o anti-VHC (R/BA) indeterminado, enquanto um aumento na freqüência de altos produtores para IL-B foi restrito ao subgrupo dos não virêmicos com RIBA positivo. Este mesmo subgrupo também apresentou além do aumento na freqüência de altos produtores para a IL-4, freqüências aumentadas de altos produtores de IL-6, IL-10 e IL-12, como no grupo virêmico. No grupo virêmico foi demonstrado um aumento dos níveis de IL-113, IL-B e TNF-a nos indivíduos com valores baixos de alanina-aminotransferases (AL T), enquanto níveis mais altos de IL-2 e IFN-y foram observados naqueles com valores elevados de AL T. Além disso, foram observados níveis aumentados de IL-6, IL-10 e IL-12 particularmente naqueles com carga viral baixa. Apesar de não haver modificações no perfil hematológico nos dois grupos estudados, níveis aumentados de células pré-NK (CD3-CD16+CD56-), diminuição das células NK maduras (CD3-CD16+CD56+) e aumento da freqüência de células T CD4+ ativadas (CD4+HLA-DR+) foram características da imunidade inata no grupo não virêmico. Apesar de ambos os grupos, virêmico e não virêmico, apresentarem altos percentuais de células NK CD56 Brigh esta população foi particularmente mais elevada no subgrupo dos virêmicos com carga viral baixa. O aumento do percentual de células B (CD19+) e de células CD19+CDB6+ foram as principais características do grupo virêmico, especialmente naqueles apresentando carga viral baixa. Apesar das células CD4+CD25High estarem elevadas em ambos os grupos VHC+, o aumento desta subpopulação de células T regulatórias (Treg) foi predominantemente observado no grupo virêmico que apresentava baixa carga viral. Nossos resultados sugerem que as citocinas pró-inflamatórias (IL-II3/IL-8/TNF -a), relacionadas principalmente com a resposta imune inata, estejam associadas com o início da infecção pelo VHC ou com uma infecção menos grave, enquanto as citocinas IL-2 e IFN-y, associadas com o perfil de imunidade adaptativa citotóxica, devem estar mais ligadas com o aumento de AL T, biomarcador de lesão hepática. Além disso, as células NK CD56 Bright, juntamente com as células pré-NK e células TCD4+ ativadas em paralelo com as células T regulatórias, podem ter um papel importante no controle da viremia na infecção pelo VHC. O aumento das respostas de células NK CD56Bright e de células B em paralelo com as células T regulatórias parece estar associada com a baixa carga viral.

Detecção do genótipo 4 do vírus da hepatite C em Salvador, BA / Detection of genotype 4 of the hepatitis C virus in Salvador, BA

É descrito o primeiro caso de detecção do genótipo 4 do vírus da hepatite C (VHC) em Salvador, BA. Foram utilizados os testes de RT-PCR para detecção do VHC-RNA, e o LIPA para genotipagem. O genótipo 4 responde mal ao tratamento, sendo portanto importante a busca ativa dos contactantes.

The first detected case of genotype 4 of the hepatitis C virus (HCV) in Salvador, Bahia, is described. RT-PCR tests were used to detect HCV-RNA, and LIPA was used for genotyping. Genotype 4 responds poorly to treatment, and it is therefore important to actively search for people who have been in contact with it.

[Detection of genotype 4 of the hepatitis C virus in Salvador, BA]. / Detecção do genótipo 4 do vírus da hepatite C em Salvador, BA.

The first detected case of genotype 4 of the hepatitis C virus (HCV) in Salvador, Bahia, is described. RT-PCR tests were used to detect HCV-RNA, and LIPA was used for genotyping. Genotype 4 responds poorly to treatment, and it is therefore important to actively search for people who have been in contact with it.